浙江省永嘉县岩头镇社区卫生服务中心 325113
［摘要］目的：研究吸烟口腔白斑和非吸烟口腔白斑组织中RIP2和Caspse-12的表达，探讨香烟中的尼古丁对口腔白斑组织中RIP2和Caspse-12表达的影响。方法：收集120例口腔白斑组织，随机平均分为吸烟患者组和非吸烟患者组，通过ＨＥ染色、真菌银染法和免疫组化法检测吸烟患者和非吸烟患者RIP2和Caspse-12的表达水平，图像分析测定平均光密度值，通过统计分析评价表达水平的差异。结果：吸烟患者中白斑组RIP2和Caspse-12的表达水平较非吸烟患者白斑组明显升高，差异均具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论：尼古丁可能增强口腔白斑组织中RIP2和Caspse-12的表达。
［关键词］ 尼古丁；口腔白斑；RIP2；含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-12
随着现今生活水平的提高，越来越多的人开始享受生活，大多数男性开始接触香烟，虽然香烟里含有大量的危害物质，可是还促使更多的人喜欢上香烟。其中香烟的尼古丁是最致命的危害物质，它不仅可以激动N胆碱受体，从而对乙酰胆碱受体N1和乙酰胆碱N2受体以及中枢神经系统均具有明显的抑制作用。根据目前国内文献可知：尼古丁可以使口腔白斑的RIP2和Caspse-12表达异常，从而加剧口腔白斑的病情发展，本次实验主要是通过对口腔白斑中吸烟组和非吸烟组患者的RIP2和Caspse-12水平测定来评估尼古丁对口腔白斑的影响，现今实验结果回报如下：
1.资料与方法
1.1 一般资料
筛选2014年8月至2015年5月于我教学口腔医院就诊的口腔白斑的患者120例，随机分为吸烟组和非吸烟组，吸烟组60例，非吸烟组60例，作为研究对象。所有患者均经临床病理学、实验室检查确诊为口腔白斑。其中男性患者82例，女性患者38例，年龄在19周岁至70周岁，平均年龄在(45±2.6)周岁，以临床病理学检查结果为作为本实验的金标准，本次纳入标准和排除标准均按照我国最新的口腔白斑诊断标准作为准则。
1.2 纳入/排除标准[4]
纳入标准：初次诊断为口腔白斑并经临床病理检查确诊的患者；年龄≧19岁以上且无基础疾病和其他系统性疾病的患者；符合我国最新的口腔白斑诊断标准的患者。
排除标准：有严重基础疾病的患者；处于孕期的患者；近期服用过抗真菌药物和抗生素的患者；精神疾病病史。
本项研究通过我校附属口腔医院伦理委员会批准，所有患者已经告知实验的目的及实验过程。
1.3 方法
1.3.1口腔白斑患者的病理取材
吸烟组和非吸烟组的患者在实验前均进行血常规和血糖测定，所有指标均符合实验取材的标准，按照病理需要对两组患者进行手术取材。
1.3.2 组织病理HE染色：
HE染色法又叫苏木精-伊红染色法，这是目前在医学研究领域应用最广的一种实验方法，石蜡切片技术在此染色法中显得尤其重要。碱性的苏木精染液可以让染色质与核糖体着紫蓝色；而酸性的伊红液可以让细胞质和细胞外基质中的成分着红色。这样就可以在显微镜下把其成分区分开。
本实验玻片里的所有标本经HE染色后呈蓝紫色的菌丝可以垂直或倾斜侵入角化层，其周围可见炎细胞聚集，并可形成微脓肿。
1.3.3真菌银染法
银染法是一种可以使神经细胞、神经纤维和网状纤维区分开的一种常用的实验研究方法，它可以用于分子生物学的DNA核苷酸序列分析，将上述手术切片放在银盐染料中浸泡，就可以让银盐沉淀，从而使这些结构显示为黑褐色，以便与其他结构区分开，使观察切片就很清晰。
真菌孢子或菌丝在银染法下可以呈现为明显的黑褐色圆点状或条索状。
1.3.4免疫组化检测及结果的图像分析
将上述实验的标本切成3um厚石蜡切片，吸烟组和非吸烟组所有实验标本均经过脱蜡，水化，抗原修复等过程；在标本内分别滴加抗RIP2和Caspse-12的一抗，4℃孵育12小时，磷酸盐缓冲液冲洗３次，每次冲洗3分钟；冲洗结束后再次给标本滴加RIP2和Caspse-12的二抗，将所有标本放于湿盒中37℃孵育半小时，然后用磷酸盐缓冲液冲洗三次，每次持续3分钟左右；室温下二氨基联苯胺染色5分钟；苏木苏复染，自来水冲洗返蓝，脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
将两组的实验标本免疫组化染色结果按染色深浅及阳性细胞数分为阴性、弱阳性、强阳性。其中实验标本无特异性染色或阳性细胞数<5％为阴性；实验标本中阳性细胞数在5％到35％之间的为弱阳性；实验标本中阳性细胞占总数35％以上称之为强阳性；其中阳性率=弱阳性率+强阳性率。取各免疫组化染色切片，在高倍镜（×400）下取15个视野，拍摄照片。然后利用图像分析软件测定每个标本切片下的光密度均值，我们将光密度均值的多少来代表RIP2和Caspse-12相应的表达水平。
1.4统计学处理
对实验所得数据进行统计学处理，采用IBM SPSS 19.0统计软件包进行分析，对非吸烟患者白斑组与吸烟患者白斑组的免疫组化染色的光密度均值进行统计分析，计数资料采用卡方检验，P＜0.05，表示两组数据具有差异性，其差异具有统计学意义。
2.结果
2.1口腔白斑组织中阳性率的测定
本项研究120例口腔白斑组织病理切片经过图像分析得出阳性率（见表1）。
2.2白色念珠菌感染对口腔白斑组织中RIP2表达的影响
在非吸烟口腔白斑组织中，RIP2呈阴性染色，而在吸烟口腔白斑组织中，RIP2呈弱阳性至中度阳性表达，表达于胞质，阳性细胞分布于上皮全层。
3.讨论
尼古丁可通过血脑屏障到达人的大脑，从而使人上瘾或产生依赖性，而且大量吸食尼古丁，其可以增加心脏速度和升高血压并降低食欲。从而使吸烟者引起呕吐以及恶心，严重时人会死亡。烟草中通常会含有尼古丁，尼古丁作用于烟碱乙酰胆碱接受体，从而使中枢神经系统产生明显的作用。
目前我们认为RIP2既参与固有免疫又在适应性免疫中起着关键性的作用，其在维持免疫系统的内稳态中起重要作用。RIP2是NOD1信号通路的适配器，在宿主对病原分子模式识别、防御或炎性因子的分泌，固有免疫和适应性免疫的激活以及细胞增殖、分化、凋亡和自噬等过程中均发挥重要作用。
Caspse-12是炎症性Caspse家族中的重要成员之一，在炎症反应的调控、固有免疫以及细胞内质网的应激中起了关键性的作用。Caspse-12 可削弱黏膜组织以及细胞的抗微生物的功能， 其表达水平的升高可进一步降低人体的防御能力以及固有免疫，从而可能进一步破坏了细胞和组织的稳态。
科学研究已经证实，Caspse-12对NOD1信号通路起负向调控作用， 从而使细胞因子以及下游β－防御素的分泌减少，进一步使细菌和真菌等微生物的清除受到阻碍。
由以上数据可知：我们目前的实验数据表明烟碱可能使口腔白斑中RIP2以及Caspse-12的表达增加，对细胞下游信号分子的表达以及NOD1信号通路起负向调控的作用，从而使宿主的防御能力以及固有免疫受到抑制，进一步使口腔白斑的发生率增加。
参考文献：
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[5] 郭志宏,杜永成,许建英 . 吸烟对支气管哮喘大鼠气道转化生长因子β1 mRNA和Ⅲ型胶原表达的影响 . 中华结核和呼吸杂志, 2008年 31卷 第01期
论文作者:陈莲英
论文发表刊物:《医师在线》2015年12月
论文发表时间:2016/4/11
标签：白斑论文; 口腔论文; 患者论文; 尼古丁论文; 免疫论文; 标本论文; 细胞论文; 《医师在线》2015年12月论文;