我们都知道艾滋病（AIDS）的可怕，全世界患有艾滋病的人群也不在少数，由于其潜伏期较长，患者的免疫系统逐步瘫痪，大大加大了其他病原体的侵入，所以有非常高的致死率。对人类的健康构成了极大的威胁，其致病菌为人类免疫缺陷病毒（HIV），该病毒主要入侵人人体内的免疫细胞，如T细胞，其结构上有很多特殊标记，所以在临床检验中可以运用相关的免疫科技技术进行检测，理论上会有比较好的效果，那么，现在对于HIV的免疫检测又有哪些比较前沿的技术呢，下面依次给大家介绍一下。
所谓HIV病毒免疫检测就是利用现代先进的分子杂交及免疫复合物检测技术，对HIV进行定性定量检测，主要包括了抗原检测、抗体检测、CD4+T淋巴细胞[1]，病毒载量测定等。每种检测方法都有相应的特点，广泛适用于临床及实验研究。下面给大家依次介绍一下各种检测方法的原理及特点。
一、抗原检测：HIV病毒结构上有一系列核心蛋白，其中就包括P24抗原核心蛋白，其在血中出现最早，是最早的标记物，由于艾滋病有较长的潜伏期，在感染的早晚期，P24的存在形式有两种，即游离或免疫复合物的形式，以后者居多，感染后的2周可经P24抗原技术检出，1-3月达高峰，存在5个月左右，由于体内抗体的不断产生，其含量也在不断下降，其存在时间对于预后有相应的指导意义，如果其的数量检测不出，说明患者此时已经进入无症状期，持续时间过长或复发均表示预后较差，进入发作期。故P24抗原的检测对AIDS窗口期的诊断有一定的意义，其方法简单，易于执行，主要通过ELISA、放射免疫，免疫荧光技术进行检测[2]，还可用于HIV细胞培养检测、病情发生的动态监测，抗HIV病毒治疗效果的评价等。抗原检测除了P24抗原检测之外，还有其他方法，如免疫吸附法、荧光抗原测定法、裂解免疫复合物测定法等。
二、抗体检测：抗体检测是目前免疫检测HIV的主要检测方法、其方法较多，也是现在免疫研究的一大热点。AIDS的病程较长，HIV的抗体一般在感染1月后才开始出现，直至终身，其特异性抗体仍是当今AIDS的重要诊断依据，常用的HIV抗体检测技术有：确证试验包括免疫条带检验、免疫印迹（WB）、放射免疫沉淀检验（RIPA），初筛试验包括酶联免疫吸附（ELISA）、免疫荧光法（IFA）、凝集试验（PA）。
1.ELISA技术：该技术在大部分医院应用于检测HIV抗体，尤其适用于检测量较大的情况，其原理是将待检抗原抗体固定于固态的载体，用特定的标记酶标记的抗原抗体与被固定的抗原抗体进行相应的反应，加入底物后，在酶的催化下发生反应，产物的颜色程度用分光度来表示，吸光度与抗原抗体的量呈一定的关系，经过精密的仪器检测，对抗体定量分析，该方法是HIV抗体检测的主要方法，现在的第四代酶联检测试剂[3]，具有更高的检测灵敏度及特异度，且检测更加方便。
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2.免疫荧光法：其载体选自特定的培养细胞，用HIV病毒进行侵入，产生相应的抗原在细胞中，制作抗原拨片，用待测者的血清与抗原玻片进行反应，产生一定的免疫复合物，此时再用荧光标记的抗免疫复合物抗体与产物反应，观察细胞内的荧光标记，其具有灵敏度特异度高，便捷的优点，但因荧光在细胞内持续存在，需要再次进行相应实验进行确证。
3.凝集实验：通常选自明胶颗粒作为载体，其自身带有HIV病毒的抗原，待检者的血清与之进行反应后混匀，如存在抗体，在室温的条件下会发生凝聚，根据凝聚情况对HIV抗体的量进行分析。
4.免疫印迹技术：HIV病毒有很多核心蛋白，分子量差异较大，WB技术可将蛋白按照质量有效分离，用纤维膜将这些分子量不同的蛋白包裹，分为条状，因此，在每一条的纤维膜上都会有相应的HIV病毒核心抗原。将待测者血清进行充分稀释，与条状纤维膜充分接触，在恒温条件下充分搅拌，是反应速率达到最大。此时的HIV抗体与膜上的抗原形成免疫复合物，此时按照免疫荧光法的原理，加入与酶结合的抗人免疫复合物抗体，反应后充分洗涤，加入特定的底物，存在复合物的条状纤维膜会呈现相应的颜色，通过条带的多少对HIV抗体的数量进行评估。
5.条带免疫试验：与免疫印迹的方法类似，条带免疫实验也是相同的方法，只不过条带才用的材料不同，但是此方法避免了膜包裹后因病毒蛋白的裂解，相应的载体抗原会减少，具有特异性高，稳定性好的优点，但是由于其抗原未进行糖基化，产生的分子空间构象变化较多，所以与HIV天然抗原存在一定差异，因此有时检测结果有时不够准确。
6.放射免疫沉淀试验：用放射性物质（同位素）对HIV病毒核心蛋白进行标记，再将被标记蛋白与待测血清结合，如存在相应数量的抗体，则蛋白与抗体结合会产生放射性沉淀，此时沉淀再经十二烷基硫酸(SDS)及缓冲液洗脱，可将抗原洗脱分离，剩下的蛋白成分经放射显影进行鉴定，用相关的分子标记物比对，从而进行相关的诊断，该方法具有给常高的特异度和灵敏度，是比较前沿的诊断技术，唯一的缺陷在于诊断的成本较大，且比较耗费时间，难以在临床检测中普及推广[4]。
三、CD4+T淋巴细胞检测：淋巴细胞数量的检测也是免疫检测的主要方法，我们都知道，HIV病毒主要损害我们机体的免疫系统，使T淋巴细胞不断减少，以致CD4+/CD8+T细胞比值倒置，如进行造血干细胞的移植，可在一定程度上提高血内淋巴细胞的数量，应用流式细胞术可对T淋巴细胞的亚群的数量做出测量，通过直接或间接的手段得出CD4+T淋巴细胞的数目。通过对CD4+T淋巴细胞的数量作出分析，了对疾病的发生发展，机体的免疫状态，治疗效果评估及预后都有较好的临床价值。
以上给大家介绍了现在比较前沿的HIV病毒免疫检测技术，主要包括抗原、抗体及CD4+淋巴细胞数目检测，目前的检测技术灵敏度不断调高，检测用时不断减少，便捷性也越来越高，在未来的一段时间，也会不断朝着这个趋势发展。
参考文献：
[1]焦立民，高颖.3种不同免疫检验方法检测人类免疫缺陷病毒的可靠性比较[J].世界临床医学，2016,10(12):238.
[2]张锦伟.三种不同免疫检验方法检测抗HIV结果可靠性比照观察[J].中国现代药物应用，2016,10(1):30-31.
[3]赵景男.不同免疫检验方法用于检测抗HIV结果的可靠性比较分析[J].中国医药指南，2017,30(22):157.
[4]金大为.3种不同免疫检验方法检测抗HIV结果可靠性的对比分析[J].中国医药指南，2017,23(27):61-62.
论文作者:巫太平
论文发表刊物:《健康世界》2019年第08期
论文发表时间:2019/9/5
标签：免疫论文; 抗原论文; 抗体论文; 淋巴细胞论文; 病毒论文; 复合物论文; 蛋白论文; 《健康世界》2019年第08期论文;