三峡食品药品检验检测中心，湖北 宜昌 443000
通讯作者：魏俊德 男，1963.8，主任药师，大学本科，学士学位，中药学。
摘要： 目的 建立测定红金丹灌洗液中丹皮酚含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法：以DiamonsilC18柱（250mm×4.6mm，5μm）为色谱柱,甲醇-水（45：55）为流动相，流速1.0mL·min-1,检测波长为274nm，采用外标法定量。结果 丹皮酚进样量在0.0222～0.556μg 范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999)；平均回收率为98.0%，RSD为0.1%（n=9）。结论 本法操作简便、结果稳定、可靠，可用于该制剂的质量控制。
关键词：高效液相色普法；丹皮酚；红金丹灌洗液
【中图分类号】R284.1【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)08-0352-01
HPLC Determination of Paeonol in Hongjindan Lotion
Qiu Haiyun,Wei Junde ， Yuan Caiqiong
(Three Gorges Center for Food and Drug Control,Hubei Yichang，443000)
Abstract: Objective To establish a HPLC method for determination of Paeonol in Hongjindan Lotion.Methods The Diamonsil C18 column(250mm×4.6mm,5μm)was used with methonal-water (45:55) as the mobile phase.The flowrate was 1.0mL·min-1 and detecting wavelength was 274nm. Results The linear range was0.0222～0.556μg (r=0.9999).The average recovery rate was 98.0%， RSD=0.1%(n=9).Conclusion This method is simple, rapid and reliable, which could be used in quality control of this preparation.
Key words：HPLC；Paeonol；Hongjindan Lotion
红金丹灌洗液是由大血藤、牡丹皮、金银花、延胡索、紫花地丁、败酱草、赤芍、木香、花椒、三棱、甘草11味药组成的中药复方制剂。具有清热除湿、活血化瘀、止痛的功效，用于治疗各类妇科炎症、结肠炎、便秘等症[1]。该品种的质量标准仅有大血藤的薄层色谱鉴别，为了进一步控制药品质量，确保制剂疗效，笔者采用高效液相色谱法对红金丹灌洗液主要成分牡丹皮中丹皮酚含量进行了测定，报道如下。
1 仪器和试药
Watres e2695 高效液相色谱仪；METTER—AE240电子分析天平。丹皮酚对照品（中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号为0708-9704）；甲醇为色谱纯；水为去离子双蒸馏水；其它试剂均为分析纯。红金丹灌洗液（湖北某学院附属医院提供，批号：140109、140308、140809）
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：DiamonsilC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（45：55）；流速1.0mL·min-1；检测波长为274nm；柱温：25℃
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取丹皮酚对照品0.1737g，置25ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理（功率300w，频率50kHz）15分钟，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取储备液2ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为第一步稀释对照品溶液（1）；再精密量取对照品溶液（1）2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（2），浓度为22.23μg/ml。
2.2.2供试品溶液 精密量取样品2ml，置25ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理（功率300w，频率50kHz）15分钟，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，放置，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液 取除牡丹皮外按处方量配制的阴性样品适量，精密称定，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
2.3 方法学考察
系统适用性试验：分别精密吸取对照品溶液（2）、供试品溶液、阴性对照溶液10μl，依法进样，色谱图见图1。丹皮酚保留时间约为39.5分钟。阴性对照溶液色谱中，在与对照品溶液色谱丹皮酚峰相应保留时间附近无干扰峰检出。理论塔板数以丹皮酚计算为15000。
线性关系考察 精密吸取按“2.2.1”项下方法配置的对照品溶液（2）1，5，10，15,20，25,30μl进样，按上述色谱条件测定。以测得的峰面积为纵坐标，丹皮酚进样量（μg）为横坐标绘制标准曲线，回归方程为：Y=5231312X-61675 ，r=0.9999。结果表明丹皮酚进样量在0.0222～0.556μg 范围内与峰面积线性关系良好。
精密度试验 取按“2.2.1”项下方法配置的对照品溶液（2），重复进样6次，每次精密吸取10μl进样，测定峰面积。峰面积平均值为1087970，RSD为0.2%，表明仪器精密度良好。
重现性试验 取同一批号的样品（批号为140109）6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，各精密吸取10μl进样，按上述色谱条件测定。结果，丹皮酚含量分别为0.322、0.318、0.320、0.315、0.314、0.317（mg/ml），RSD为1.0%，表明方法重现性较好。
稳定性试验 取同一批号的样品（批号140109）的供试品溶液，在0，1，4，12，24，48，72h分别精密吸取10μl进样，按上述色谱条件测定。结果，丹皮酚峰面积的RSD为1.0%（n=7），表明供试品溶液在3天内基本稳定。
2.8 检测限与定量限
精密量取对照品溶液（2）适量，用甲醇逐级稀释，按上述色谱条件测定，记录图谱。信噪比为3时，测得检测限为2.22ng；在信噪比为10时，测得定量限为11.12ng。
2.9 回收率实验
精密量取2ml已知含量的样品9份（批号140109），分别精密加入对照品溶液（1）1.0ml、1.5ml、2.0ml各三份，再按样品测定项下方法配制成供试溶液50 ml，分别精密吸取10μl按上述色谱条件测定。计算回收率，结果见表1
讨论
3.1参考文献[2]，选用甲醇-水系统作为流动相，毒性更小，经济适用。经多次试验，以甲醇-水（45：55）作为流动相能使样品中丹皮酚与相邻色谱峰达到基线分离，且阴性对照无干扰。利用二极管阵列检测器，对丹皮酚峰及供试品溶液色谱中与丹皮酚相同保留时间峰进行扫描，结果均在274nm波长处有最大吸收，且经峰纯度检测为单一纯色谱峰，故确定检测波长为274nm。
3.2丹皮酚的提取方法有超声提取法和加热回流提取法。本文对超声提取法（提取时间分别为10，15,20min）、加热回流提取法（回流时间分别为10,15,20min）进行了考察，发现超声提取与加热回流提取效果均较理想、回收率高且数值接近，但超声提取操作简单易行，且回流15min已能将制剂中丹皮酚提取完全，故将提取方法定为超声提取15min。
参考文献：
[1]湖北省医疗机构质量标准汇编[S].
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010:160-161
论文作者:邱海蕴1,魏俊德,袁才琼
论文发表刊物:《中国医院药学杂志》2016年8月
论文发表时间:2016/10/26
标签：溶液论文; 色谱论文; 精密论文; 甲醇论文; 丹皮论文; 批号论文; 超声论文; 《中国医院药学杂志》2016年8月论文;