（广西医科大学第四附属医院暨柳州市工人医院药学部 广西 柳州 545005）
【摘要】 目的：探讨落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响。方法：建立H22荷瘤小鼠模型，随机分为空白组、阳性组（5-FU）、模型组、水提物低剂量组（4g/kg生药量）、中剂量组（8g/kg生药量）及高剂量组（16g/kg生药量）共6组，每组10只。阳性组按20mg?kg-1腹腔注射5-FU，模型组、空白组灌服等体积生理盐水，连续给药15天。进行碳廓清试验，计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数和肝脏指数。结果：落地生根水提物中、高剂量组可明显抑制H22实体瘤生长（P＜0.05），抑瘤率分别为65.68%和74.56%。中、高剂量组可显著增高碳廓清指数（P＜0.05）与脾脏指数（P＜0.05），仅中剂量组对胸腺指数有显著增高作用（P＜0.05），落地生根水提物对肝脏指数无影响。结论：落地生根水提物对H22荷瘤小鼠的免疫系统有一定的保护作用，能调节巨噬细胞吞噬功能的作用，增强机体的免疫功能，提高抗肿瘤能力。
【关键词】 落地生根水提物；H22；免疫功能；小鼠
【中图分类号】R964 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2019）32-0206-03
落地生根Bryophyllum pinnatum (L.f.) Oken为景天科(Crassulaceae)落地生根属(BryophllurnSalisb)植物，在广西、广东、云南、福建和台湾等地区广泛分布，别名为花蝴蝶、倒吊莲、土三七、叶生根、番鬼牡丹、叶爆芽、天灯笼、枪刀草、厚面皮、著生药等，全草入药，性酸、寒[1]。除具有观赏价值外，还具有药用价值，可治创伤出血、疔疮、乳腺炎、跌打损伤吐血、热性胃痛、关节肿痛、急性中耳炎、皮肤溃疡等[2]。在国外，落地生根广泛分布于非洲、美洲热带以及印度和澳大利亚，作为传统药物用于腹泻、呕吐、镇痛、抗炎、抗病原微生物、利什曼病及抗变态反应等[3]。本实验就落地生根对H22肝癌小鼠免疫功能影响做研究，尝试对落地生根水提物抗肿瘤的作用进行初步探讨。
1.资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1细胞株及动物 小鼠H22肝癌细胞由广西医科大学药理学教研室提供，经本实验室传代保存。昆明种小鼠60只，体质量18～22g，雌雄不拘，由广西医科大学实验动物中心提供。试验动物使用许可证 SCXK2009-0002。
1.1.2药品与试剂 落地生根采取于广西来宾市忻城县，经河池学院化学与生物工程学院邓晰朝副教授鉴定为鉴定景天科(Crassulaceae)落地生根属(BryophllurnSalisb)植物落地生根Bryophyllum pinnatum (L.f.) Oken。氟尿嘧啶注射液（5-FU），天津金耀药业有限公司，批号1504261。一得阁墨汁购于一得阁墨业有限责任公司。
1.2 仪器
多功能提取浓缩机组(上海顺仪实验设备有限公司)；分析天平(日本岛津公司)；DRAGON LAB移液器(20～200μL)( 大龙兴创实验仪器（北京）有限公司)；酶标仪（美国伯乐BIO-RAD公司）。
1.3 药材提取
取6100g落地生根干药材，加10倍量蒸馏水，回流提取3次，每次1小时，过滤，合并3次滤液，浓缩成浸膏，浸膏量为1246.8g，置于4℃冰箱，待用。
1.4 造模、分组及给药
取冻存的H22肝癌细胞，复苏为0.9%氯NaCL溶液混悬，小鼠腹腔注射，连续传两代。无菌条件下取H22肝癌小鼠腹水，稀释成含量为1×107?mL-1的细胞悬液后于小鼠右侧腋窝皮下接种，小鼠接种肿瘤细胞悬液后称体重，随机分为空白组、阳性组（5-FU）、模型组、水提物低剂量组（4g?kg-1生药量）、中剂量组（8g?kg-1生药量）及高剂量组（16g?kg-1生药量）共6组，每组10只。空白组为正常小组，阳性组按20mg?kg-1给予5-FU腹腔注射，模型组、空白组灌服等体积生理盐水。各组均于接种后24小时开始给药，每天1次，连续15天。
1.5 小鼠碳廓清实验
末次给药24小时后,尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁,每10g体质量注射0.1mL，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2（t1）、10min（t2），分别从内眦静脉丛取血20μL，加入到2mL 0.1% Na2CO3溶液中，摇匀。以0.1% Na2CO3溶液作空白对照，用酶标仪在600nm波长处比色测定光密度值（OD）。将小鼠处死，取肝、脾，称质量，计算吞噬指数（a)。吞噬指数计算方法：K=（lgOD1-lgOD2)/(t2-t1).吞噬指数（a)=体质量×K1/3（肝质量+脾质量）。
1.6 瘤重、胸腺指数、脾脏指数、肝脏指数的测定
分别称取小鼠体重，脱颈椎处死小鼠，剥离肿瘤组织，取小鼠脾脏、胸腺和肝脏，精密称定，计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数和肝脏指数：肿瘤抑制率（%）={1-（平均实验组瘤重/平均对照组瘤重）}×100%；胸腺指数=胸腺质量/体重；脾脏指数=脾脏质量/体重；肝脏指数=肝脏质量/体重。
1.7 统计学处理
采用SPSS22.0统计软件进行数据分析，所有数据均以-x±s表示，两组间差异比较采用t检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。
2.结果
2.1 抑瘤作用
研究结果显示，与模型组比较，落地生根水提物中、高剂量组可明显抑制小鼠H22实体瘤生长（P＜0.05)，抑瘤率分别为65.68%和74.56%，与5－氟尿嘧啶作用相当，见表1。
表1 落地生根水提物对小鼠瘤重及免疫脏器指数的影响
注：*表示P＜0.05。
3.讨论
近年来，中医药的应用在原发性肝癌的综合治疗中起着举足轻重的作用，越来越多的有效抗癌成份已从中药材中提取获得，中药诱导肿瘤细胞凋亡时，其对正常细胞的毒性远低于化疗药物，对正常组织细胞伤害很小，能改善患者全身症状，提高患者生存质量，与化疗药物合用具有减毒增效的作用，同时，许多具有抗肿瘤作用的中药在治疗肿瘤的同时又能积极保护或增强免疫功能[4,5]。本实验通过动物实验初步发现落地生根水提物具有抗肿瘤及增强免疫功能作用。
脾脏指数及胸腺指数能够反映机体非特异性免疫能力[6]。本实验采用不同浓度的落地生根水提物作用于H22荷瘤小鼠，发现中、高剂量可以增加H22荷瘤小鼠的脾脏指数（P＜0.05)，中剂量显著增高胸腺指数（P＜0.05)，能够提高荷瘤小鼠的非特异性免疫能力，对免疫器官有一定的保护作用。中、高剂量落地生根水提物能够有效抑制H22荷瘤小鼠的体内肿瘤生长，与阳性药5－氟尿嘧啶作用效果相当。碳廓清试是检测机体非特异性免疫功能的常用方法之一，颗粒状异物进入血液循环后，能迅速被巨噬细胞吞噬，若将异特量恒定，测定异物在血液中的消除速率可以反映巨噬细胞的吞噬功能[7]，本研究结果显示落地生根水提物的中、高剂量组均可增加碳廓清指数，反映其可以调节小鼠巨噬细胞吞噬功能的作用。
综上所述，落地生根水提物对H22荷瘤小鼠的免疫系统有一定的保护作用，能增强机体的免疫功能，提高抗肿瘤能力，具体的作用机制及作用靶点有待进一步研究。
【参考文献】
[1]武晓丹，王艳萍，田凤，等.落地生根软膏抗炎镇痛作用的实验研究[N].哈尔滨师范大学自然科学学报，2014，20(4):90-93.
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[3] Kamboj A,Saluja A K.Bryophyllum pinnatum (Lam.) Kurz.:Phytochemical and pharmacological profile:A review [J].Pharmacog Rev,2009,3(6):364-374.
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[7]卢艳，韩丽，钤莉妍，等.阿胶枣对小鼠免疫调节作用的研究[J].药品评价，2016，33(5):423-425.
保留基金项目：广西壮族自治区中医药管理局项目（编号：GZZC16-77）
论文作者:杨志杰,樊星花,梁宇红
论文发表刊物:《医药前沿》2019年32期
论文发表时间:2019/12/12
标签：小鼠论文; 指数论文; 作用论文; 剂量论文; 脾脏论文; 胸腺论文; 免疫论文; 《医药前沿》2019年32期论文;