常德市食品药品检验所 湖南常德 415000
【摘 要】目的：对蒸制三七粉应用高效液相色法测定皂苷类成分的具体效果进行研究与分析。方法：应用高效液相色法测定蒸制三七粉中皂苷类成分，对进样精密度、重复性实验、加样回收率、色谱峰快速鉴定结果进行的观察与分析。结果：高效液相色谱法测定蒸制三七粉中皂苷类成分的进样精密度良好，相对标准偏差均＜2.0％；高效液相色谱法对蒸制三七粉中皂苷类成分的测定重复性良好；高效液相色谱法对蒸制三七粉中皂苷类成分的测定平均回收率在96.39％~104.10％范围内，平均回收率区间理想；在高效液相色谱法检验下，样品中可见未炮制三七中不含的Rg3-20R、Rg3-20s、Rh1-20s、Rh1-20R、Rg6、F4、Rh4、Rk3、Rk1、以及Rg5等皂苷类成分。结论：高效液相色谱法对蒸制三七粉中皂苷类成分的测定效果确切，三七粉经蒸制加工后会生成Rg3-20R、Rg3-20s、Rh1-20s、Rh1-20R、Rg6、F4、Rh4、Rk3、Rk1、以及Rg5等皂苷类成分，这对于提高血液免疫系统功能的意义确切，证实了蒸制三七粉在中医炮制加工领域中确切的应用价值。
【关键词】蒸制三七粉；皂苷；高效液相色谱法
在中医研究领域中，三七具有生消熟补的功效，但经炮制加工处理后三七成分含量以及药物功效是否发生变化，有关这一问题尚未形成临床共识。本文即尝试应用高效液相色谱法针对蒸制三七粉中的皂苷类成分含量及其变化进行检测与分析，以验证蒸制三七粉的临床应用价值，并将相关结果报告如下：
1 实验方法
1.1 仪器与试剂
实验所使用仪器包括岛津LC-20AB高效液相色谱检测仪，Sartoriμs CPA225D电子分析天平；试验所使用试剂包括：蒸制加工熟三七粉，各类妊娠皂苷、三七皂苷标准品，超纯水，甲醇试剂、乙腈试剂。
1.2 实验条件
填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，色谱柱为SB-C18 4.6mm×250.0mm，5.0um，流动相A为水，流动相B为乙腈，检测波长为203nm，流速为1.0mL/min，柱温为30.0℃。
1.3 实验方法
取各类皂苷类成分对照品加入甲醇制备为对照品混合溶液，充分混合均匀后备用。取蒸制三七粉0.5g过4#筛，精密称取并置于10.0ml容量瓶中，加8.0ml剂量甲醇，经超声处理0.5h后自然冷却至室温状态，加甲醇试剂定容至刻度线，混合均匀后经0.45um微孔滤膜过滤后取滤过液作为供试品溶液。
2 结果
2.1 进样精密度
称取同一混合对照品溶液，根据前述测定方法与条件进行6次重复检测，进样量设置为20.0uL，对成峰面积进行记录，并计算进样精密度。具体测定结果如下表（见表1）所示。结合表1数据可见，高效液相色谱法测定蒸制三七粉中皂苷类成分的进样精密度良好。
表1：皂苷成分相对标准偏差计算值示意表
2.2 重复性实验
取样品精密称取6份，根据前述方法进行供试品以及混合对照品溶液制备，对线性曲线进行测定并计算相对标准偏差。具体测定结果如下表（见表2）所示。结合表2数据可见，高效液相色谱法对蒸制三七粉中皂苷类成分的测定重复性良好。
表2：皂苷成分相对标准偏差计算值示意表
2.3 加样回收率
利用加样回收法，精密称取9分含量已知供试品，每份供试品重量为0.25g，置于10.0ml容量品中，分别加入对照品溶液，根据前述方法制备供试品溶液并对成分含量进行计算，对平均回收率进行测定。具体测定结果如下表（见表3）所示。结合表数据可见，高效液相色谱法对蒸制三七粉中皂苷类成分的测定平均回收率在96.39％~104.10％范围内，平均回收率区间理想。
表3：皂苷成分平均回收率计算值示意表
2.4 色谱峰快速鉴定
样品以及混合对照品高效液相色谱法检测结果分别如下图（见图1~图2）所示。对比图1、图2数据可见：在高效液相色谱法检验下，样品中可见未炮制三七中不含的Rg3-20R、Rg3-20s、Rh1-20s、Rh1-20R、Rg6、F4、Rh4、Rk3、Rk1、以及Rg5等皂苷类成分。
图1：样品高效液相色谱法检测结果示意图
3 讨论
有研究中报道，熟三七经蒸制炮制加工后，Rg1、Rb1、以及R1等主要皂苷成分含量明显降低，但所减少皂苷类成分是否发生破坏或形成其他新活性物质尚未得到明确临床结论。本研究中尝试应用高效液相色谱法对蒸制三七粉中皂苷类成分进行检测分析，结果显示经炮制加工后，三七皂苷、挥发油等主要成分在结构含量上会发生巨大改变，虽会导致其正血化瘀的功效一定程度降低，但却能够增加补血价值，且还可以生成Rg3-20R、Rg3-20s、Rh1-20s、Rh1-20R、Rg6、F4、Rh4、Rk3、Rk1、以及Rg5等皂苷类成分，这对于提高血液免疫系统功能的意义确切，证实了蒸制三七粉在中医炮制加工领域中确切的应用价值。
参考文献：
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论文作者:谢辉
论文发表刊物:《中国蒙医药》2017年第17期
论文发表时间:2018/3/1
标签：高效论文; 皂苷论文; 成分论文; 液相论文; 回收率论文; 色谱法论文; 含量论文; 《中国蒙医药》2017年第17期论文;