广东产品质量监督检验研究院
摘要：食品中的粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲霉毒素B1的测定用实验室的仪器测试时间长、步骤复杂以及样本到实验室距离远耗费时间，使得食品在交易检测中没法快速检测出食品中的黄曲霉毒素B1浓度并判定其有害程度，本文主要是用常规的实验室测试方法和快速试剂盒测试方法来检测食物中的黄渡霉毒素B1的浓度，来进行检验快速检测方法的可行性。
关键词：食品检测；黄曲霉毒素；快速检测
前言
黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒代谢产物，他们有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液、动物饲料相关的产品中。其中黄曲霉毒素B1的毒性、致癌性、污染率均居于首位。薄层色谱一直是检测黄曲霉毒素常用的方法，但是此方法制备样品以及分析样品费时间又费力气，一种快速、精确、便捷的测试方式是急需的。下位将会采用实验方法和试剂盒检验方法，两者进行对比分析，来分析样本中黄曲霉毒素B1的残留。
一、实验准备
1.1实验原理
是采用间接竞争ELISA方法，在酶标板上预包被黄曲霉毒素B1抗原，样本中黄曲霉毒素B1和此抗原竞争黄曲霉毒素B1抗体（抗试剂），同时黄曲霉毒素B1抗体与霉标二抗（霉标物）相结合，经TMB底物显色，样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素B1呈负相关，与标准曲线比较再乘以其相对应的稀释倍数，即可得出样本中黄曲霉毒素B1的含量。
1.2适用范围
可定性、定量检测饲料以及饲料原料样本中黄曲霉毒素B1的含量。
1.3使用单位需要自备的设备以及试剂
微孔板酶标仪150nm/630nm；振荡器；恒温培养箱（室温能够达到25℃可不选）；离心机（或者选用定量滤纸、漏斗）；天平：精度0.01g；移液管：50ml；具塞三角瓶：100ml；带塞离心管：7ml；微量移液器：单道10ul-100ul、100ul-1000ml、多道30ul-300ul。试剂：去离子水。
1.4、提供的材料和试剂
1.5溶液的配置
配液1：60%甲醇，用去离子水将甲醛按3：2体积比进行稀释，即3份甲醇加2份去离子水。
1.6样本处理前的注意
实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时需要更换吸头；实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实验器具，避免污染干扰实验结果，处理好的样本应立即用于检测。饲料原料及饲料样本处理方法。粉碎并称取5.0g有代表性样本置入100ml具塞三角瓶中，加入60%甲醇25ml与其混合于振荡器上剧烈震荡10min，转速为150/min。
二、实验操作步骤
2.1.将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20-25℃）平衡1h以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2.2.取出需要数量的微孔板，将不同的微孔板放进原锡铝袋中并且与提供的干燥剂仪器重新密封，保存于2-8℃。
2.3.洗涤液在使用前也需回温。
2.4.请注意反应温度不宜过高，控制温度在20-25℃。
2.5.编号：将赝本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔样本孔所在的位置。
2.6.加标准品样本：加入标准品或样本50ul到对应的微孔中，加霉标物50ul/孔，再加入抗试剂50ul/孔，轻轻震荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光镜中反应15min。
2.7.洗板：小心揭开盖膜板，将孔内的液体甩干，用洗涤液250ul/孔，充分洗涤4次，每次间隔10s，在吸水纸上拍干。
2.8.显色：加入底物液100ul/孔（加底物液时请用多道移液器），用盖板膜盖板后置25℃避光环境反应5min。
2.9.测定：加入终止液50ul/孔（加终止液时请用多道移液器），轻轻震荡混匀，设定酶标仪于450nm处，建议用双波长450/630nm检测，在5min内读完数据，测定每孔的数值。
三、实验分析与计算与试剂盒结果分析比较
3.1判定方法
结果判定有如下两种方法，定性可用第一种方法，而定量判定使用第二种方式，注意样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素B1的量呈负相关。
3.1.1定性分析
用样本的平均吸光度值为0.659，样本2的吸光度值为1.525，标准液吸光度值分别是：0ug/kg为1.962；2.5ug/kg为1.609；7.5ug/kg为1.137；22.5ug/kg为0.571；75ug/kg为0.197.则样本1的浓度范围是7.5ug/kg~22.5ug/ug；样本2的浓度范围是2.5ug/kg~7.5ug/kg。
3.1.2定量分析
2.1百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值（双孔以上）除以第一个标准（0标准）的吸光值，再乘以100%，即
势，加上测试精度和灵敏度都不错，是一个可行并且大规模使用的测试食品中黄曲霉毒素的浓度。
参考文献：
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论文作者:刘辉,陈磊,韩振亚,叶为果,苏焕斌
论文发表刊物:《基层建设》2017年第19期
论文发表时间:2017/11/9
标签：毒素论文; 样本论文; 黄曲霉论文; 中黄论文; 曲霉论文; 试剂论文; 标准论文; 《基层建设》2017年第19期论文;