蔡卫民, 陈峰, 翁红雷, 刘荣华[1]1998年在《γ-干扰素抗肝纤维化动物实验与临床观察(摘要)》文中指出为确定γ-干扰素(IFN-γ)抗肝纤维化的疗效,进行动物实验与临床研究。动物实验用DNN致SD大鼠肝纤维化模型,随机分为注射生理盐水(NS)组、染毒同时及染毒后3周分别肌注IFN-γ 5万单位/只,称预防与治疗肝纤维化组,并与正常大鼠比较。结果显示IFN-γ预防与治疗组肝纤维化程度(HE染色、Masson叁色染色、苦味酸天狼红染色)
翁红雷[2]2001年在《干扰素-γ抗肝纤维化动物实验和临床研究》文中认为第—部分 动物实验研究 本研究的设计参照WHO(1975年)和我国国家药品监督管理局(SDA)新药临床前研究指导原则的要求，采用两种不同的的肝纤维化动物模型，用叁种不同剂量的IFN-γ进行治疗，观察不同剂量IFN-γ对不同原因引起的肝纤维化动物的治疗作用和量效关系。同时观察停止治疗后动物肝纤维化的逆转情况。 材料与方法 CCl_4大鼠肝纤维化模型 SD大鼠205只，体重200～250g。将CCl_4与橄揽油以4：6配成40％油剂，按0．3ml／100g体重皮下注射，2次/周，每周末处死5只大鼠观察肝脏病理改变，观察中度肝纤维化形成。以后继续使用CCl_4与橄揽油油剂直到实验结束。实验第4周末，大鼠肝纤维化模型建成，将余下的150只SD大鼠，按照随机表编号分成IFN-γ大、中、小剂量治疗组、秋水仙碱治疗组、CCl_4：模型对照组5组，每组30只，另设正 常对照组 10只。前 3组分别按 15万 IUlkg、5万 IUlkg、1．67万 IUlkg体重肌肉注 射IFN7，每天1次，连用巴周；秋水仙碱用生理盐水溶解，按0lwi体重灌胃， 每天l次，连用8周；模型对照组、正常对照组以生理盐水代替，同样方法处理。 抬疗期间继续使用CCh维持大鼠肝纤维化程度直到实验结束。治疗8周后各组随机 取10只大鼠解剖取肝脏和血清进行检测，观察疗效。余下大鼠停止治疗，继续观 察4周至实验结束，处死所有大鼠，解剖取肝脏和血清进行检测。 DMN大鼠肝纤维化模型组 SD大鼠 278只，体重 200－2509。按 10mglkg体重腹腔内注射 1％DMN，共 13 次，实验第1周连续用药3d，每天1次：后5周每周连续用药Zd，共6周，每周 末杀S只大鼠观察病理改变，直到中度肝纤维化形成。实验第4周末，大鼠肝纤维 化模型建成，将余下的196只SD大鼠，随机分成5组。其中，IFNq大、中、小 剂量治疗组各40只，秋水仙碱治疗组30只，DMN模型对照对照组46只，另设正 常对照组 10只。前 3组按 15万 IUlkg、5万 IUlkg、1．67万 IU Ikg体重内肌肉注射 IPNq，每天 1次，连用 4周；秋水仙碱用生理盐水溶解，按 0刁 i体重灌胃， 每天1次，连用4周；染毒对照组、正常对照组以生理盐水代替。治疗4周后各组 随机取10只大鼠解剖取肝脏和血清检测，观察疗效。 检测指标 （一）病理组织学检查：分别进行HE、天狼猩红染色和Masson染色，按1995 年全国肝炎防治会议制订的标推和肝纤维化组织学半定量计分系统（SSS）标准观－察肝纤维化变化情况。偏光显微镜下观察胶原分布情况，计算机图像分析系统于偏 光显微镜下测胶原面积。同时，还采用王宝恩等报道的肝纤维化病理分级判定标准 观察纤维化分级。 （H）ex．SMA免疫组化染色 （叁）肝 Hyp含量测定 （四）血清HA及常规肝功能试验测定 统计方法 2 用SPSS 7．0对定量资料进行方差分析，病理学半定量资料用比m出刊－Wllis检 验。 结 果 一、各组大鼠的死亡情况显示IFN7治疗后的各组大鼠死亡数较少 二、治疗结束时组织学检查结果显示IFN1治疗后大鼠肝纤维化程度较模型组 和秋水仙碱治疗组明显下降，叁组间的疗效随剂量增加而显着 根据95标准和SSS标准计分，Kusal－Wallis检验分析，4组治疗组肝纤维化 程度比较模型组均有显着差异（Pe．05），但疗效以IFN－Y大剂量治疗组最优，IFNry 中、小剂量治疗组次之，秋水仙碱再次之，叁者间均有显着差异（Ped．05），IFNy中、 小剂量治疗组之间无明显差异（P＞0．05）。 叁、CCI．摸型组停止IPNq治疗4周后，大鼠肝脏肝纤维化程度较治疗结束 时均有上升，上升程度与使用的剂量有关，接受治疗的剂量越大，肝纤维化上升程 度越小。 CCI．模型组实验第 16周（停止治疗 4周后），模型对照组所有大鼠纤维化分级 均超过4级，说明不进行治疗，模型对照组肝纤维化程度进一步加重。 治疗结束时，IFNq大剂量治疗组大鼠纤维化分级均未超过4级，停药4周后， 3只大鼠纤维化分级超过4级（20％）。 治疗结柬时，IFNq中剂量治疗组有 1只大鼠纤维化分级超过 4级 （l％）， 停药4周后，6只大鼠纤维化分级超过4级（42．9％）。 治疗结束时，IFNq小剂量抬疗组有3只大鼠纤维化分级超过4级（3
丁曙光, 张志清[3]2003年在《γ-干扰素抗肝纤维化临床与病理疗效观察》文中指出重组γ-干扰素(IFN-γ)经体外和动物实验具有抗肝纤维化作用,报道用于临床经血清学观察初步证明IFN-γ有一定抗肝纤维化的疗效。为进一步确定IFN-γ抗肝纤维化效果,我院在应用IFN-γ治疗肝炎肝纤维化患者过程中进行前后肝穿刺病理观察30例,并以一般治疗作对照,现报道如下。 1 对象和方法 1.1 病例选择 全部病例均为慢性乙型肝炎肝纤维化患者。诊断标准按中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分
蔡卫民[4]2011年在《抗肝纤维化治疗研究的若干问题》文中研究说明目前全球都较重视抗肝纤维化的研究,介绍抗肝纤维化治疗的靶点,讨论如何在临床前通过体外和体内模型筛选出有效的抗肝纤维化药物。回顾抗肝纤维化药研究进展,总结临床研究的要求与存在的困难。
蔡卫民, 陈峰, 陶君, 翁红雷, 郑敏[5]2004年在《γ干扰素抗肝纤维化机理的动物实验研究》文中指出目的经IFN-γ治疗后获效的动物肝纤维化模型,观察其肝脏活化的HSC的细胞数(α—SMA+)MMPs、TIMP-1细胞因子、胶原等变化,从而探讨IFN—γ抗肝纤维化的机理。方法(1)用CCL4诱导大鼠肝纤维化模型,在发生肝纤维化后,随机分为IFN-γ治疗组及生理盐水注
许文萱[6]2017年在《双氢青蒿素抑制肝星状细胞收缩发挥抗肝纤维化门脉高压作用及其机制研究》文中进行了进一步梳理[背景]门静脉高压是继发于肝纤维化及肝硬化最常见的并发症之一。当前研究表明,肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化收缩是促使门静脉高压形成的主要诱导因素。肝损伤时,HSC受一系列刺激因子诱导而活化,获得强烈的收缩能力,通过收缩挤压肝窦、促进瘢痕组织挛缩进而增加肝内血管阻力,最终诱导门静脉高压的形成,因此,靶向抑制HSC活化收缩成为治疗门静脉高压的新策略。挖掘靶向抑制HSC收缩进而缓解门静脉高压的高效无毒的药物是目前抗肝纤维化门静脉高压领域的研究热点。本课题组的前期研究结果表明,天然产物青蒿素衍生物双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)具有确切的抗肝纤维化疗效。DHA可有效抑制HSC活化并诱导其凋亡,从而减缓肝脏纤维化形成及发展,这一系列结果揭示了 DHA在抗肝纤维化门脉高压中的应用潜能,但具体的疗效和作用机制仍有待深入探讨。大量研究提示,法尼酯衍生物X受体(farnesoidXreceptor,FXR)和鞘氨醇-1-磷酸受体 2(sphingosine-l-phosphatereceptor2,S1PR2)在 HSC 收缩及门静脉高压的调控中具有关键作用。本研究旨在明确DHA对肝纤维化门脉高压的治疗作用,并阐明其作用的分子机理。本研究的结果为开发DHA作为抗肝纤维化门脉高压药物提供实验依据,为DHA的作用机理研究提供全新的思路和明确的方向。[方法]1、临床样本检测自南京鼓楼医院肿瘤科随机选取4例临床肝癌患者癌组织和癌旁组织样本。以免疫荧光双染法考察肝癌患者癌组织和癌旁组织中HSC内FXR表达。2、体外研究选取永生化人肝星状细胞LX-2细胞株作为本论文体外研究对象。以鼠尾胶原凝胶收缩实验及细胞骨架染色实验评估HSC收缩能力,以钙离子(calcium,Ca~(2+))荧光探针检测HSC内Ca~(2+)含量。Real-time PCR法、免疫荧光染色法及Western blot法用于检测HSC内目的基因及蛋白的丰度。3、体内研究将48只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分成6组(每组8只):正常对照组、CCl_4模型组、DHA治疗组、奥贝胆酸(obeticholicacid,OCA)治疗组、DHA及OCA联合治疗组、DHA及没药甾酮(Z-guggulsterone,ZGGS)联合治疗组。以苏木精-伊红染色法和扫描电镜观察大鼠肝脏微观结构,以免疫组织化学染色法观察大鼠肝脏中促炎性因子表达情况,以天狼星红染色和Masson叁色染色法定性评估大鼠肝脏中胶原纤维含量,以羟脯氨酸测定法定量评估大鼠肝脏中胶原特异性氨基酸的含量,以试剂盒检测大鼠血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶的含量,以酶联免疫吸附试剂盒检测大鼠血清中干扰素γ、肿瘤坏死因子0α、白介素6、透明质酸、层黏连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原和转化生长因子β的含量,经门静脉和颈动脉插管检测大鼠门静脉压和平均动脉压,以Real-time PCR法、免疫荧光染色法及Western blot法检测大鼠肝组织中目的基因和蛋白的丰度。[结果]临床肝脏样本的免疫荧光染色结果显示,相较于癌旁组织,癌组织中HSC内FXR荧光强度显着下降,且FXR表达随HSC活化标志物增加而逐渐降低,表明HSC内FXR表达与HSC活化程度呈显着的负相关性。体外研究结果显示,DHA以剂量依赖性及时间依赖性的方式增加HSC中FXR的mRNA及蛋白的丰度。同时DHA可抑制HSC中促纤维化相关基因的表达,暗示DHA对HSC生物学行为具有一定的调控作用。凝胶收缩实验及细胞骨架染色结果显示,DHA可剂量依赖性地减少HSC内肌动蛋白丝的形成并抑制骨架重构,从而削弱HSC的收缩能力。DHA可降低肌球蛋白轻链的磷酸化水平。机制研究发现,DHA对HSC活化收缩的抑制作用是依赖于HSC内FXR活化的。接下来的结果显示,S1PR2介导的Ca~(2+)依赖和Ca~(2+)敏感信号途径是触发HSC收缩的关键信号途径。激活FXR进而抑制S1PR2介导的Ca~(2+)依赖和Ca~(2+)敏感信号途径是DHA抑制HSC收缩的分子基础。体内研究结果显示,相较于正常对照组,CCl_4模型组大鼠肝脏HSC中FXR荧光强度显着下降而α-SMA荧光强度增加,而DHA及OCA可明显增强大鼠HSC内FXR荧光强度,同时降低α-SMA荧光强度。血清学检测和形态学分析结果一致表明,DHA对CCl_4诱导的大鼠肝损伤、炎性介质表达及炎细胞浸润有显着的改善作用。这一系列作用可被OCA进一步增强,或被ZGGS削弱。DHA和OCA均可明显降低大鼠门静脉压力及肝脏中纤维形成。机制研究表明,抑制HSC活化收缩是DHA抗肝纤维化门脉高压作用的基础。[结论]本研究中,临床标本检验结果表明,FXR表达与HSC活化程度呈负性相关。体外部分结果表明,DHA可通过调控FXR/S1PR2信号轴进而抑制Ca~(2+)依赖和Ca~(2+)敏感信号介导的HSC收缩。体内部分结果表明,DHA具有确切的改善CCl_4诱导的肝损伤、炎症及肝纤维化门脉高压的作用,且这一作用与DHA抑制HSC活化收缩密切相关。DHA对HSC活化收缩的抑制作用主要依赖于其对HSC内FXR的激活作用。本研究为靶向调控FXR的抗肝纤维化门脉高压药物的开发提供了一定的实验依据。
陶君, 夏琦, 蔡卫民, 黄, 朱辰[7]2006年在《安珐特与γ-干扰素抗肝纤维化的比较》文中提出目的:比较复方牛胎肝提取物片(商品名安珐特)与γ-干扰素(IFN-γ)抗肝纤维化疗效并探讨其作用机制。方法:用四氯化碳(CC l4)诱导形成大鼠肝纤维化模型,设模型组和正常对照组,使用不同剂量安珐特与IFN-γ对该模型肝纤维化大鼠治疗8周,观察各组大鼠肝功能、血清透明质酸(HA)水平、肝组织胶原含量、病理组织学及免疫组织化学多种细胞因子的表达变化,并以透射电镜观察肝组织超微结构的改变。结果:大鼠死亡率与安珐特剂量有明显的量效关系,3种剂量安珐特与IFN-γ治疗组间SSS计分、一些细胞因子表达水平、部分血清学指标和肝胶原含量无明显差异(P>0.05),但都不同程度低于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论:安珐特抗肝纤维化作用与IFN-γ相似。
黄津[8]2014年在《LX-2细胞中PPARγ对iNOS的影响及其抗肝纤维化的作用》文中认为目的：研究LX-2细胞中PPARγ和iNOS的动态变化及关系，探讨PPARγ抗肝纤维化机制。方法：体外培养LX-2细胞，实验分4组:PPARγ激动剂组；PPARγ拮抗剂组；联合干预组；空白对照组。分别加入干预药物培养48h，采用MTT法检测细胞增殖率；RT-PCR法测各组PPARγ、iNOS mRNA表达；硝酸还原酶法测NO含量；ELISA法测上清液的I型胶原、α-SMA的含量。结果：1、MTT结果示：激动剂组的LX-2增殖抑制作用明显，与抑制剂组、联合干预组及空白对照组相比，具有显着性差异（P<0.01）。2、RT-PCR结果示：激动剂组PPARγmRNA的表达（1.227±0.01）较其他3组明显升高（P<0.01）；激动剂组iNOS mRNA的表达（0.377±0.022）较其他3组明显降低（P<0.01）；且PPARγ与iNOS mRNA表达存在负相关（相关指数为r=-0.8870，P=0.0080，P<0.01）。3、硝酸还原酶结果示：激动剂组NO含量明显（44.89±13.01）μmol/L低于其他3组,具有显着性差异（P<0.01）。4、ELISA检测结果示：激动剂组I型胶原含量（31.807±1.680）ng/ml、α-SMA的表达量(23.351±2.801)ng/ml与其他3组相比，具有显着性差异（P<0.01）。结论：PPARγ激动剂可以上调PPARγ的表达，抑制LX-2增殖，下调iNOS mRNA表达，减少NO产生，降低I型胶原及α-SMA分泌，发挥抗纤维化作用；并发现PPARγ与iNOS mRNA的表达具有负相关关系。
李娜, 王信, 孙萍, 孙爱萍, 张群群[9]2019年在《桂枝茯苓方治疗妇科血瘀证类疾病的物质基础研究进展》文中研究说明桂枝茯苓方首见于张仲景《金匮要略》,主治妇人症病,是目前治疗妇科血瘀证的首选基础方药。从古籍入手,针对桂枝茯苓方及其方中单味药,查阅中外文献对桂枝茯苓方方证、治疗妇科血瘀证物质基础进行归纳整理,为其深入研究提供参考。
参考文献：
[1]. γ-干扰素抗肝纤维化动物实验与临床观察(摘要)[J]. 蔡卫民, 陈峰, 翁红雷, 刘荣华. 中西医结合肝病杂志. 1998
[2]. 干扰素-γ抗肝纤维化动物实验和临床研究[D]. 翁红雷. 浙江大学. 2001
[3]. γ-干扰素抗肝纤维化临床与病理疗效观察[J]. 丁曙光, 张志清. 中西医结合肝病杂志. 2003
[4]. 抗肝纤维化治疗研究的若干问题[J]. 蔡卫民. 临床肝胆病杂志. 2011
[5]. γ干扰素抗肝纤维化机理的动物实验研究[C]. 蔡卫民, 陈峰, 陶君, 翁红雷, 郑敏. 第十叁次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编. 2004
[6]. 双氢青蒿素抑制肝星状细胞收缩发挥抗肝纤维化门脉高压作用及其机制研究[D]. 许文萱. 南京中医药大学. 2017
[7]. 安珐特与γ-干扰素抗肝纤维化的比较[J]. 陶君, 夏琦, 蔡卫民, 黄, 朱辰. 中西医结合肝病杂志. 2006
[8]. LX-2细胞中PPARγ对iNOS的影响及其抗肝纤维化的作用[D]. 黄津. 南昌大学. 2014
[9]. 桂枝茯苓方治疗妇科血瘀证类疾病的物质基础研究进展[J]. 李娜, 王信, 孙萍, 孙爱萍, 张群群. 中草药. 2019
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