1.湖南中医药高等专科学校附属第一医院 湖南株洲 412000
【摘 要】目的 探讨建立骨伤复元合剂质量研究标准。方法 采用薄层色谱（TLC）法对骨伤复元合剂中栀子、川芎、乳香进行定性质量鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）测定骨伤复元合剂中丹参酮ⅡA的含量。结果 TLC法可准确地对栀子、川芎、乳香进行定性鉴别；丹参酮ⅡA在2.037～16.296ug/ml范围内线性关系良好（r=0.9998，n=5）；平均回收率为98.21%，RSD为0.67%（n=6）。结论 该方法简便、准确、重现性好，可作为骨伤复元合剂质量控制标准。
【关键词】骨伤复元合剂；丹参酮ⅡA；高效液相色谱法；薄层色谱法
[Abstract] Objective To establish quality standard of Gushang Fuyuan Mixture．Methods The qualitative analysis of Gardenia，Chuanxiong Rhizoma，and Olibanum was performed using TLC．The content of TanshinoneⅡA in the Gushang Fuyuan Mixture was determined by HPLC．Results Gardenia，Chuanxiong Rhizoma，and Olibanum could be accurately identified by TLC．TanshinoneⅡA showed good linearity within the range of 2.037～16.296ug/ml（r=0.9998，n=5），and its average recovery was 98.21%，with RSD at 0.67%（n=6）．Conclusions The method is simple，accurate and reproducible，and can be used for the quality control of Gushang Fuyuan Mixture．
[Key words] Gushang Fuyuan Mixture；TanshinoneⅡA；HPLC；TLC
骨伤复元合剂是我院自制制剂，由三七、丹参、栀子、乳香、川芎等药材经过浸泡、煎煮、回流、醇沉等制剂工艺提取有效成分制成的中药复方制剂，具有化瘀止血、活血止痛、解毒消肿等功效；主要用于跌打损伤、创伤出血等疾患，临床疗效显著，受到广大患者欢迎。为了控制骨伤复元合剂的产品质量，确保其临床疗效，本实验对骨伤复元合剂方中主要中药栀子、川芎、乳香进行了薄层色谱鉴别研究，采用高效液相色谱（HPLC）法对其有效成分丹参酮ⅡA进行含量测定，建立了骨伤复元合剂可靠的质量标准。
1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司），检测系统包括G1311A四元梯度泵、G1329A手动进样器、G1314B紫外检测器、G2170BA色谱工作站。AR153CN型电子天平（美国奥豪斯）；骨伤复元合剂（本院制剂室，批号20140509，20140510，20140511）；丹参酮ⅡA对照品及栀子、川芎、乳香对照药材均购于中国药品生物制品检定所；硅胶G购于青岛海洋化工厂；流动相试剂为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 栀子的薄层鉴别
取骨伤复元合剂20 mL，加50％甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取缺栀子骨伤复元合剂，按供试品溶液制备方法制得缺栀子阴性对照溶液。分别吸取上述三种溶液5μl、2μl、5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5：5：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干。再喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。结果显示：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的黄色斑点；阴性对照溶液在与对照药材及供试品色谱相应的位置上无斑点【1-2】。
2.1.2 川芎的薄层鉴别
取骨伤复元合剂20mL，加乙醚50ml，加热回流60分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯5ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取缺川芎骨伤复元合剂，按供试品溶液制备方法制得缺川芎阴性对照溶液。分别吸取上述三种溶液5μl、2μl、5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。结果显示：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照溶液在与对照药材及供试品色谱相应的位置上无斑点【3-4】。
2.1.3 乳香的鉴别
取骨伤复元合剂20mL，置具塞锥形瓶中，加乙醇40ml，超声处理30分钟，过滤，滤液挥干至5ml，作为供试品溶液。另取乳香对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取缺乳香骨伤复元合剂，按供试品溶液制备方法制得缺乳香阴性对照溶液。分别吸取上述三种溶液5μl、2μl、5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开、取出、晾干，置紫外灯（365nm）下检视。结果显示：供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点，而缺乳香的阴性样品则在此位置上无斑点。
2.2 丹参酮ⅡA的HPLC测定
2.2.1 色谱条件与系统适用性
色谱柱：Agilent 300StableBond -C18柱（250mm×4.6mm，5m）；柱温30℃；流动相：乙腈-水（70∶30，V/V）；流速1.0mL/min；检测波长270nm；进样量10μL。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，注入HPLC 仪，按上述色谱条件进样分析，按丹参酮ⅡA色谱峰计算理论塔板数应≥ 3000，分离度＞1.5，对照品与供试品主成分峰的保留时间基本一致，阴性对照无干扰。见图1
2.2.2 对照品溶液的制备
精密称取丹参酮ⅡA对照品1.273 mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备
精密量取骨伤复元合剂2mL，置于25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，超声处理5min，置具塞锥形瓶中，加热回流60分钟，放冷，再转移至25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取100μL 续滤液，置于10mL 离心管中吹干，精密加入甲醇100μL，振荡，3000r/min离心5min，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备
按处方比例称取不含丹参的其他药材，按骨伤复元合剂生产工艺制备不含丹参的阴性样品，再按“2.2.3”项下方法制备阴性对照溶液。
2.2.4 线性关系考察
精密吸取丹参酮ⅡA对照品溶液1、2、4、6、8mL，分别置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成浓度分别为2.037、4.074、8.148、12.222、16.296ug/ml的溶液，摇匀，按上述色谱条件分别进样10μL，测定丹参酮ⅡA色谱峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为A＝1.8726c－0.6375（r＝0.9998，n＝5）。结果表明，丹参酮ⅡA的检测浓度在2.037～16.296ug/ml范围内线性关系良好。
2.2.5 精密度试验
精密吸取“2.2.1”项下的丹参酮ⅡA对照品溶液10μL，按上述色谱条件重复进样6次，记录色谱峰面积，计算RSD＝0.79％（n＝6），结果表明仪器精密度良好。
2.2.6 稳定性试验
取已知含量的骨伤复元合剂供试品溶液（批号：140509）适量，在室温条件下分别于0、2、4、8、12、24 h 进样10μL，记录色谱峰面积。计算RSD＝1.47％（n＝6），结果表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.2.7 重复性试验
取骨伤复元合剂样品溶液（批号：140509）适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，照上述色谱条件进样测定，记录峰面积。计算丹参酮ⅡA的平均含量为0.5382mg/ml，RSD＝1.21％（n＝6），结果表明本方法重复性良好。
2.2.8 加样回收率试验 精密量取已知含量的骨伤复元合剂样品溶液（批号：140509）适量，置于25mL量瓶中，分别精密加入高、中、低浓度的丹参酮ⅡA对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果见表1。
2.2.9 样品含量测定
取骨伤复元合剂3批样品，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样测定峰面积，计算样品中丹参酮ⅡA的含量，结果见表2。
3 讨论
骨伤复元合剂中丹参、栀子、川芎、乳香作为方中的君、臣药，对疾病的治疗起主要作用，因此采用高效液相色谱法对丹参的有效成分丹参酮ⅡA的含量进行测定【5】，采用薄层色谱法对栀子、川芎、乳香进行定性质量鉴别，可以更好地控制产品质量。实验表明，本方法简便、准确，可作为骨伤复元合剂的质量控制标准。
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作者简介：
谭姣章，女，副主任药师，湖南中医药高等专科学校附属第一医院药学部副主任，研究方向为中药新制剂研究与开发。
基金项目：湖南中医药管理局资助项目（201498）。
论文作者:谭姣章,石雕
论文发表刊物:《航空军医》2015年17期
论文发表时间:2016/4/26
标签：合剂论文; 溶液论文; 色谱论文; 骨伤论文; 乳香论文; 薄层论文; 川芎论文; 《航空军医》2015年17期论文;