孙红[1]2016年在《糖基化终产物介导糖尿病肾病肾脏脂质沉积的分子机制》文中认为第一部分：2型糖尿病大鼠肾脏胆固醇代谢异常背景及目的：糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)是糖尿病(Diabetes mellitus, DM)的主要慢性并发症之一,也是终末期肾病(End-stage renal disease, ESRD)最主要的原因,严重影响人们的健康和生活质量。近年来,已有研究证实2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus, T2DM)的动物模型及DN患者的肾脏均存在脂质沉积,并且肾脏的脂质沉积可能与肾功能障碍存在一定的联系。但至今,肾脏脂质沉积的机制仍不完全清晰。因此,本实验的研究目的在于探索T2DM时肾脏脂质沉积的分子机制,以及肾脏脂质沉积能否影响肾脏形态和功能,最终促进DN的发生和发展。方法：SD大鼠适应性喂养1 w后,一部分大鼠维持普通饮食(Normal control, NC),另一部分大鼠给予高脂高糖喂养4 w后,腹腔注射小剂量链脲佐菌素(Streptozocin, STZ,30mg/kg)。72 h后,经尾静脉采血测定随机血糖,以血糖>16.7 mmol/L确定为T2DM模型造模成功。再将成功造模的T2DM大鼠分为糖尿病组(DM)和阿托伐他汀治疗组(10mg/kg/d, DM+AT)。代谢笼收集大鼠24 h尿,检测尿蛋白及尿中性粒细胞明胶酶关联脂质运载蛋白(Urinary neutrophil gelatinase associated lipocalin, u-NGAL).药物干预8 w后,处死各组大鼠并留取血和肾组织标本,检测血清空腹血糖(Fasting blood glucose, FBG)。肌酐(Creatinine, Cr)、尿素氮(Blood urea nitrogen, BUN)、总甘油叁酯(Total triglycerides, TG)、总胆固醇(Total cholesterol, TC)和低密度脂蛋白(Low density lipoprotein, LDL)，一部分’肾组织制作冰冻切片用于油红O染色,另一部分肾组织制作石蜡切片用于苏木精-伊红染色(HE染色)、过碘酸雪夫染色(PAS染色)及马松染色(Masson染色)。剩余肾组织用于定量Real-time PCR和Western blot检测肾组织3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methyl glutaric acyl coenzyme A reductase, HMG-CoAR)、低密度脂蛋白受体(Low density lipoprotein receptor, LDLr)、固醇元件结合蛋白-2(Sterol regulatory element binding proteins-2, SREBP-2)及其裂解蛋白(SREBP cleavage activating protein, SCAP)的基因和蛋白表达。结果：1.DM组大鼠的体重明显低于NC组大鼠(P<0.05),肾重／体重(KW/WT)高于NC组大鼠(P<0.05),FBG也显着高于对照组(P<0.05),并且血脂,包括TG、TC和LDL也比NC组大鼠显着增高(P<0.05)。AT治疗8 w后,与DM组相比,DM+AT组大鼠的体重、KW/WT和FBG改变不明显(P>0.05)；血TC和LDL明显低于DM组(P<0.05),但TG改变不明显(P>0.05)。2.与NC组相比,DM组大鼠的Cr及BUN明显增高(P<0.05)。而DM+AT组大鼠的血清Cr与DM组相比明显降低(P<0.05),两组的BUN差异并不显着(P>0.05)。在0w、2w、4w、8w时,DM组大鼠的尿蛋白比NC组大鼠的尿蛋白水平高(P<0.05)。并且,随着时间的延长,DM组大鼠的尿蛋白呈现不断增加的趋势(P<0.05)。AT治疗2 w、4 w和8 w后,DM+AT组的24 h尿蛋白比同期DM组的24 h尿蛋白低,并且差异均有统计学意义(P<0.05)。第8 w时,DM组大鼠的u-NGAL明显高于NC组(P<0.05)。而AT治疗后,与DM组大鼠相比,DM+AT组大鼠的24 h尿u-NGAL明显降低(P<0.05)。3.HE染色显示,DM组大鼠肾脏出现空泡细胞,尤其在是肾小管上皮细胞,空泡现象比较明显,而NC组大鼠的肾脏细胞并未发现空泡变性。进一步油红O染色发现,大量被染成橘红色的脂滴沉积于肾脏,肾小管上皮细胞沉积尤为明显,肾小球也存在脂质沉积,而对照组大鼠的肾脏未发现脂滴的形成。与此相比,DM+AT组只有少量的脂滴沉积于肾脏。PAS染色显示DM组大鼠肾小球系膜基质增生明显,PASM染色显示DM组大鼠的肾小球及肾小管基底膜均明显增厚,而在NC组大鼠的肾组织未有发现系膜基质增生及基底膜增厚的病理改变。AT治疗8 w后,DM+AT组大鼠的肾小球系膜基质增生、肾小球及肾小管基底膜增厚明显改善。4. Real-time PCR和Western blot结果显示,与NC组相比,DM组大鼠肾脏组织HMG-CoAR、LDLr、SREBP-2、SCAP的mRNA和蛋白表达明显高于NC组(P<0.05)。AT治疗8 w后,与DM组相比,DM+AT组大鼠肾脏组织HMG-CoAR、LDLr和SREBP-2的mRNA和蛋白表达明显增高(P<0.05),而SCAP的mRNA和蛋白表达改变不明P>0.05)。结论：1.T2DM大鼠肾脏存在脂质沉积,而减少肾脏脂质沉积可以明显改善肾脏组织形态及功能。2.T2DM大鼠肾脏SCAP-SREBP-2-HMG-CoAR/LDLr胆固醇负反馈调节通路紊乱,这可能与其肾脏脂质沉积(肾脏实质细胞泡沫化)有关。第二部分：糖基化终产物介导肾脏胆固醇代谢紊乱背景及目的：DN病因复杂,发病机制众多,其中慢性高血糖引起的糖基化终产物(Advanced glycation end products, AGEs)加速形成是DN的重要发病机制之一。AGEs大量沉积是DM时动脉粥样硬化的泡沫细胞及脂肪肝形成的重要原因。因此,在第一部分研究结果的基础上,本研究将进一步探索AGEs是否能够引起T2DM时。肾脏泡沫细胞形成,从而影响。肾脏的形态和功能,最终导致DN。方法：体内实验：将成功造模的T2DM大鼠分为糖尿病组(DM)和氨基胍治疗组(100 mg/kg/d, DM+AG)。代谢笼收集大鼠24 h尿,检测尿蛋白及u-NGAL。药物干预8 w后,处死各组大鼠并留取血和肾组织标本,检测血清羧甲基赖氨酸(Carboxy-methyl-lysine, CML)。一部分肾组织制作冰冻切片用于油红O染色,另一部分肾组织制作石蜡切片用于PAS染色、Masson染色及免疫组化。剩余肾组织用于定量Real-time PCR和Western blot检测肾组织HMG-CoAR、LDLr、SREBP-2及SCAP的基因和蛋白表达。体外实验：将人肾近曲小管细胞系(Human renal proximal tubule cells, HK-2)按照不同干预条件分为6组,分别为Ctr组、CML组(给予50 μg/mL CML)、CML+anti-RAGE组(给予50 μg/mL CML和10 μg/mL anti-RAGE)、LDL组(给予50 μg/mL LDL)、 CML+LDL组(给予50 μg/mL CML和50 μg/mL LDL)、CML+anti-RAGE+LDL组(给予50 μg/mL CML.10 μg/mL anti-RAGE和50 μg/mL LDL)。干预24 h后,油红O染色检测细胞内脂质沉积情况,酶学方法检测HK-2细胞内胆固醇酯(Cholesteryl ester, CE)的水平,Real-time PCR和Western blot检测HK-2细胞}IMG-CoAR、LDLr、SREBP-2和SCAP的基因和蛋白表达,用转染pEGFP-SCAP的HK-2细胞和抗高尔基抗体染色后,应用激光共聚焦显微镜观察细胞SCAP-SREBP复合物在内质网和高尔基体的定位。结果：体内实验：1.与NC组相比,DM组大鼠血清CML水平明显增高(P<0.05),而DM+AG组大鼠的血清CML明显低于DM组(P<0.05)。并且,免疫组化结果显示,与NC组相比,DM组肾脏的肾小管、。肾小球、肾小球系膜、基底膜及肾间质均有CML沉积,但AG干预8w后,与DM组相比,DM+AG组CML沉积明显减少。2.油红O染色结果显示,与DM组相比,DM+AG组大鼠肾脏脂质沉积减少。3.实验起初,DM组与DM+AG组的24 h尿蛋白总量没有明显差异(P>0.05)。AG干预4 w后,与DM组相比,DM+AG组的24 h尿蛋白总量明显下降(P<0.05)。AG继续干预8 w后,DM+AG组的24 h尿蛋白总量仍然比同期DM组的24 h尿蛋白总量低(P<0.05)。AG干预8w后,DM+AG大鼠的24 h尿u-NGAL含量也明显降低(P<0.05)。PAS和PASM染色结果显示,与DM组相比,DM+AG组大鼠的肾小球系膜基质增生、肾小球及肾小管基底膜增厚明显改善。4. Real-time PCR和Western blot结果显示,DM+AG组大鼠肾脏组织HMG-CoAR、LDLr、 SREBP-2和SCAP的mRNA和蛋白表达也明显比DM组低(P<0.05)。体外实验：1.与Ctr组相比,CML组CE值显着增加(36.66±11.55 μmol/L vs.110.00±21.79 μmol/L,P<0.05)；与CML组相比,CML+anti-RAGE组的CE值显着降低(110.00±21.79μmol/L vs.61.67±18.93 μmol/L, P<0.05); CML+LDL组与LDL组相比CE显着增加(111.67±18.93 μmol/L vs.150.00±10.00 μmol/L, P<0.05); CML+anti-RAGE+LDL组与CML+LDL组相比CE值显着降低(150.00±10.00 μmol/L vs.83.33±15.28 μmol/L, P<0.05)。油红O染色结果显示当细胞培养基中仅有50 μg/mL CML或100μg/mL LDL存在时,细胞内有少许红染脂滴存在,当同时有CML和LDL存在时,细胞内的红染脂滴显着增多,而anti-RAGE可以明显抑制CML引起的HK-2细胞内脂滴的增多。2. Real-time PCR和Western blot结果显示,CML组HMG-CoAR、LDLr、SREBP-2和SCAP的mRNA和蛋白表达明显比Ctr组高(P<0.05),而CML+anti-RAGE组HMG-CoAR、LDLr、SREBP-2和SCAP的mRNA和蛋白表达明显比CML组降低(P<0.05); LDL组与Ctr组相比,HMG-CoAR、LDLr、SREBP-2和SCAP的mRNA明显降低(P<0.05)；在高脂状态下,CML+LDL组与LDL组相比,HMG-CoAR、 LDLr、SREBP-2和SCAP的mRNA和蛋白表达明显增高(P<0.05),而CML+anti-RAGE+LDL组HMG-CoAR、LDLr、SREBP-2和SCAP的mRNA和蛋白表达明显比CML+LDL组低(P<0.05)。3.激光共聚焦结果显示,与Ctr组相比,CML组SCAP从内质网向高尔基体的移位显着增加,而CML+anti-RAGE组SCAP的移位与CML组相比明显降低；LDL组细胞内胆固醇处于较高水平,HK-2细胞内SCAP从内质网向高尔基体移位与Ctr组相比明显减少；CML+LDL组可观察到CML明显促进高脂状态下的HK-2细胞SCAP从内质网向高尔基体移位,而CML+anti-RAGE+LDL组SCAP从内质网向高尔基体的移位与CML+LDL组相比显着减少。结论：1.T2DM时,肾小管上皮细胞泡沫化,SCAP-SREBP-2-HMG-CoAR/LDLr胆固醇负反馈调节通路紊乱,与体内高CML水平有关,这可能是肾脏形态及功能损伤的原因。2.抑制AGEs (CML)的合成或阻断CML-RAGE通路,能够减少肾小管上皮细胞脂质沉积,改善肾脏形态及功能。第叁部分：糖基化终产物通过内质网应激致肾小管上皮细胞胆固醇代谢紊乱背景及目的：某些病理条件,包括高AGEs水平,能够干扰内质网的正常生理功能,诱发细胞内质网应激(Endoplasmic reticulum stress, ERS)。而ERS能够引起细胞内胆固醇代谢紊乱,从而导致细胞脂质沉积,但其具体机制仍不完全清晰。研究表明,SCAP和SREBP-2都是重要的内质网蛋白,因此,在第二部分研究结果的基础上,本实验将进一步于探究AGEs能否通过触发肾小管上皮细胞ERS,从而引起SCAP和SREBP-2的表达及功能障碍,最终导致肾小管上皮细胞脂质沉积。方法：将HK-2细胞按照不同干预条件分为4组,分别为Ctr组、CML组(给予50 μg/mL CML)、 CML+4-PBA组(给予50 μg/mL CML和5 mmol/L 4-PBA)、4-PBA组(给予5 mmol/L 4-PBA)。干预24 h后,用CCK-8试剂盒和Annexin V-FITC试剂盒分别检测HK-2细胞活力和凋亡情况,油红O染色检测细胞内脂质沉积情况,酶学方法检测HK-2细胞内CE的水平,Real-time PCR和Western blot检测HK-2细胞HMG-CoAR、LDLr、SREBP-2、SCAP、葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulated protein 78,GRP78)及C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)的基因和蛋白表达。结果：1.CML干预HK-2细胞24 h后,与Ctr组比较,CML组细胞活力下降(P<0.05),而CML+4-PBA组较CML组细胞活力有所增加(P<0.05)；单用4-PBA干预HK-2细胞24 h后,与Ctr组比较,细胞活力改变不明显(P>0.05)。CML干预HK-2细胞24h后,HK-2细胞凋亡数量较Ctr组有所增加(P<0.05),而CML+4-PBA组较CML组细胞凋亡减少(P<0.05)；单用4-PBA干预HK-2细胞24 h后,与Ctr组比较,细胞凋亡不明显(P>0.05)。2.与Ctr组相比,CML组CE值显着增加(53.33±11.55 μmol/L vs.116.67±32.15 μmol/L, P<0.05); CML+4-PBA组与CML组相比CE值显着降低(116.67±32.15 μmol/L vs.53.33±5.77, P<0.05);与Ctr组相比,4-PBA组的CE改变不明显(53.33 ±11.55 μmol/L vs.53.33±5.77 μmol/L, P>0.05)。油红O染色结果显示有CML存在时,细胞内的红染脂滴显着增多,而CML+4-PBA组的红染脂滴明显比CML组减少；4-PBA组的HK-2细胞内并未发现红染脂滴。3. Real-time PCR和1Western blot结果显示,CML组HMG-CoAR、LDLr、SREBP-2和SCAP的mRNA和蛋白表达明显比Ctr组高(P<0.05),而CML+4-PBA组HMG-CoAR、 LDLr、SREBP-2和SCAP的mRNA和蛋白表达明显比CML组低(P<0.05); 4-PBA组与Ctr组相比HMG-CoAR、LDLr、SREBP-2和SCAP的mRNA口蛋白表达没有明显改变(P>0.05)。CML组GRP78和CHOP的mRNA和蛋白表达明显比Ctr组高(P<0.05),而CML+4-PBA组GRP78和CHOP的mRNA和蛋白表达明显比CML组低(P<0.05); 4-PBA组与Ctr组相比GRP78和CHOP的mRNA和蛋白表达没有明显改变(P>0.05)。结论：1.肾小管上皮细胞泡沫化,SCAP-SREBP-2-HMG-CoAR/LDLr胆固醇负反馈调节通路紊乱,这可能是由CML触发肾小管上皮细胞ERS有关。2.而抑制ERS可以明显改善CML引起的胆固醇负反馈调节通路的紊乱,从而减少肾小管上皮细胞脂质沉积。总结：T2DM时,体内增多的AGEs (CML)可能通过触发肾小管上皮细胞ERS,造成SCAP和SREBP-2表达增加、SCAP功能紊乱,使更多的SREBP-2被运载到高尔基体,水解激活,从而上调HMG-CoAR和LDLr的表达,使肾小管上皮细胞合成和吸收胆固醇增多,肾脏脂质沉积,最终损伤肾脏形
罗春梅[2]2007年在《多廿醇对3-羟3-甲基戊二酰辅酶A还原酶活性的抑制作用研究》文中进行了进一步梳理目前临床上常用他汀类药物治疗高胆固醇血症患者,其作用机制是通过竞争性抑制,使胆固醇合成关键酶3-羟-3-甲基戊二酸-辅酶A还原酶(HMG-CoA还原酶)活性降低,减少胆固醇合成,达到治疗目的。由于他汀类药物有毒副作用,不宜长期服用,使高胆固醇血症、冠心病的控制变得困难。近10多年,一种从甘蔗腊质或蜂蜜中提取出来具有多个脂肪族伯醇的化合物--多廿醇(Policosanol)被发现,多项动物实验和临床试验都揭示多廿醇具有降低胆固醇和抗血小板的药理作用。由于它是一种比较安全的天然化合物,我们前期的毒理学实验证明其毒性属于无毒级,体内无明显蓄积作用,可长期服用,对高胆固醇血症、冠心病的预防和治疗展示广泛的临床运用前景。目前关于多廿醇的功能在临床上已经得到很好的研究和证实。大量的动物实验和临床试验都揭示多廿醇有着和他汀类相同的降胆固醇作用,能够以更低的剂量获得相同的甚至是更好的降血脂效果。但是,多廿醇降低胆固醇的确切机理尚未有定论。目的本研究采用体外细胞培养实验方法,紫外分光-速率法检测HMG-CoA还原酶活性,从而判断受试物多廿醇对细胞内HMG-CoA还原酶活性的抑制作用,拟探讨多廿醇降胆固醇的作用机制。方法1、为了确定本次实验研究的药物用药剂量,确保实验结果的准确性,对受试药物(多廿醇),酶活性促进剂(胰岛素)和受试药物溶剂(乙醇)进行细胞毒性试验,以明确这些因素对HepG2细胞生长的直接影响程度。细胞毒性试验采用MTT活性细胞检测法,此外用乳酸脱氢酶漏出率反映对HepG2细胞生长的破坏程度,用台盼兰染色法检测HepG2细胞存活率。2、HMG-CoA还原酶活性测定方法建立是参考紫外分光-速率法,经适当改进,测定还原型辅酶Ⅱ在反应过程中被氧化的量(340nm吸收锋下降率)来反映HMG-CoA还原酶活性。紫外分光-速率法适用于可溶性HMG-CoA还原酶活性测定,本实验对原方法进行改进,增加精密过滤和加凝聚剂高速离心沉降微粒体,消除比色中散射光的影响,使该方法适用于不溶性HMG-CoA还原酶活性测定。3、实验分组及处理以人肝癌细胞株(HepG2)为实验细胞,细胞经过体外培养传代后采用完全随机设计的原则进行分组,为了观察药物和酶促进剂的交互作用,多廿醇和胰岛素采用正交实验分组,多廿醇和胰岛素分组浓度参考MTT试验的结果。分为:对照组、阳性对照组、多廿醇组、胰岛素组、多廿醇(含高、中、低)和胰岛素(含高、中、低)的正交实验交叉浓度组,共17组。为使多廿醇的体外培养和体内生化代谢过程齐同,加入含肝药物代谢酶的S9液共同培养。以上各组细胞在CO_2培养箱中37℃培养6小时,培养终止后收获细胞,钙离子梯度离心法分离微粒体,按上述紫外分光-速率法测定所分离到微粒体中的HMG-CoA还原酶活性和整体细胞中的HMG-CoA还原酶活性。结果1、细胞培养6小时后,多廿醇0.5μg/ml、5μg/ml和50μg/ml组MTT试验细胞抑制率分别为8.5%,19.2%和49.5%。胰岛素0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/m、25μg/ml和50μg/ml组MTT试验抑制率分别为+0.85%、-3.59%、-8.77%、-17.44%和+11.18%。多廿醇5μg/ml、10μg/ml、20μg/m和50μg/ml组的乳酸脱氢酶漏出分别为52.1 U/L、79.6 U/L、121.7 U/L和178.3 U/L。细胞计数存活率分别为92.2%、88.0%、80.1%和70.9%。由此可确定多廿醇受试浓度设为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml,胰岛素受试浓度设为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml。2、采用紫外分光-速率法用岛津UV-1700仪器进行HMG-CoA还原酶活性测定,经过对NADPH扫描图谱分析,不同浓度的NADPH均在340nm波长处展示很好的特征吸收峰,NADPH标准曲线直线浓度范围在0～0.5mmol/L之间,灵敏度为0.002 mmol/L,加标准NADPH 0.2 mM测试回收率大于97%,重现性均数((?))为0.1986mmol/L,标准差(S)为0.0028mmol/L,变异系数(CV)为1.42%,95%可信区间(0.193mmol/L,0.2041mmol/L),NADPH在0.2 mM时自然氧化速率为0.0009/min。经过方法改进后,比色液澄清无混悬物,能满足HMG-CoA还原酶活性测定实验要求,克服了放射性标记法数据变异大的缺点。3、多廿醇对HepG2细胞微粒体和整体细胞HMG-CoA还原酶活性测定实验结果显示,与对照组比较,胰岛素在5～20μg/ml范围对HMG-CoA还原酶活性均呈促进作用,而且有浓度依赖关系。对照组比较,多廿醇在5～20μg/ml范围对HMG-CoA还原酶活性均呈抑制作用,也有浓度依赖关系。在正交分组实验中,多廿醇对HMG-CoA还原酶活性的抑制作用与胰岛素的促进作用有互相抵消的趋势,并显示浓度依赖关系。多廿醇对HMG-CoA还原酶活性的抑制作用在HepG2细胞微粒体和HepG2细胞整体细胞实验都呈相同的效应。结论本研究证实在体外细胞培养条件下,多廿醇对HepG2细胞胆固醇合成关键酶HMG-CoA还原酶活性有显着的抑制作用。证明在多廿醇降低胆固醇药理过程中,HMG-CoA还原酶活性抑制可能是一主要的作用途径。
孟丽, 王丽, 刘芳, 丑天胜, 王威[3]2018年在《金针菇HMG-box转录因子鉴定及一个候选基因的差异表达分析》文中认为食用菌的原基形成受到环境因子和内源基因的共同调控,转录因子在其生长发育过程中能够起到关键作用。本研究在已测序金针菇单核菌株L11全基因组中鉴定到29个高速泳动蛋白(high-mobility-group box,HMG-box)转录因子编码基因。基于金针菇双核菌株H1123各发育时期转录组数据,筛选到一个与金针菇原基形成相关的HMG-box转录因子基因Fv-hmg。通过同源比对发现Fv-hmg的DNA序列在6个不同金针菇菌株中十分保守,一致性为98.38%,有92个SNP位点。克隆分析表明,该基因长度为1 517bp,含有一个内含子。该基因编码489个氨基酸残基的蛋白序列,含有一个HMG-box结构域。通过实时荧光定量PCR和转录组测序共同分析表明,该基因在金针菇原基时期的表达量比双核菌丝时期高达4倍以上,具有显着性差异(P<0.01),由此推测该转录因子参与调控金针菇的原基形成。HMG-box转录因子Fv-Hmg在金针菇原基形成过程中的作用仍需进一步研究。
王沛丽, 王芳, 丁楠[4]2015年在《来曲唑和克罗米芬分别联合HMG治疗多囊卵巢综合征疗效的系统评价》文中研究指明目的运用Meta分析的方法探究来曲唑(LE)与克罗米芬(CC)分别联合人绝经期促性腺激素(HMG)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者的疗效,为临床用药提供一定的依据。方法拟定严格的文献纳入标准和排除标准,检索中知网、维普、万方、CBM、Pubmed、The cochrane library等数据库,提取出相关的随机对照试验(RCT)文献,对各文献进行质量评价后,采用RevMan5.3软件对各文献进行数据分析。结果 (1)共6篇文献纳入本研究中,包含658例PCOS患者,共746个周期;(2)将上述筛选后的文献进行Meta分析,得出LE+HMG组与CC+HMG组在HMG用量[0.67,95%CI(-0.66,2.00),P=0.33]、HCG日优势卵泡数[-0.47,95%CI(-1.01,0.07),P=0.08]、周期妊娠率[1.34,95%CI(0.88,2.04),P=0.17]、流产率[-0.11,95%CI(-0.38,0.16),P=0.43]、HCG日子宫内膜厚度[0.75,95%CI(-0.05,1.54),P=0.07]之间的差异均无统计学意义;而LE+HMG组不良事件发生率显着低于CC+HMG组[-0.05,95%CI(-0.08,-0.01),P=0.007]。结论 LE+HMG在PCOS患者促排卵方面有着与CC+HMG相似的效果,但可以降低不良事件的发生率,在临床上有一定的应用前景。
李春金, 郭媛媛, 杨启航, 王彤, 王秋梅[5]2018年在《甘蓝型油菜HMG基因家族的生物信息学分析》文中研究表明为研究甘蓝型油菜HMG(high mobility group)基因家族的起源、进化和功能,利用生物信息学方法对甘蓝型油菜和其近缘物种HMG基因家族进行鉴定,并对其进化、基因结构、组织表达、直系旁系同源基因进行系统分析。在甘蓝型油菜中鉴定到45个HMG家族成员,并根据进化树和基因结构将其分成5组。染色体定位发现,19条染色体中有18条染色体有HMG基因,说明该家族基因分布较广泛。在甘蓝型油菜与甘蓝、白菜和拟南芥分别鉴定到45、47和26个直系同源基因对。在甘蓝型油菜中鉴定到28个旁系同源基因对,而在其它3个物种中则比较少,这可能与甘蓝型油菜的多次基因组加倍有关。对45个甘蓝型油菜BnHMG基因在根和叶中的表达模式进行分析,结果显示,大多数基因在根和叶中均有表达,且呈现出不同的表达模式。
董玉国[6]2017年在《短密青霉生产霉酚酸发酵策略优化和代谢工程研究》文中认为临床医学发展至今,器官移植已经成为外科领域的研究重点,因此抗免疫排斥反应抗生素的研发应用水平需要进一步提高。霉酚酸(Mycophenolicacid,MPA)是短密青霉(Penicilliumbrevicompactum)次级代谢分泌产生的一种抗生素,它具有抗真菌、抗肿瘤和免疫抑制的作用。霉酚酸对次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶具有可逆性抑制作用,并对淋巴细胞活性起到选择性抑制作用。它的2-乙基酯类衍生物——霉酚酸酯(Morpholinoethyl Ester of Mycophenolic Acid,MMF)是新一代免疫抑制剂,在器官移植和自身免疫性疾病的临床治疗方面展示了广泛的应用空间和前景。作为合成霉酚酸酯的前体化合物,提高霉酚酸工业化发酵生产水平具有重要的研究意义。本文对短密青霉ATCC16024在液体环境发酵生产霉酚酸初始培养基配方和补料策略进行优化,通过对菌种合成霉酚酸代谢途径的定向遗传改造,提高工业菌种的生产性能,并对丝状菌的发酵放大规律进行研究。(1)短密青霉发酵生产霉酚酸初始培养基配方优化运用Plackett-Burman设计法和响应面分析法,优化霉酚酸初始发酵培养基组分,最终确定优化后的发酵培养基配方:葡萄糖93.43 g/L,甘氨酸13.36 g/L,KH2PO4 3 g/L,MgSO4·7H2O 2g/L,L-蛋氨酸0.5g/L,微量元素。在7L发酵罐中发酵验证,霉酚酸产量达到1.72 g/L,实现了响应面优化预期效果,比初始培养基发酵产量提高了63.8%。(2)组合补料策略提高短密青霉发酵生产霉酚酸的产量对短密青霉ATCC16024生产霉酚酸发酵策略进行了优化。在7L发酵罐中,在发酵120 h 后即霉酚酸生产合成期,分别设计 CN-feeding strategy(F-CN)、pH-controlled strategy(F-pH)、Met-feeding strategy(F-Met)策略并对相关参数进行了考察分析。实验结果显示,叁种策略控制下霉酚酸产量分别达到2.23 g/L、1.92g/L和2.03g/L,比分批发酵实验分别提高了29.65%、11.63%、18.02%。在上述基础上,建立了一种组合补料策略(F-CPM)。发酵120h后,通过叁种方式控制发酵过程:1)补加质量比C/N=7:1的葡萄糖-甘氨酸;2)控制pH维持在6.5;3)补加蛋氨酸,使其浓度达到1.0 g/L。在本组合补料策略控制下,发酵240h时菌体最大干重(DCWmax)达到45.77g/L,312h时霉酚酸最大产量(Pmax)达到2.68 g/L,比分批发酵提高了55.81%。(3)透明颤菌血红蛋白基因在短密青霉菌中的克隆转化与表达通过根癌农杆菌LBA4404介导转化,编码透明颤菌血红蛋白的结构基因(Vitreoscilla Hemoglobingene,vgb)在短密青霉ATCC16024中克隆,从而表达透明颤菌血红蛋白(VHb),有效的改善菌体对氧的摄取能力,提高了霉酚酸的发酵产量。通过潮霉素(Hygromycin B)抗性筛选、基因鉴定和7L反应器中发酵验证得出,vgb基因在短密青霉中成功获得了克隆;VHb的表达提高了短密青霉的菌体密度,转化子霉酚酸产量达到2.18 g/L,比初始菌株提高了 27.5%。(4)短密青霉HMG-CoA裂解酶基因插入失活提高霉酚酸发酵产量运用巢式PCR和基因步移技术,首次获得了霉酚酸途径中的一个关键酶HMG-CoA裂解酶的全酶基因序列。同时设计对应简并引物获得了霉酚酸生物合成途径中其余4个关键酶的基因片段序列。利用根癌农杆菌LBA4404转化系统(ATMT),将HMG-CoA裂解酶基因进行了定向插入失活。潮霉素抗性筛选、基因鉴定等结果表明:HMG-CoA裂解酶基因定向敲除成功,霉酚酸产量达到2.94 g/L,较初始菌株提高了70.9%。ATMT转化系统在短密青霉发酵生产霉酚酸的遗传改造,为该菌通过基因工程方法提高霉酚酸发酵水平提供了强有力的工具。本课题阐述了提高短密青霉发酵生产霉酚酸产量的一系列方法。通过设计基于碳氮源配比分段式流加发酵策略,对于碳氮源的配比在菌体生长和霉酚酸生产阶段进行优化。深入探索霉酚酸合成代谢机理、发酵调控机理,跟踪菌丝形态、发酵液颜色、溶氧等参数,优化霉酚酸发酵策略。开展基于代谢工程技术的代谢网络关键酶研究,采用巢式PCR和基因步移等技术手段分析霉酚酸合成途径中基因簇和关键酶基因,通过对代谢途径中关键酶进行基因水平研究,进而对霉酚酸的发酵生产进行调控。
席稳燕, 张欣, 韩红芳, 毛会, 李兰[7]2015年在《来曲唑或氯米芬联合人绝经期促性腺激素用于PCOS妇女促排卵疗效的比较》文中研究表明目的评估来曲唑(LE)或氯米芬(CC)联合人绝经期促性腺激素(HMG)用于多囊卵巢综合征(PCOS)妇女促排卵的效果。方法回顾性分析接受促排卵治疗的211例PCOS不孕妇女,按促排卵方案分为LE+HMG、CC+HMG以及单用HMG组,比较叁组排卵率、妊娠率、单卵泡发育率、促排卵时间以及HMG剂量的差异。结果 LE+HMG组排卵率为91.5%,CC+HMG组86.8%,HMG组71.7%,LE+HMG和CC+HMG组显着高于单用HMG组(P<0.01);LE+HMG组单卵泡发育率显着高于HMG组(85.3%vs.60.5%,P<0.01),但CC+HMG与其他两组比较无统计学差异(P>0.05);LE+HMG、CC+HMG、HMG叁组患者的妊娠率分别为25.3%、22.7%和26.3%,组间无统计学差异(P>0.05);LE+HMG组促排卵时间为(15.07±2.41)d,CC+HMG组为(15.27±2.47)d,HMG组为(16.91±2.66)d,叁组中HMG剂量分别为(482.3±168.2)U、(486±169.0)U和(595.5±196.6)U,LE+HMG和CC+HMG组促排卵时间及HMG剂量均显着低于HMG组(P<0.01)。结论 LE或CC联合HMG不仅缩短促排卵时间和减少HMG用量,并且提高了排卵率;此外,LE联合HMG更易得到单优势卵泡发育。
徐飞, 陆彩, 吴启南, 于慧, 陈军[8]2016年在《乙酰泽泻醇降低胆固醇分子机制研究》文中研究指明目的从分子水平探讨乙酰泽泻醇降低胆固醇(TC)的作用机理。方法利用试剂盒法测定了调脂中药泽泻主要有效成分23-乙酰泽泻醇B和24-乙酰泽泻醇A对高脂小鼠TC的影响,利用试剂盒法、Western blotting技术结合分子模拟技术研究两者对TC代谢关键酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-Co A)还原酶作用的分子机理。结果乙酰泽泻醇能显着降低高脂小鼠TC(P<0.01,P<0.05),23-乙酰泽泻醇B作用强度高于24-乙酰泽泻醇A(P<0.05),同时在体内、体外均可剂量依赖性下调HMG-Co A还原酶活性(P<0.01),且23-乙酰泽泻醇B对该酶作用强于24-乙酰泽泻醇A(P<0.05)。两者均未显着下调HMG-Co A还原酶的蛋白表达(P>0.05)。两者与HMG-Co A还原酶结合的关键氨基酸残基可能为Lys691、Asp767、Asn658。结论乙酰泽泻醇降低TC的机制可能是其原型药物通过抑制HMG-Co A还原酶活性来达到,且可能是通过直接竞争性与HMG-Co A还原酶结合抑制其作用,乙酰泽泻醇的舵手基团为其侧链,侧链与母环折迭结合弱,打开结合强。
桑丽平, 郑栋栋, 郎元君, 刘云章, 卢玲[9]2018年在《高迁移率族蛋白成员HMG20a/b的研究进展》文中认为高迁移率族(HMG)蛋白是一类广泛存在的非组蛋白型染色体蛋白,能通过诱导染色质结构的变化影响DNA表达。HMG20a和HMG20b是一对高度同源的HMG家族蛋白,均含有一个结构保守的HMG-box结构域和一个coiled-coil结构域,在生物体内广泛表达。HMG20a/b在细胞核内参与组蛋白去甲基酶复合物LSD1-Co REST的形成及一系列与细胞分裂分化相关的生理进程,如神经细胞核红细胞的分化、细胞质分裂以及EMT过程。研究发现,HMG20a/b一些功能的发挥是通过LSD1-Co REST复合物来实现的;在神经分化过程中,HMG20a、HMG20b具有相互拮抗的作用;而HMG20a促进EMT过程反映它很可能是一个促癌因子。本文对HMG20a/b的结构和体内分布及生物学功能进行综述。
胡旭光, 郭姣, 贝伟剑, 胡因铭, 黄利华[10]2010年在《复方贞术调脂方调节HMG-CoA还原酶活性成分的快速筛选》文中研究指明目的优化快速筛选影响羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoA还原酶)活性成分的方法,并筛选复方贞术调脂方(FTZ)中抑制HMG-CoA还原酶的活性成分。方法利用纯化的猪肝HMG-CoA还原酶,从HMG-CoA还原酶浓度、HMG-CoA和NADPH底物浓度叁方面优化HMG-CoA还原酶筛选方法,评价FTZ和FTZ中不同药物成分对HMG-CoA还原酶活性的影响。结果猪肝HMG-CoA还原酶粗酶制剂具有明显的酶促动力学特性,反应体系中30μgHMG-CoA还原酶粗酶、200mmol/LNADPH、6μmol/LHMG-CoA是检测HMG-CoA还原酶活性和筛选影响酶活性成分的优化条件;FTZ和人参皂苷Rb2、叁七总皂苷和阳性对照普伐他汀对HMG-CoA还原酶活性有显着的抑制作用,最大抑制率分别为23.7%、44.6%、35.5%、45.7%(P<0.05或P<0.01)。结论 HMG-CoA还原酶是FTZ调节脂代谢的靶点之一,人参皂苷Rb2、叁七总皂苷是FTZ中抑制HMG-CoA还原酶的活性成分。
参考文献：
[1]. 糖基化终产物介导糖尿病肾病肾脏脂质沉积的分子机制[D]. 孙红. 东南大学. 2016
[2]. 多廿醇对3-羟3-甲基戊二酰辅酶A还原酶活性的抑制作用研究[D]. 罗春梅. 广西医科大学. 2007
[3]. 金针菇HMG-box转录因子鉴定及一个候选基因的差异表达分析[J]. 孟丽, 王丽, 刘芳, 丑天胜, 王威. 菌物学报. 2018
[4]. 来曲唑和克罗米芬分别联合HMG治疗多囊卵巢综合征疗效的系统评价[J]. 王沛丽, 王芳, 丁楠. 生殖医学杂志. 2015
[5]. 甘蓝型油菜HMG基因家族的生物信息学分析[J]. 李春金, 郭媛媛, 杨启航, 王彤, 王秋梅. 中国油料作物学报. 2018
[6]. 短密青霉生产霉酚酸发酵策略优化和代谢工程研究[D]. 董玉国. 华东理工大学. 2017
[7]. 来曲唑或氯米芬联合人绝经期促性腺激素用于PCOS妇女促排卵疗效的比较[J]. 席稳燕, 张欣, 韩红芳, 毛会, 李兰. 生殖医学杂志. 2015
[8]. 乙酰泽泻醇降低胆固醇分子机制研究[J]. 徐飞, 陆彩, 吴启南, 于慧, 陈军. 中药新药与临床药理. 2016
[9]. 高迁移率族蛋白成员HMG20a/b的研究进展[J]. 桑丽平, 郑栋栋, 郎元君, 刘云章, 卢玲. 现代生物医学进展. 2018
[10]. 复方贞术调脂方调节HMG-CoA还原酶活性成分的快速筛选[J]. 胡旭光, 郭姣, 贝伟剑, 胡因铭, 黄利华. 中药新药与临床药理. 2010