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【摘要】 目的：不同制备方法对当归提取物的质量影响。方法：采用乙醇渗滤法、乙醇浸渍法、水提法、乙醇热回流法、碱水提法对指标成分藁本内酯、阿魏酸进行检测，比较以上方法的优劣，对当归提取物的制备方法进行确定。比较5种方法的藁本内酯提取率、阿魏酸提取率以及综合评分。结果：乙醇渗滤法、乙醇浸渍法、乙醇热回流法的藁本内酯提取率、阿魏酸提取率以及综合评分均高于水提法、碱水提法（P＜0.05）。而藁本内酯的提取率中乙醇渗滤法＞乙醇浸渍法＞乙醇热回流法（P＜0.05），而阿魏酸提取率中各方法无明显差别（P＞0.05），这就说明，乙醇渗滤法是制备当归提取物的最佳方法，且质量最佳。结论：不同制备方法对当归提取物的质量影响研究过程中，发现乙醇渗滤法的提取率较高，综合评分较高，进而可以保证当归提取物的质量，且可以将其作为制备当归提取物的最佳手段。
【关键词】 制备方法；当归提取物；藁本内酯；阿魏酸
【中图分类号】R284 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2018）35-0338-03
中药药材中的有效成分含量与药材的质量、安全性、有效性紧密相关，因此，对其中的成分进行一定的分析可以有效改善制备方法，提高药材质量。中药材的成分比较复杂，仅根据单种成分并无法有效地对质量进行评估，对多种成分进行测定、分析已成为保证中药质量的关键[1]。
当归是中医上的一种药材，它属于伞形科植物。当前有很多对当归质量进行控制的方法，主要有指纹图谱、薄层色谱鉴别等，阿魏酸在多种中药材中存在，仅将其作为测定指标并不能全面的对当归质量以及当归提取物的质量进行判断[2]。当归中还有启用它有效的成分为藁本内酯、丁烯基苯酞，但是该成分稳定较差，对其进行质量控制难度较大。因此，寻找有效地制备方式对于保证当归提取物质量有着积极的意义。在不同制备方法对当归提取物的质量影响研究过程中，应用乙醇渗滤法进行制备，藁本内酯、阿魏酸提取率较高，现报道如下。
1.资料与方法
1.1 仪器与试药
仪器为美国Agilent公司提供的1100系列HPLC系统。藁本内酯、阿魏酸对照品来自上海中药创新研究中心，纯度超过98%，所用的水为纯净水，色谱纯为乙腈，其他的试剂为分析纯；当归详细信息见表1，且经过上海中药研究所吴立宏博士对所有的当归进行了鉴定，确定为均是伞形科植物A.sinensis的根[3]。
1.2 方法
1.2.1色谱条件 选用WatersNova一PakC18(150mmX3.4mm)的色谱柱；流动相选用乙腈（B）和酸水(A,磷酸调pH4)；进行梯度洗脱的条件为：5%～78%的乙腈，0～20min,78%～78%乙腈，20～25min；检测的波长为350nm；流速为1.0mL/min-1；柱温为25℃。通过以上色谱条件，可以使藁本内酯、阿魏酸与相邻组分的基线彻底分离，色谱分离程度超过1.5[4]。
1.2.2制备溶液 对当归提取物进行精密吸取，量为5mL，后将95:5（70%乙醇-甲酸）的溶剂加入其中定容到100mL，分析之前将其应用0.45μm微孔滤膜进行过滤，滤液就是所需要的供试品溶液[5]。对适量的藁本内酯对照品进行精密称取，应用乙腈将其定容到25mL且存放在棕色量瓶内，后将其制成藁本内酯对照品贮备溶液，浓度为6.84mg/mL-1。对适量的阿魏酸对照品进行精密称取，应用乙腈将其定容到25mL且存放在棕色量瓶内，后将其制成阿魏酸对照品贮备溶液，浓度为0.281mg/mL-1。将5mL藁本内酯贮备溶液、10mL阿魏酸贮备溶液进行精密吸取，应用乙腈将其定容到25mL且存放在棕色量瓶内，后将其制成含有1.368mg/mL-1的藁本内酯、含阿魏酸0.112mg/mL-1的混合溶液[6]。
1.2.3当归提取物制备方式 将藁本内酯提取率、阿魏酸提取率作为评价指标，对乙醇渗滤法、乙醇浸渍法、水提法、乙醇热回流法、碱水提法的优劣进行评估。（1）乙醇渗滤法：将1倍量的70%乙醇与25g当归粗粉混合后将其闷润2h,后将其放置到小渗滤桶内应用1mL/min-1的速度进行渗滤，采取20倍量的渗滤液，将乙醇减压回收，应用70%的乙醇将其定容到100mL,即为乙醇渗滤法所得到的溶液[7]。（2）乙醇浸渍法：将70%的乙醇与12.5g当归粗粉混合放置室温下进行浸渍4d，后将混合液进行提取、过滤，且将乙醇减压回收,应用70%的乙醇将其定容到100mL,即为乙醇浸渍法所得到的溶液。（3）水提法：在12.5g当归粗粉中加入水进行提取(10BV×2)，首次提取2h、2次提取1h,将混合液进行提取、过滤、浓缩，应用水将其定容到100mL,即为水提法所得到的溶液。（4）乙醇热回流法：将70%乙醇提取(10BV×2h×2)液与12.5g的当归进行混合，将溶液进行提取、过滤，且将乙醇进行回收,应用70%的乙醇将其定容到100mL,即为乙醇热回流法所得到的溶液。（5）碱水提法：将0.1%碳酸钠提取液(10BV×2)与12.5g当归粗粉混合,首次提取2h、2次提取1h，将混合液进行提取，后将其的pH值用盐酸中和到中性，应用水将其定容到100mL,即为碱水提法所得到的溶液。
1.3 观察指标
比较5种方法的藁本内酯提取率、阿魏酸提取率以及综合评分。
1.4 统计学方法
数据应用SPSS18.0进行分析，其中计数进行χ2（%）检验，计量进行t检测（x-±s）检验，P＜0.05提示有显著差异。
2.结果
2.1 当归详细信息见表1。
2.2 5种方法的藁本内酯提取率、阿魏酸提取率以及综合评分对比
乙醇渗滤法、乙醇浸渍法、乙醇热回流法的藁本内酯提取率、阿魏酸提取率以及综合评分均高于水提法、碱水提法（P＜0.05）。而藁本内酯的提取率中乙醇渗滤法＞乙醇浸渍法＞乙醇热回流法（P＜0.05），而阿魏酸提取率中各方法无明显差别（P＞0.05），这就说明，乙醇渗滤法是制备当归提取物的最佳方法，且质量最佳。
表2 5种方法的藁本内酯提取率、阿魏酸提取率以及综合评分对比
方法藁本内酯提取率（%）阿魏酸提取率（%）综合评分（分）
乙醇渗滤法259.8549.998.6
乙醇浸渍法250.4547.896.5
乙醇热回流法250.1518.794.0
水提法247.7427.589.0
碱水提法243.7390.183.1
χ25.3955.1116.268
P＜0.05＜0.05＜0.05
3.讨论
当归是伞形科植物A.sinensis的根，它的作用是润肠通便、止痛、活血、调经、补血，在治疗风湿痹痛、虚寒腹痛、经闭痛经、眩晕心悸、肠燥便秘、月经不调、血虚萎黄方面也发挥着非常重要的作用。
当归提取物是我国植物提取物大量出口的商品，但是在出口前需要对提取物内的藁本内酯、阿魏酸含量进行测定，该方法比本次研究过程中所用的方法更为复杂。藁本内酯属于苯酞类，该物质不易溶于水，但会非常容易溶于有机溶剂，且纯度较高的藁本内酯稳定性较差，在热、光等的作用下容易结构发生变化，生成苯酞类其他成分。阿魏酸属于有机酸类，它非常容易溶于碱水、热水中，性质非常不稳定，加热时间较久会使其发生降解[8]。制备供试品溶液的过程中，常应用弱酸性溶剂，这样的目的是为了阻止阿魏酸降解，以保证最终结果的稳定。通过以上研究可以发现，浸渍时间对提取的药物成分并没有太大的影响，但是在《中国药典》曾有明文规定，当归的渗滤时间不宜超过48h,因此，在制备当归提取物的过程中，要适当的减少渗滤时间，确保药物成分的安全性、质量。
研究显示，乙醇渗滤法、乙醇浸渍法、乙醇热回流法的藁本内酯提取率、阿魏酸提取率以及综合评分均高于水提法、碱水提法（P＜0.05）。而藁本内酯的提取率中乙醇渗滤法＞乙醇浸渍法＞乙醇热回流法（P＜0.05），而阿魏酸提取率中各方法无明显差别（P＞0.05），这就说明，乙醇渗滤法是制备当归提取物的最佳方法，且质量最佳。因此，在进行当归提取物制备过程中，要选择合适的制备方式，这样才能有效保证最终的制备质量。
当归中的有效成分挥发性较强，主要是丁烯基苯酞、藁本内酯等苯酞类化合物，而在进行指标测定时，以上成分具有挥发性强、稳定性差的特点，这就会导致：（1）提取物的药物浓度无法维持恒定。（2）阿魏酸在溶液中的稳定性极差，且在中性溶剂下见光时分解速度会更快。（3）由于阿魏酸在水中的溶解度较小，稳定性较差，在高温环境下会对其造成严重的破坏。因此在选择指标成分时要注意以下几点：①制备当归提取物的过程中，要将这些成分弃去。②维持当归提取物溶液的适当浓度，确保阿魏酸不被破坏。
中药药材成分制备、提取的过程中，有很多制备工艺出现，但是当前大部分中药药材制备方式沿用常规的提取方式。虽然涌现出了很多新的现代化的制备方式，且超临界二氧化碳制备提取技术展现出了很大的优越性，但还需要进一步对其安全性与实用性进行研究。
综上所述，不同制备方法对当归提取物的质量影响研究过程中，发现乙醇渗滤法的提取率较高，综合评分较高，进而可以保证当归提取物的质量，且可以将其作为制备当归提取物的最佳手段。
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论文作者:严小萍1,吴慧峰2
论文发表刊物:《医药前沿》2018年35期
论文发表时间:2018/12/18
标签：乙醇论文; 当归论文; 藁本论文; 内酯论文; 提取物论文; 将其论文; 提法论文; 《医药前沿》2018年35期论文;