郴州市第一人民医院医学检验中心 423000
【摘 要】目的 验证和评价西门子BNⅡ特定蛋白仪测定C反应蛋白（CRP）的分析性能。方法 依据美国临床实验室标准化组织（CLSI）文件和相关文献，确定实验方案，对西门子BNⅡ特定蛋白仪测定CRP的精密度、正确度、线性范围、参考区间进行评价结果 精密度：批内精密度CV值小于CLIA’88允许误差的1/4水平。日间精密度CV值小于CLIA’88允许误差的1/3水平，符合要求。正确度：平均偏倚为2.72%，符合判断标准偏倚≤1/2EAQ（12.5%）。线性回归方程为：Y＝1.0136X＋1.3132，R2为0.9981，回归方程可接受，线性范围为1.98-189 mg/L。参考个体检测结果均在厂家提供参考范围内。结论 西门子BNⅡ特定蛋白仪测定CRP的各项分析性能指标均符合质量目标要求。
【关键词】性能验证；C反应蛋白（CRP）；特定蛋白仪
按照《医学实验室质量和能力的专用要求》（ISO15189）的要求，申请参加认可的实验室应该对设备、检测系统或方法的主要分析性能进行验证，证实其能够达到临床检测所要求的标准[1]。本实验室依据美国临床实验室标准化组织（CLSI）文件及相关文献，并结合实际工作，对西门子BNⅡ特定蛋白仪测定C反应蛋白（CRP）的精密度、正确度、线性范围以及参考区间作性能评价，结果报告如下：
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1 仪器与试剂 西门子BNⅡ特定蛋白仪；西门子原装配套CRP试剂（批号：167543C）、校准品（溯源：CRM-470批号：183877）、风湿病学质控品低值（批号：199497）、风湿病学质控品高值（批号：199596）。
1.1.2 标本来源 来自我院就诊患者或正常成人体检者，标本血清无溶血、脂血、黄疸，于4℃保存。
1.2验证方法
1.2.1精密度验证：
a.批内精密度：参考CLSI EP5-A2文件[2]，取低、高值两个水平质控品，分别连续重复测定20次，收集实验数据，计算均值、SD、CV，以CV值≤美国实验室修正法规（CLIA’88）允许误差的1/4（6.25%）作为判断标准。
b.日间精密度：参考CLSI EP5-A2文件[2]，取低、高值两个水平质控品，每天测定一次，连续测定20天，取得20个结果，计算SD、CV，以CV值≤CLIA’88允许误差的1/3（8.33%）作为判断标准。
1.2.2正确度验证：参考CLSI EP15-A2文件[3]，以卫计委临检中心发放的室间质控品作为参考物质，以回报结果作为评价标准。计算本室检测结果与其回报靶值的偏倚，以偏倚小于卫计委临检中心要求的偏差范围为符合要求（平均偏倚≤1/2EAQ）作为判断标准。
1.2.3线性范围验证：参考CLSI EP6-A文件[4]，选择高值混合血清样本（H），低值混合血清样本（L），一般地样本的高值推荐在说明书分析上限的90％，低值推荐在说明书分析下限的10％，以100ul为一个体积单位，将高值标本与低值标本以3：1、2：2、1：3的体积比例混合，加上高低值标本共5个标本按照由低到高测定，每个样本重复测定2次，记录结果，并以求得的测定平均值测定结果。以预期值与实测值分别为X、Y，做曲线Y=bX+a并进行回归曲线分析，求得相关系数a、b及r值[5]。结果判断：① 若b在0.97-1.03范围内，r2>0.95，作a与0有无显著性差异的t检验，如果P>0.05，则可直接判断线性范围在实验已涉及浓度。② 若b不在0.97-1.03范围内，a较大，舍去高值或低值组数据，另做回归统计，直至缩小的分析范围其回归方程的a和b的判断符合要求，则该范围为线性范围。
1.2.4参考区间验证：参考CLSI C28-A2文件[6]，收集20 例正常健康成人体检者血清标本及时检测，要求其年龄，性别等均匀分布，对结果进行统计并与厂家提供的参考区间进行比较，只允许10%的数据超过所验证的参考范围，否则需建立参考范围。
1.3统计学处理 应用Excel 2003 软件分析。
2结果
2.1精密度验证结果 见表一
2.2 正确度验证结果 统计最近一个完整周期的室间质结果，计算室间质控品检测结果与其回报靶值的偏倚，平均偏倚为2.72%，符合≤1/2EQA（12.5%）判断标准。
2.3线性范围验证 采用线性回归，以预期值与实测值进行比较，以预期值为X，以实测均值为Y，得线性方程：Y＝1.0136X＋1.3132，r2=0.9981。回归方程可接受，判断线性范围在实验已涉及浓度，线性范围为1.98-189 mg/L，符合要求。
图一 预期值与实测值结果的线性回归曲线图
2.4 参考区间验证结果
20例正常健康成人体检者血清CRP结果均在厂家提供的参考区间（0.068-8.2mg/L）内。
3讨论
为了提高实验室的检验质量，减少实验误差，并且有利于实验室标准化的实现，本实验室依据美国临床实验室标准化组织（CLSI）文件及相关文献，并结合实际工作，对西门子BNⅡ特定蛋白仪测定C反应蛋白（CRP）的精密度、正确度、线性范围以及参考区间作性能评价，为临床提供准确可靠的检验结果。
精密度是指同一标本在一定的条件下多次重复测定得到的一组数据之间的接近程度，是反映仪器整体性能的首要指标，是进行方法学验证试验的前提。[7] 结果显示，本实验室验证的西门子BNⅡ特定蛋白仪测定C反应蛋白（CRP）两个水平质控品的批内精密度分别为3.39%、3.12%，日间精密度分别为4.19%、3.45%，均在可接受范围。
正确度是评价仪器测试结果与接受参考值之间的一致程度。本实验通过计算实验室检测数据的偏倚从而评价和验证实验室检测结果的准确性。计算获得平偏倚为2.72%，符合≤1/2EQA判断标准。
线性范围是在确定某项目检测上限的同时检测其上下限是否呈线性关系，从而保证该浓度范围检测结果的准确性。线性是反映方法学性能评价的重要指标[7]。 在本实验室线性范围的验证中，依据所测结果绘制的线性回归曲线图看出测定项目CRP的期望值与实测值的相关系数线性良好。根据回归曲线得出结论，在标本状态良好无干扰的情况下，验证CRP测定结果1.98-189 mg/L范围内呈线性。
参考区间是指一群健康人针对特定项目的检测结果的95%的可信区间。若实验室采用厂家或出版物提供的参考区间，须对其进行验证确认。结果显示，20例成人正常健康成人体检者血清CRP结果均在0.068-8.2mg/L内，故本实验室参考区间验证通过，可以采用厂家提供的参考区间。
综上所述，本实验室对西门子BNⅡ特定蛋白仪测定C反应蛋白（CRP）的精密度、正确度、线性范围及参考区间的验证全部通过，主要分析性能符合质量目标要求，能满足临床的要求。
参考文献：
[1]ISO15189医学实验室质量和能力认可准则[R] 中国合格评定国家认可委员. 2013-6-1
[2]CLSI.EP5-A2.Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods[S].Wayne，PA：CLSI，2004
[3]CLSI.EP15-A2.User demonstration of performance for precision and accuracy [S].Wayne，PA：CLSI，2004
[4]CLSI.EP6-A.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures [S].Wayne，PA；CLSI，2003
[5]毕波，吕元．定量检测方法学性能验证的系统设计［J］中华检验医学杂志，2007，30（2）：143-145．
[6]CLSI.C28-A2.How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory[S].Wayne，PA：CLSI，2000
[7]王治国.临床检验方法确认与性能验证[M]北京：人民卫生出版社.2009：45
论文作者:颜彦
论文发表刊物:《中国蒙医药》2016年9月第9期
论文发表时间:2017/1/18
标签：线性论文; 精密度论文; 实验室论文; 蛋白论文; 区间论文; 标本论文; 性能论文; 《中国蒙医药》2016年9月第9期论文;