（广西科技大学第二附属医院病理科 广西 柳州 545006）
【摘要】目的：检测COX-2和CD44V6基因蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达，探讨二者在非小细胞肺癌组织中表达的改变及其在癌发生、发展中的作用。方法：采用免疫组化SP法检测83例NSCLC和30例正常肺组织中COX-2和CD44V6蛋白表达情况。结果：83例NSCLC组织中COX-2蛋白的阳性率为86.74%，与正常对照组比较差异显著（P＜0.05）。CD44V6蛋白的阳性率为71%，与正常对照组比较差异显著（P＜0.05）。结论：COX-2蛋白阳性表达可作为NSCLC发生、发展的生物学指标，联合CD44V6检测有助于非小细胞肺癌预后的判断及临床治疗的指导。
【关键词】肺癌；非小细胞肺癌；COX－2；CD44V6；免疫组化
【中图分类号】R734.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）28-0162-02
Expression and significances of COX-2 and CD44V6 protein in NSCLC
Xie Kaisheng,Qing Tian,Zhang Bin,Wei Yongjiao.
Department of Pathology,The Second Affiliated Hospital of GuangXi Science and techinlogi University, LiuZhou, 545006,China
【Abstract】Objective To evaluate the significance of COX-2 and CD44V6 protein expression and the correlations with carcinogenesis and progression in NSCLC. Methods The SP immunohistochemical technique was used to detect the expression of COX-2 and CD44V6 in 83 cases of NSCLC,30 cases of normal lung tissues.Results The positive rates of COX-2 in 83 cases of NSCLC was 86.74% ,which was significantly higher than those in normal lung tissues(P<0.05).The positive rates of CD44V6 in 83 cases of NSCLC was 71% ,which was difference patency with those in normal lung tissues(P<0.05).Conclusion The expression of COX-2 protein is and objective biologic marker for estimating the occurrence and progression of NSCLC.Combined detection of COX-2 and CD44V6 may help judge the prognosis and guide clinical treatment of NSCLC.
【Key words】lung cancer;NSCLC;COX-2;CD44V6;Immunohistochemical
肺癌是我国常见的恶性肿瘤，其发病率呈逐年上升趋势[1]。依据依照世界卫生组织（World Health Organization,WHO）肺部肿瘤组织学分类标准分型，共分为7类：腺癌（adenomatous, AD）、鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma,SCC）、小细胞癌（small cell carcinoma,SCLC)、肉瘤样癌（sarcomatoid carcinoma,SC）、大细胞癌（large cell carcinoma,LCC)、腺鳞癌（adenosquamous carcinoma,ASC）和其他类型癌（else）。依据临床标准[2]，肺癌被分为非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC）二大类。在肺癌患者中，80%的病人为非小细胞肺癌，只有约20%的病人为小细胞肺癌。术后转移是肺癌患者死亡的主要原因[3]，而且还涉及许多生物活性分子之间复杂的相互调控机制。在这个过程中细胞粘附分子(cellular adhesion molecule,CAM)发挥了重要的作用[4]。在过去的20多年中，非小细胞肺癌手术分期为判断预后提供了最基本的组织学基础，是目前公认的有效预后指标。但是如何探明同期病例中的预后因素，尤其是对肿瘤生长及转移潜能的分子生物学水平的研究仍是当前研究中的热点。探讨与非小细胞肺癌转移相关的生物学标志倍受关注。本文采用免疫组化SP检测COX-2和CD44V6基因蛋白在非小细胞肺癌中的表达，探讨二者与非小细胞肺癌之间的关系。
1.材料与方法
1.1 研究对象
选取2012年7月—2015年7月广西科技大学第二附属医院（柳州肿瘤医院）胸外科及病理科选择资料完整、手术切除并经病理确诊，组织蜡块完好的非小细胞肺癌83例为实验组，另选择正常肺组织30例为对照组。所取标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4ｕｍ厚连继切片。已知阳性组织作为阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。
1.2 试剂与方法
1.2.1试剂 所用一抗及试剂盒均购自北京中彬金桥生物技术开发公司
1.2.2免疫组化 采用EnVision法免疫组化染色，按相关染色规定逐步进行。显色完成后用莱卡DM2500生物显微镜诊断。对照组设正常肺组织。
1.2.3结果判定 以棕黄色显色为免疫组化阳性，COX-2、CD44V6定位于细胞质。以PBS代替一抗为阴性或替代对照，以阳性切片为阳性对照。免疫组化切片染色结果由两位资深的诊断病理医师双盲观察，根据染色观察结果，将染色分为阴性（-）、阳性（＋），强阳性（＋＋）3级。
1.2.4统计学分析 采用SPSS 13.0软件进行统计分析，率比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 COX-2和CD44V6蛋白，见表。
COX-2蛋白呈棕黄色且定位于癌细胞的胞质上，在肺癌组织中呈弥漫性分布，而在正常肺组织中仅偶见个别或小灶状细胞呈弱性表达，但阳性数＜10%。NSCLC中COX-2的表达率为86.74%（72/83），而正常组表达仅为6.6%（2/30），COX-2的阳性表达率显著高于正常组（P＜0.05）。CD44V6在NSCLC中主要定位于癌细胞胞质，阳性表达率为71%（59/83），正常组的阳性表达率为26.6%（8/30），NSCLC组中CD44V6的阳性表达率明显高于正常组（P＜0.05）。
2.2 COX-2与CD44V6蛋白的关系
CD44V6阴性而COX-2阳性者共22例，COX-2阳性而CD44V6阳性者共47例。经统计学处理，COX-2的阳性表达与CD44V6的表达呈正相关（r＝0.240，P＜0.05）。
3.讨论
环氧化酶（cyclooxygenase，cox）是一种存在于花生四烯酸代谢中的限速酶。目前的报道中已发现两种COX的编码基因，即cox-1和cox-2[5]，它们分别定位于9q32～33.3和1q25.2～q25.3上。环氧化酶-2（cyclooxygenase-2，cox-2）的作用机制目前尚在研究中，有相关研究发现细胞的增殖和凋亡在致癌机制中起重要作用，另外与基质的降解、血管的形成、免疫机制与致癌物等的代谢等有关[6]。相关研究中，cox-2一般可通过细胞凋亡的抑制、促肿瘤组织血管发生、调节细胞免疫抑制功能、增加肿瘤组织的侵袭能力、促致癌物的前体向致癌物转变等机制来分别促进肿瘤的发生发展，并在肿瘤细胞的恶性表型转换中起重要作用。有报道证实[7,8]，cox-2的过表达可以通过合成大量的PG3来加速恶性肿瘤细胞增殖，上调bcl-2和下调E－calhein、TGFB受体的表达来抑制恶性肿瘤细胞的凋亡，并刺激MMP-2，是一种锌离子依賴性内肽酶，它参与了破坏细胞外基质和基膜，在多种肿瘤发展过程中发挥极大的作用。浸润性和转移性是恶性肿瘤的两大特征，恶性肿瘤细胞突破组织基底膜，向周围组织呈蟹足样生长，而基底膜纤维网架结构成分中的IV型胶原的降解是这一改变的关键环节[9]。肿瘤细胞从原发部位脱落后，通过血道或淋巴道进行转移，在一些重要的器官如肝、肺、脑等往往强烈威胁患者生命及生存。在Tamozawa等[10]一系列的相关研究中，发现COX-2高表达的细胞中FTE－522组与对照组之间存在明显差异，而COX-2低表达组中JTE-522组与对照组之间无则无统计学意义。在另外一些脉管转移为阴性的肠癌研究中，平均随访时间长达5年，发现COX-2表达较高的一组和表达较低的一组发生转移机率明显不一样，存在统计学意义[11]。近年来的研究发现非小细胞肺癌（NSCLC）COX-2表达明显升高，其表达与肿瘤细胞的分化程度、脉管转移相关，但结果不一致[9]。本研究中，COX-2在NSCLC的表达率为86.74%，而正常组表达仅为6.6%，显著高于正常组（P＜0.05），且COX-2蛋白的阳性表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、肿瘤大小及病人年龄等均有关。总之，COX-2对肿瘤患者的预后、病情监测及治疗有潜在的应用价值，尚需进一步研究。
CD44V6基因存在于人类的第11号染色体短臂上，由超过20个高度保守的外显子组成，在染色体的DNA双链上大约跨越50kb[12]。CD44共分为2种类型，即标准型CD44（CD44S）和变异型（CD44V）。目前发现变异型CD44V至少超过10种。CD44VS主要在正常组织细胞和良性肿瘤细胞中表达，而变异型CD44V则在肿瘤的发生、脉管的转移过程中起重要作用[13]。组织与细胞之间、细胞与细胞基质之间的粘附性异常是恶性肿瘤细胞最基本的生物学特征之一，这种异常导致了恶性肿瘤细胞具有从原发部位脱落，进而进一步侵袭和转移。CD44V基因的出现改变了病变细胞表面粘附分子的构成和功能，增强了肿瘤细胞的侵袭和转移能力。本研究中，CD44V6在NSCLC的表达率为71%，而正常组表达为26.6%，显著高于正常组（P＜0.05），显示CD44V6阳性表达预示非小细胞肺癌有较强的侵袭能力。
本研究还发现，非小细胞肺癌组织中COX-2蛋白与CD44V6蛋白间存在正相关关系（r＝0.240，P＜0.05），即协同作用。因此，COX-2与CD44V6蛋白的联合检测能弥补单个基因检测的不足，可作为评价非小细胞肺癌发生、发展及预后的重要生物学指标，并为临床治疗提供参考。
【参考文献】
[11刘彤华主编.诊断病理学，第二版[M].人民卫生出版社，2006，158-159.
[2] Rami-Porta R,Bolejack V,Crowley J,et al.The IASLC Lung Cancer Staging Project:Proposals for the Revisions of the T Descriptors in the Forthcoming Eighth Edition of the TNM Classification for Lung Cancer[J].J Thorac Oncol,2015, 10(7):900-1003.
[3] Gray PJ,Mak RH,Yeap BY,et al.Aggressive therapy for patients withnon-small cell lung carcinoma and synchronous brain-only oligometastatic disease is associated with long-term survival[J].Lung Cancer,2014,85(2):239-44.
[4] Steven M,Albelda.Role of integrins and other cell adhesion molecules in tumor progression and metastasis.Lab Invest.1993,68(1):14-17.
[5] Wollams CS,DuBois RN.prostaglandin endoperoxide synthase:why two isoforms Am J physiol. 1996.270(3pt1):G393-400.
[6]王喜梅，湛丽，吴勇甲，等.子宫颈腺癌中cox-2与Pz7kipl、MMP-2蛋白表达的关系[J].临床与实验病理学杂志，2005，20（3）：303.
[7] Ohon R,Yoshinaga k,Fujita T,et al,Depth of invasion parallels increased cyclooxygenase-2 levels in patients with gastric carcinoma[J].Cancer 2001,91(10):1876-81.
[8] Preseott sm,wkite RL,self-promotion Intimate eonnections between APC and prostaglandin H synthase-2(J)cell.1996,87(5):783-6.
[9]武爱文.COX-2与肿瘤的关系.中国肿瘤临床，2002，29（8）：603.
[10] Tomazawa s.Nagawa H.Tsuno N,et al.Inhibition of haematogenons matastasis of colon cancer in mice by a selec tire cox-2 inhibitor.JTE-522 Br J cancer.1999.81(8):1274-1279.
[11] Tomazawa s,Tsuno NH.Sunami E,et al.cyclooxygenase-2 overexpression correlates with tumor recnrrence.especially haematogenous matastasis of clolrectal cancer Br J cancer 2000,83(3):324-328.
[12] Screaton GR Bell MV,Jackson DG,et al cenomic strncture of DNA encoding the lymphocyte homing receptor CD44 reveals at least 12 alternatively spliced exons.proc Natl Acad sci USA.1992,89(24):12160-4.
[13]邱小芬，王孝养，张增锋，等.非小细胞肺癌中CD44V6的表达[J].临床与实验病理学杂志，2003，19（4）：413.
论文作者:谢凯圣,覃天,张斌,韦永焦
论文发表刊物:《医药前沿》2017年10月第28期
论文发表时间:2017/10/25
标签：细胞论文; 肺癌论文; 阳性论文; 肿瘤论文; 蛋白论文; 组织论文; 恶性肿瘤论文; 《医药前沿》2017年10月第28期论文;