王栋海[1]2004年在《Lipstatin的开发与研究》文中进行了进一步梳理Lipstain是毒叁素链霉菌产生的一种抑制胰脂肪酶活性的次级代谢产物。其四氢衍生物已经开发成为一种新型的减肥药物塞尼可。 本文对lipstatin产生菌毒叁素链霉菌进行了菌种选育，对发酵条件及发酵培养基进行了优化，探索了毒叁素链霉菌的原生质体制备方法及质粒抽提方法。 利用双氢链霉素作为一种筛选压力，结合紫外线及NTG诱变方法对毒叁素链霉菌进行了筛选。结果表明，双氢链霉素的加入有利于筛选得到Lipstatin高产菌株。 对毒叁素链霉菌的发酵工艺进行了优化。确定了最佳发酵温度为30℃，最优初始pH为6.0，最佳摇瓶装量为10％，最佳摇床转速为220rpm；通过培养基的单因素试验及正交试验最终确定最佳发酵培养基配方为：豆油5.0％，甘油2.0％，去脂黄豆粉3.0％，卵磷脂1.6％，MgSO_4 0.005％，ZnSO_4 0.01％。 成功制备了毒叁素链霉菌的原生质体。考察了培养基组分、甘氨酸浓度、溶菌酶浓度、酶解温度及酶解时间等因素对原生质体的形成和再生的影响。通过质粒抽提实验证明本实验所用菌株内不含有质粒。
颜震, 李海军, 朱希强, 李志民, 赵国敏[2]2007年在《lipstatin发酵工艺的优化》文中研究指明目的优化lipstatin的发酵工艺。方法采用摇瓶发酵,改变实验条件,通过测定lipstatin含量来确定较为适合的发酵工艺。结果优化后的培养基组成为:豆油8.0%,甘油0.7%,黄豆粉3.0%,酵母粉1.0%,TritonX-100 0.1%。在此条件下lipstatin发酵产量为156.8 mg/L。结论提高了lipstatin产量。
王永青[3]2013年在《Lipstatin发酵工艺的优化研究》文中指出Lipstatin是毒叁素链霉菌的次级代谢产物，是一种有效的胰脂肪酶抑制剂，专一性强，只对胃肠道系统起作用。Lipstatin的氢化产物Orlistat（奥利司他）是一种重要的预防和治疗与肥胖相关的疾病的药物，副作用小，并对神经中枢系统无作用，是近10年来减肥药物市场上主要的减肥药物。本文在本实验室前期研究的基础上，对Lipstatin的发酵工艺进行了优化研究。首先进行了培养基的优化研究，依据本实验室前期的单因素实验研究结果，对Lipstatin的发酵培养基进行了正交实验，优化了发酵培养基，确定的最佳发酵培养基配方为：亚油酸3.0%，黄豆粉6.0%，甘油2.0%，卵磷脂1.0%，与优化前相比，发酵单位提高了17.1%。研究了无机盐对Lipstatin发酵效价的影响，结果表明：当培养基中K_2HPO_4浓度为0.09%，MgSO_4浓度为0.01%时，Lipstatin发酵效价提高了2.3%。研究了不同消沫剂对Lipstatin发酵的影响，研究发现使用SAG消沫效果最好。对于泡沫过大的罐批，加入豆油消沫，可适当提高Lipstatin的发酵效价。在以上优化培养基的基础上，结合本实验室前期的单因素试验研究成果，在10L的发酵罐中，用正交实验法对Lipstatin的发酵工艺条件进行了优化，确定最佳的工艺条件为：温度27℃，接种量9%，种龄30h，发酵液pH7.0。此外还对发酵过程中搅拌转速、通气量、培养基的装量进行了优化，结果表明当发酵罐培养基装量6.0L，转速260rpm，通气量0.8vvm时最有利于Lipstatin的生物合成。在此基础上对Lipstatin的发酵过程进行了变温培养研究，在接种后维持温度27℃，在36h后调整温度为25℃，与恒温培养相比，Lipstatin发酵效价提高了3.5%。采用优化的发酵培养基配方及发酵工艺条件，对Lipstatin的发酵过程进行亚油酸/辛酸补料、L-亮氨酸和豆油的补料研究，发现补料方式对Lipstatin的生物合成有重要的影响，确定最佳的补料工艺为：在接种36小时开始补料，亚油酸/辛酸（2:1）、L-亮氨酸（8%）的补料速率分别为：0.35g/L·h、0.4g/L·h；在发酵72h一次性补加4%的豆油。经补料，Lipstatin的发酵单位较不补料工艺提高了19.5%。经过发酵工艺的优化，Lipstatin的发酵效价较优化之前得到较大幅度提高，对Lipstatin的工业化生产有重要的意义，但是其影响机理还需进一步研究。
刘顺娜[4]2017年在《利普司他汀产生菌的菌种选育及发酵工艺的研究》文中研究表明利普司他汀(Lipstatin)是毒叁素链霉菌(Streptomyces toxytricini)代谢合成的天然胰脂肪酶抑制剂,其氢化产物奥利司他(Orlistat)是经FDA批准的唯一一个作用于人体胰脂肪酶的减肥药。本研究通过对Lipstatin产生菌S.toxytricini进行菌种选育、发酵工艺的优化及10L发酵罐的初步研究,为工业化生产Lipstain奠定基础。首先以产Lipstatin的S.toxytricini LIPS-352为出发菌株(4125mg/L),利用紫外(UV)和亚硝基胍(NTG)诱变获得了一株稳定的高产突变株S.toxytricini LIPS-N-27-46-42,发酵单位达8122.9mg/L,较出发菌株LIPS-352的发酵单位提高了96.9%。其次优化了突变株的发酵工艺,优化后的培养条件为:菌种斜面培养7~8d、种龄28h、接种量10%、发酵培养基初始pH为7.5、放瓶天数7~8d。单因素试验表明,碳源和氮源对Lipstatin的合成有明显的影响,进一步运用响应面分析法中的Box-Behnken调整发酵培养基(%)为:葵花籽油7.56、麸质粉1.01、热榨黄豆饼粉3.35、卵磷脂2.5、甘油2.25、抗氧化剂0.05、Fe SO4·7H2O 0.01、Tween-800.005、CaCO3 0.08,使Lipstatin的摇瓶发酵单位达9859.8mg/L,较优化前(8122.9mg/L)提高了21.4%,与预测值(10633.1mg/L)的相对误差为7.27%。通过菌种选育和配方优化,Lipstatin的发酵单位较出发菌株的(4125mg/L)提高了139.0%。最后在10L发酵罐中进一步通过调节培养基的碳源、氮源组成,使培养过程中pH维持在正常范围,Lipstatin发酵单位达6904mg/L。尝试在S.toxytricini中过表达vgb基因以改善氧气的利用率,获得了可表达具有生物活性VHb的重组菌S.toxytricini LIPI-42-VHb,但10L发酵罐中Lipstatin的发酵单位仅为2788mg/L。
黄娟[5]2005年在《Lipstatin产生菌的诱变选育和发酵条件研究》文中研究表明伴随着科学的飞速发展,物质生活条件的改善和丰富膳食的获得,肥胖症已成为当今世界一大常见和多发性的疾病。目前市场上的减肥药有许多种,其中作用于非神经中枢的减肥药物奥利司他,由于其在临床上的良好表现,己在全100多个国家上市,有超过900万的患者在使用。 奥利司他是由毒叁素链霉菌产生的lipstatin经氢化合成获得。Lipstatin是一种天然胰脂酶抑制剂。本文研究了lipstatin产生菌的菌种选育,考察了UV、NTG、MW的诱变效果,以及复合诱变的效果,发现UV和NTG相结合的诱变效果最好。实验从5000多株菌株中筛选得到一株高产菌株SIPI-UN-21,其摇瓶发酵单位是出发菌株SIPI-HJ-80的3.5倍。 本文对lipstatin的发酵培养基进行了优化,分别考察了碳源,氮源,磷酸盐等影响因素,并通过正交试验,确定了一组最佳的培养基配方。 同时,本文还对lipstatin的摇瓶发酵条件进行了研究,分别考察了pH,温度,溶氧等参数对发酵的影响,确定了最佳的摇瓶发酵条件。
韩俊茹[6]2005年在《利普司他汀菌种选育及其发酵工艺的优化》文中提出为了开发一种毒、副作用小,作用机制独特的新型高效减肥药物,国内外科研机构和制药企业做了很多工作,我们采用发酵法生产这类药物之一——利普司他汀。 利普司他汀是毒叁素链霉菌发酵生产的一种抑制胰脂肪酶的次级代谢产物。根据利普司他汀的生物合成途径和代谢机理,对利普司他汀产生菌毒叁素链霉菌进行推理选育,旨在获得高单位菌株。以毒叁素链霉菌XC-LP-2为出发菌株,经过3次紫外线诱变处理,分别筛选耐豆油、辛酸钠、亮氨酸的突变株,并结合自然分离纯化,最终获得高产突变株毒叁素链霉菌XC-LP-7-69,其摇瓶效价达831μg/mL。较出发菌株(310μg/mL)生产能力提高了168%。传代试验表明,该菌株的高产性能遗传特性较稳定。 用正交试验法优化了利普司他汀的发酵培养基,XC-LP-7-69的摇瓶发酵单位提高了21.5%。从利普司他汀的摇瓶发酵着手,考察了无机盐、温度、种龄、接种量、溶氧、剪切力、补料对利普司他汀生物合成的影响。结果表明:KH_2PO_4和(NH_4)_2SO_4的最宜加量分别为0.1%和0.15%;其最佳培养温度为27℃;采用优化的发酵配方和发酵条件,并进行中间补料,可大幅度提高发酵效价,其摇瓶效价达1400μg/mL。 以摇瓶发酵实验为基础,进行了利普司他汀发酵由摇瓶到15L发酵罐的放大,罐上发酵效价1561μg/mL。
茆永康, 陈代杰, 黄为一[7]2005年在《表面活性剂PEG600对毒叁素链霉菌发酵的影响》文中提出用PEG 600代替毒叁素链霉菌发酵培养基中的卵磷脂作为豆油的乳化剂,在其他发酵条件不变的情况下,PEG 600较卵磷脂降低毒叁素链霉菌发酵过程中溶氧水平,提高了豆油利用率,细胞向胞外分泌lipstatin的能力提高23.2%,lipstatin发酵效价提高35%。
方积年, 丁侃[8]2007年在《多糖的研究开发中值得注意的一些问题》文中指出多糖药物和保健品已成为当今生命科学研究与开发的热点之一。本文就作者在论文审阅和新药审评中发现的一些问题提出个人观点。
高彦兵, 梁红宝, 赵军杰, 祝加男, 谢银堂[9]2017年在《利普司他汀的提纯工艺研究》文中指出目的研究从毒叁素链霉菌的发酵液菌粉中提纯利普司他汀(lipstatin)的新工艺。方法对比不同溶剂对发酵液菌粉的浸提效果,并经脱色、萃取及结晶等步骤纯化。结果乙腈从发酵液菌粉中浸提得到的粗提物中利普司他汀含量最高,达50.7%,比甲醇、乙醇、丙酮的浸提效果高4倍;经纯化得到的利普司他汀含量高达85%。结论此工艺步骤简单,成本低,为制备高纯度奥利司他(orlistat)提供了方便。
赵培静, 缪承杜, 梁淑娃, 夏枫耿[10]2014年在《一株来自红树林土壤的利普斯他汀产生菌的分离鉴定与发酵特性初步研究》文中研究表明从红树林土壤中筛选到一株产利普斯他汀(Lipstatin)的菌株GWL1.2012,通过形态特征、生理生化及16S rDNA序列分析,对该菌进行鉴定。结果显示,菌株GWL1.2012与毒叁素链霉菌形成一个类群,同源性高达99.7%,故将其鉴定为毒叁素链霉菌(Streptomyces toxytricini),并对菌株GWL1.2012发酵特性进行初步研究,为以后的产业化开发生产提供参考依据。
参考文献：
[1]. Lipstatin的开发与研究[D]. 王栋海. 上海师范大学. 2004
[2]. lipstatin发酵工艺的优化[J]. 颜震, 李海军, 朱希强, 李志民, 赵国敏. 食品与药品. 2007
[3]. Lipstatin发酵工艺的优化研究[D]. 王永青. 中国海洋大学. 2013
[4]. 利普司他汀产生菌的菌种选育及发酵工艺的研究[D]. 刘顺娜. 上海医药工业研究院. 2017
[5]. Lipstatin产生菌的诱变选育和发酵条件研究[D]. 黄娟. 上海医药工业研究院. 2005
[6]. 利普司他汀菌种选育及其发酵工艺的优化[D]. 韩俊茹. 浙江工业大学. 2005
[7]. 表面活性剂PEG600对毒叁素链霉菌发酵的影响[J]. 茆永康, 陈代杰, 黄为一. 中国抗生素杂志. 2005
[8]. 多糖的研究开发中值得注意的一些问题[J]. 方积年, 丁侃. 食品与药品. 2007
[9]. 利普司他汀的提纯工艺研究[J]. 高彦兵, 梁红宝, 赵军杰, 祝加男, 谢银堂. 食品与药品. 2017
[10]. 一株来自红树林土壤的利普斯他汀产生菌的分离鉴定与发酵特性初步研究[J]. 赵培静, 缪承杜, 梁淑娃, 夏枫耿. 热带农业科学. 2014