苏俊[1]2002年在《中国根霉12～#产芽孢抑制剂代谢机理及分离纯化方法的研究》文中研究指明本论文对中国根霉12~#菌株产生的抑菌活性物质的代谢机理及其分离纯化方法进行了研究。 通过运用刺激实验法和静息细胞法对抑菌活性物质的代谢机理进行了研究。发现在发酵培养基中添加乙酸盐、组氨酸和精氨酸对于抑菌活性物质的生成有一定的促进作用。通过添加蛋白质合成抑制剂——放线菌酮的实验发现，此抑菌活性物质的合成与菌体蛋白质的合成有相关性，这与一般的肽类抗生素的性质不同。在实验的基础上对该活性物质可能的代谢途径进行了推测。 在分离纯化的预备实验中发现该物质的发酵粗提液性质十分稳定，可以在正常条件下对其进行分离纯化的操作，不需要采取特殊的保护措施。 建立了分离纯化该物质的有效途径：发酵液离心除菌→抽滤除杂→中空纤维过滤浓缩→盐析→透析→真空冷冻干燥→溶解→交联葡聚糖凝胶Sephadex G-100凝胶分离→交联葡聚糖凝胶Sephadex G-75凝胶分离→纸层析检验→薄层层析制备。
齐海萍[2]2004年在《豆豉纤溶酶的制备、酶学特性及功能性质研究》文中研究表明豆豉纤溶酶(Dochi fibrinolytic enzyme,以下简称DCFE,E.C.3.4.21.7)是一种由中国传统发酵食品豆豉中分离出来的具有较高纤溶酶酶活的丝氨酸蛋白酶。它不但可直接溶解纤维蛋白,抑制血栓形成,而且具有抑制机体凝血,抗血小板聚集,增强纤溶等方面的功能。DCFE可由微生物发酵生产,安全性好,价格便宜,具有开发成新一代溶栓药和相关功能食品的潜力。 本论文主要研究内容:DCFE高产菌的选育;DCFE高产菌UγD8发酵条件优化;DCFE提取、分离和纯化;DCFE酶学性质的研究;DCFE溶栓和抗栓功效研究。通过上述研究,得到以下主要研究结果: 利用自行设计的DCFE产生菌筛选模型成功获得一株产DCFE酶活高达1,200IU/mL的菌株DC-S6。对该菌株进行物理(紫外线、~(60)Co)、化学(硫酸二乙酯DES)诱变处理、纤维蛋白平板初筛、摇瓶复筛,得到突变株UγD8,其发酵液DCFE酶活在2,900IU/mL以上,比出发菌DC-S6提高了1.4倍。传代实验表明,DCFE高产菌UγD8在10代以内产酶能力基本没有下降,表明此菌遗传性状稳定。对UγD8的菌体形态、菌落形态与特征、菌种生理生化特性进行分析,初步推断该菌株属于芽孢杆菌属Bacillus sp.。用不同剂量UγD8发酵液给小鼠灌胃后,半数致死剂量大于80g/kg,说明Uγ/D8发酵生产的DCFE属于实际无毒生化制品。 DCFE高产菌UγD8的发酵条件优化结果表明:较适宜的碳源为蔗糖;最适氮源为豆浆,有机氮源优于无机氮源;较适宜的培养基初始pH7.0。采用正交实验得出最优培养基组成(g/L):蔗糖20,纤维蛋白5,豆浆1000mL(蛋白质浓度40g/L),KH_2PO_4·3H_2O1,K_2HPO_4·3H_2O 2.5,MgSO_4·7H_2O 5,CaCO_3 4。采用优化后的培养基进行25L发酵罐发酵试验。种龄12h,接种量2%;装液量为10L,温度37℃,风量14L/min,发酵72h后DCFE酶活高达3,300IU/mL。 DCFE提取、分离和纯化方法的研究结果表明:发酵液经过65%硫酸铵沉淀、CM-Sepharose-FF离子交换色谱和Sephacryl S-200凝胶过滤色谱等步骤,得到DCFE纯酶,其回收率为3.7%,纯化倍数为35.5,比活达到10,898IU/mg。该纯酶SDS-PAGE凝胶电泳图谱为单一电泳带,由此推断DCFE没有亚基,以单体形式存在。SDS-PAGE凝胶电泳和Sephacryl S-200凝胶过滤测得DCFE的相对分子质量分别为31.0kDa和30.2kDa,进一步证实该酶为单体酶。 DCFE溶液稳定性研究结果表明:Ⅰ:该酶最适温度为50℃,最适pH为7.5～8.0。Ⅱ:环境pH8.0时酶活最稳定,说明DCFE是一种偏碱性蛋白酶。Ⅲ:37℃下保温1h,发酵液中残余酶活下降到93%,纯酶酶活下降到50%;50℃下保温1h,粗酶酶活仍有80%,而纯酶仅剩40%;60℃下保温1h,粗酶酶活仅剩5.8%,而纯酶酶活几乎完全丧
史丰坤[3]2009年在《一株枯草芽孢杆菌产溶纤酶的研究》文中认为溶纤酶是指能溶解血液中纤维蛋白的一类酶的总称。微生物是溶纤酶最重要的来源之一,微生物溶纤酶具有分子量小、无免疫原性、安全无毒、酶活性高、不易引起出血、半衰期长和可经消化道直接吸收等优点,被认为是安全、廉价、最具开发潜力的溶栓剂之一。本课题从诱变选育溶纤酶高产突变株开始,主要完成了以下研究内容:从实验室保藏菌种B2(溶纤酶活470IU/mL)出发,采用紫外线、硫酸二乙酯单独及复合诱变处理方式进行诱变,经过平板初筛和摇瓶发酵初筛、复筛选育到一株产酶水平较高且性状稳定的溶纤酶高产突变株SFF-B2,产酶活力达790IU/mL,比出发菌株活力提高了68.2%;对菌株SFF-B2进行了菌落、菌体形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析,初步鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(GenBank登录号:FJ612600)。对溶纤酶高产突变株SFF-B2的发酵产酶培养基和培养条件进行了优化。确定的最佳培养基为(g/L):可溶性淀粉60,豆粕粉18,玉米浆2,CaCl2 0.5,MgSO4 0.5,K2HPO4 2,NaCl 0.4;确定的最佳发酵条件为:种龄14h,接种量5%,初始pH值7.0,装液量30mL/250mL叁角瓶,摇床转速180 r/min,培养温度37℃。在最佳培养基和最佳发酵条件下,突变株SFF-B2产酶活力达到1218 IU/mL,比优化前提高了54%。采用硫酸铵分级盐析、透析袋脱盐、Sephadex G-25凝胶过滤层析、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析分离技术,从发酵液中分离纯化出溶纤酶,酶活回收率达到48%,纯化倍数为28;纯化后的溶纤酶经SDS-PAGE鉴定为单一组分,其相对分子量为29.8 kDa。溶纤酶在常温下稳定,50℃以上容易失活;酶最适反应温度40℃;在KH2PO4-NaOH缓冲体系和磷酸盐缓冲体系中酶活较稳定,最适pH为7.0;Cu2+、Ag+、Al3+对酶有比较明显的抑制作用,且离子强度越大时,抑制作用越明显;Ca2+、Mg2+对酶有比较明显的激活作用。综上所述,突变株SFF-B2所产溶纤酶具有较好的温度和pH稳定性,是一株具有开发潜力的溶纤酶生产菌株。
李燕[4]2011年在《Bacillus subtilis pda0426鉴定及抑菌活性产物研究》文中研究表明微生物产生的抑菌活性物质是筛选抗菌新药的重要来源,为新药的开发提供了大量的原材料。随着耐药性菌株的大量出现,新型抗菌药开发显得尤为重要。本文以抑菌活性为导向,分离到一株具有强烈抑制金黄色葡萄球菌的细菌菌株pda0426,并对该菌株进行了形态学及分子生物学的鉴定,确定pda0426菌株为一株枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis pda0426。以发酵液的抑菌活性为指标,对Bacillus subtilis pda0426的发酵条件进行了初步优化,确定其发酵的最佳培养基组成为蛋白胨、葡萄糖、NaCl,最佳培养条件:最初pH为8.0,培养温度为30°C,转速为180 r/min,培养时间为3天。同时,以组分回收率为指标,研究了发酵液的最佳粗分离方法,采用LH-20葡聚糖凝胶柱层析与反相柱层析进行活性产物的粗分离。经过发酵液的粗分离以及活性组分的纯化与精制,得到了9个主要的组分。经过1H-NMR,13C-NMR、二维核磁数据、质谱等数据进行分析,其中确定结构的组分有4-11-1、4-11-2、R6-5-13.14-1与R7-1.2.3-13.18-5,4-11-2与R6-5-13.14-1为同一种化合物,属于大环内酯类,4-11-1为环二肽。采用高通量及MTT法,对确定结构的化合物进行生物活性研究,主要测定了其对供试菌株的最小抑制浓度(MIC)以及对肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果表明化合物4-11-2与R6-5-13.14-1对金黄色葡萄球菌的MIC为2.0μg/mL,对PC3的IC50为41.0μg/mL,对真菌没有非常明显的活性,是发酵液中抑制金黄色葡萄球菌的主要有效成分。由于发酵液粗提物对一些植物致病真菌具有一定的抑制活性,具有抗真菌活性的化合物仍然需要继续分离。
靳文婷, 古海尼沙·买买提, 艾尼瓦尔·吐米尔[5]2019年在《绿皮地卷可培养内生真菌分离、鉴定及抑菌活性》文中研究指明[目的]了解绿皮地卷内生真菌多样性,并初步探索抑菌活性研究。[方法]采用匀浆涂布法分离纯化,采用形态学和分子生物学方法对内生真菌进行初步的鉴定,以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为受试菌,采用菌块法检测内生真菌的抑菌活性。[结果]从绿皮地卷中共分离得到29株内生真菌,分属于6纲7目11科16属;抑菌实验结果表明:筛选得到11株内生真菌至少对一种指示菌有抑菌活性,占分离菌株总数的3. 79%。A3菌株对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别达到24. 92 mm、33. 00 mm、25. 25 mm。[结论]分离得到的29株内生真菌中青霉属(Penicillium)为优势属,其中A3菌株的抑菌效果最明显,尤其是对枯草芽孢杆菌显示较高的抑菌活性。可作为筛选抑菌活性物质的新资源。
参考文献：
[1]. 中国根霉12～#产芽孢抑制剂代谢机理及分离纯化方法的研究[D]. 苏俊. 天津科技大学. 2002
[2]. 豆豉纤溶酶的制备、酶学特性及功能性质研究[D]. 齐海萍. 江南大学. 2004
[3]. 一株枯草芽孢杆菌产溶纤酶的研究[D]. 史丰坤. 山东轻工业学院. 2009
[4]. Bacillus subtilis pda0426鉴定及抑菌活性产物研究[D]. 李燕. 山东轻工业学院. 2011
[5]. 绿皮地卷可培养内生真菌分离、鉴定及抑菌活性[J]. 靳文婷, 古海尼沙·买买提, 艾尼瓦尔·吐米尔. 生物技术. 2019