（广西中医药大学第一附属医院病理科 广西 南宁 530023）
【摘要】 目的：探讨消瘤汤对胃癌细胞SGC7901增殖凋亡情况的影响。方法：用MTT法检测不同浓度消瘤汤对胃癌细胞SGC7901增殖凋亡的影响；免疫组化法测定细胞蜡块中凋亡相关蛋白bcl-2表达情况。结果：⑴消瘤汤高剂量组（100μg/ml）在72h对胃癌细胞SGC7901有明显的抑制作用；⑵消瘤汤高剂量组（100μg/ml）能明显下调胃癌细胞SGC7901中bcl-2的表达，其与对照组的差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：消瘤汤能够抑制胃癌细胞SGC7901的增殖，可能与下调凋亡相关蛋白bcl-2有关。
【关键词】消瘤汤；增殖凋亡；bcl-2
【中图分类号】R273 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2017）18-0353-02
消瘤汤由白花蛇舌草、黄芪、半枝莲、白英等多种中药配伍而成，在长期的临床运用中，消瘤汤通过其扶正祛邪、清热解毒、培补正气等功效对肿瘤有较好的治疗及辅助治疗作用[1]。部分研究显示[2-4]，消瘤汤对肝癌、肠癌等恶性肿瘤的细胞有较强的抑制作用。本实验运用MTT、免疫组织化学等技术研究消瘤汤对胃癌细胞株SGC7901增殖凋亡的影响及对凋亡相关蛋白bcl-2的调控，探讨消瘤汤对胃癌细胞增殖凋亡的干预作用，为今后在临床上采用中药制剂防治胃癌提供研究思路与方法。
1.材料与方法
1.1 材料
1.1.1药物 消瘤汤由党参15g、黄芪15g、薏苡仁20g、田七6g、扶芳藤12g、山慈菇15g、紫河车6g、半枝莲15g等组成，浓煎30ml（浓度3.5g/ml），实验前再稀释为低剂量10μg/ml、中剂量50μg/ml、高剂量100μg/ml三种浓度的药液。
1.1.2细胞与细胞培养 胃癌细胞系SGC7901购自中国科学院上海生物所细胞库。细胞在含有10%的胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的1640培养液中生长，并置于37℃，5% CO2的条件下培养。
1.1.3主要试剂及设备 噻唑蓝（MTT）；二甲基亚砜( DMSO)；RPMI 1640培养基；胎牛血清；胰蛋白酶；中山金桥鼠抗人bcl-2免疫组化试剂盒；Bio-Rad酶标仪；sigma低温高速离心机；北京半导体设备一厂超净工作台；SANYO恒温培养箱。
1.2 实验方法
1.2.1消瘤汤对SGC7901细胞生长抑制的影响 使用MTT法检测消瘤汤对SGC7901细胞生长抑制的影响。胰酶消化收集对数生长期的细胞，调整单细胞悬液密度1×105个/ml，以每孔1×104个细胞接种于3块96孔板（100μl/孔），每组细胞接种8个孔，培养24h待细胞贴壁后，小心弃上清并加入配置好的含药培养基（低剂量组浓度10μg/ml、中剂量组浓度50μg/ml、高剂量组浓度100μg/m），另设空白对照孔（只加培养基不含药物）。分别于培养24，48，72h后每孔加入MTT溶液20μl(5mg/ml)，37℃孵育4h，小心吸去每孔中的培养液，再加入80μl的DMSO，在微型振荡器上振荡15min，用全自动酶标仪测定各孔570nm吸光值。计算公式：肿瘤细胞生长抑制率=(对照孔平均吸光值-加药组平均吸光值)/对照孔的平均吸光值×100%。
1.2.2消瘤汤对SGC7901细胞凋亡相关蛋白bcl-2表达的影响 使用免疫组化法检测消瘤汤对SGC7901细胞凋亡相关蛋白bcl-2表达的影响。调整单细胞悬液密度1×105个/ml，接种到4个培养瓶内，培养瓶均加入5ml无药培养基，培养24h后小心弃掉无药培养基，其中3瓶加入含药培养基（低剂量组浓度10μg/ml、中剂量组浓度50μg/ml、高剂量组浓度100μg/ml），另一瓶设为空白对照瓶（只加培养基不含药物），培养72h。胰酶消化吹打均匀后，室温下2000r/min离心5min，弃上清，小心取出沉淀物，包埋纸包好后放入脱水盒在4%多聚甲醛固定2h，按常规石蜡包埋制备蜡块，切片厚度2～3μm，切片常规脱蜡水化后，柠檬酸高压修复，其余步骤按试剂盒说明进行操作。bcl-2阳性部位为包膜或胞质，选取10个细胞集中的高倍镜视野，每个视野计数100个细胞，观察bcl-2阳性细胞个数。
1.3 统计学分析
应用SPSS21.0软件进行统计学分析，计量资料采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 消瘤汤对SGC7901细胞生长抑制的影响
消瘤汤高剂量组（100μg/ml）在72h对胃癌细胞SGC7901有明显的抑制作用，与对照组差异有统计学意义，P＜0.05，详见表1。
△与对照组比较
3.讨论
消瘤汤中白花蛇舌草能清热解毒，黄芪能补气培本，半枝莲能化疲利尿，白英能祛风利湿，龙葵能活血消肿，诸药配伍、攻补兼施、气血同治，临床上对于肿瘤的治疗有较好的疗效[1,5]。本研究中通过MTT法检测发现，消瘤汤对胃癌SGC7901细胞的增殖有一定的抑制作用，其中高剂量组在72h对胃癌细胞SGC7901的抑制作用最明显。bcl-2是最重要的细胞凋亡相关基因之一，其表达蛋白主要定位于线粒体膜、滑面内质网等处，通常以同源二聚体或异源二聚体形式通过抗氧化作用、调节Ca2+浓度、拮抗其他蛋白的促凋亡作用而抑制细胞凋亡。其他学者的研究显示，bcl-2蛋白在胃癌中的表达明显多于正常胃黏膜和胃炎组织，它对细胞凋亡的抑制作用是胃癌发生发展重要因素之一，而本实验中不同浓度的消瘤汤对SGC7901的bcl-2表达均有不同程度的抑制作用，其中高剂量组消瘤汤下调SGC7901细胞bcl-2的表达最明显。这提示消瘤汤发挥抗肿瘤作用的可能与其诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、下调凋亡相关蛋白bcl-2的表达有关。
【参考文献】
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[2]马晓红，丁艳蕊，王小琴.消瘤汤含药血清干扰细胞生长作用浓度的实验研究[J].湖北中医杂志，2008,30(2)：10-11.
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[5]张玮.消瘤汤抗肿瘤作用及机制探讨[D].湖北：湖北中医学院, 2008：10-10.
基金项目：2016年广西壮族自治区卫生和计划生育委员会自筹经费科研课题（Z2016659）；2016年广西中医药民族医药自筹经费科研课题（GZZC16-14）
论文作者:文亦磊,黄克强,黄羽
论文发表刊物:《医药前沿》2017年6月第18期
论文发表时间:2017/7/24
标签：细胞论文; 胃癌论文; 凋亡论文; 剂量论文; 抑制论文; 浓度论文; 作用论文; 《医药前沿》2017年6月第18期论文;