肖继明 唐平华 南京军区南京总医院干部心脏内科,南京军区老年病研究中心 江苏 南京 ２１０００２;南京工程高等职业学校 江苏 南京 ２１１１３５ 基金项目:南京军区南京总医院课题基金资助项目(批准号:２０１３０６３) 作者简介:肖继明(１９７４－),男,江苏盐城人,主治医师,医学硕士,从事心血管内科专业.通讯作者:唐平华,南京工程高等职业学校．
【摘要】 目的 建立兔实验性动脉粥样硬化和心肌梗死双模型.方法 选择２０只家兔,随机分普通饲料对照组１０只,高脂饲料组１０ 只,喂养９ 周.测定不同时期血脂水平.第９周末开胸结扎兔冠状动脉左前降支(LAD)建立兔急性心肌梗死模型.实验终点,苏丹Ⅲ染色测定主动脉斑块阳性面积;免疫组化染色测定心肌组织CD３４及VEGFR２阳性反应强度.结果 高脂组主动脉斑块阳性面积高于对照组;高脂组心肌组织CD３４ 及VEGFR２阳性反应强度和对照组比较差异有显著性.结论:高脂饲料喂养和开胸结扎兔冠状动脉LAD的方法可成功建立家兔动脉粥样硬化和急性心肌梗死双模型. 【关键词】 动脉粥样硬化; 急性心肌梗死; 动物模型【Abstract】 Objective:Toestablisharabbitmodelofatherosclerosisandmyocardialinfarction．Methods:２０rabbitswererandomlydividedinto２groups,１０ratsinhighfatdietgroupand９weeksafterfeeding．Bloodlipidlevelsweremeasuredatdifferenttimes．Attheendofthenineweeks,acutemyocardialinfarctionwasproducedbyopeningchestandligaturingLADofcoronaryartery．Attheendoftheexperiment,thepositiveareaofaorticplaquewasmeasuredinSultanⅢstainingandCD３４andVEGFR２inmyocardiumwasdeterminedbyimmunohistochemicalstaining．Results:TheplaquepositiveareaofhighfatgroupwassignifiＧcantlyincreasedthancontrolgroup．DifferenceofCD３４andVEGFR２positivereactionbetweenhighfatgroupandcontrolgroupweresignificant．Conclusion:HighfatdietfeedingandligationoftheLADoftherabbitcoronaryarterycanbesuccessfullyestablishedintherabbitmodelofatherosclerosisandautemyocarＧdialin【fKaeryctiwoonrd．s】 Atherosclerosis; Acutemyocardialinfarction; Animalmodel 【中图分类号】R７４３R９９４．６【文献标识码】A 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１０－０５７６－０２
引言本实验拟建立一种稳定、可靠的兔动脉粥样硬化及急性心肌梗死双模型, 通过一些典型的生化指标及病理指标进行评价,为AS及AMI的防治研究奠定基础,也为药物干预的疗效评价提供平台.[１、２]
１ 材料和方法
１．１ 实验动物大耳白家兔,体重１．８－２．２kg,雌雄各半,由南京金陵种兔场提供(实验动物生产许可证:SCXK(苏)２０１２－０００３;实验动物使用许可证:SYXK(苏)２００７－００１７). １．２ 主要仪器和试剂Sartorius电子天平,德国Sartorius公司;奥林帕斯DX４５显微镜,相机:DP７２;OLYMPUSAU５４００全自动生化分析仪;CD３４及VEGFR－２抗体,由南京恩晶生物科技有限公司提供. １．３ 模型制作与分组２０只兔随机分成普通饲料对照组,高脂饲料组各１０只.喂养９周,采用开胸结扎兔冠状动脉左前降支(LAD)的方法建立兔急性心肌梗死模型.观察到所结扎血管供血区域心肌颜色变暗,心电图胸前两个导联ST 段抬高,判定模型建立成功.
１．４ 血脂检测实验起点、第４周末及第９周末分别家兔耳缘静脉空腹抽血２mL 置枸缘酸抗凝管中,静置３０min后离心取血浆,采用酶法测定血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度胆固醇脂蛋白(LDL－C). １．５ 病理组织学检查取主动脉弓血管,纵向剖开,用Herxheimers液苏丹III(g)∶７０％ 乙醇(ml)∶丙酮(ml)＝１:１００:１００]对主动脉弓行大体染色２０min,处理切片,HE 染色,阅片.EnVision法行CD３４及血管内皮生长因子受体免疫组化染色,彩色病理图文分析系统,测量其灰度值,计算阳性组织相对灰度值＝阳性组织灰度值/背景灰度值. １．６ 统计方法检测结果用X±s表示,两组间比较用t检验,用SPSS１３．０ 进行统计分析,P＜０．０５有统计学差异.
２ 结果
２．１ 血脂测定第４周末高脂组家兔血脂水平(TC、LDL－C、TG)与实验前和同期对照组相比,均有显著性差异,P ＜０．０５;第９周末高脂组家兔血脂水平(TC、LDLC、TG)与实验前和同期对照组相比,均有极显著性差异,P ＜０．０１.见表１.
３ 讨论
本研究血脂测定结果显示,高脂组家兔血脂水平(TC、LDL－C、TG)呈进行性升高,与实验前和同期对照组相比,均有显著性差异.病理学检测是评价AS造模成功的重要指标.本文病理学检查表明(图１、２、３),心肌细胞嗜酸变性和空泡变性正常结构消失,管腔极度缩小,呈硬化性改变[３、４].动脉粥样硬化的进展过程中,血管新生是一个重要的伴随现象.CD３４及VEGFR２能促进内皮祖细胞分化为血管内皮细胞,参与血管新生.本研究发现,高脂组家兔心肌组织CD３４和VEGFR２阳性组织相对灰度值均明显高于对照组,提示CD３４和VEGFR２不仅参与动脉粥样硬化的进程,也参与了缺血心肌的血管新生. 综上所述,通过高脂饮食干预和开胸结扎兔冠状动脉LAD 的方法成功建立家兔动脉粥样硬化和急性心肌梗死双模型.为药物干预的疗效评价提供平台. 参考文献[１] 张美玲,王茁伉．动脉粥样硬化动物模型研究进展[J]．四川动物,２００９,２８ (５):７９４－７９７． [２] 刘念念,江时森．种族差异与动脉粥样硬化和冠心病的研究进展[J]．医学研究生学报,２０１１,２４(９):９９７－１００２． [３] 何新群,岳增辉,常小荣,等．动脉粥样硬化兔模型的建立及评价[J]．湖南中医药大学学报,２０１０,３０(９):２７－２９． [４] 贺香嫦,王超,严洁,等．兔急性心肌梗死及再灌注模型建立的研究进展[J]．湖南中医药大学学报,２０１３,３３(２):１０８－１１０．
论文作者:肖继明 唐平华
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年9月供稿
论文发表时间:2016/2/26
标签：心肌梗死论文; 家兔论文; 动脉论文; 南京论文; 粥样论文; 阳性论文; 模型论文; 《中国综合临床》2015年9月供稿论文;