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摘要：目的：探讨鱼腥草有效杀菌成份采用酶法工艺提取的最佳提取条件，优化酶法工艺提取总黄酮的工艺。方法：采用单一变量因素设计实验，变量分别酶种类、温度、PH值，测定其提取物取得率。结果：在单一变量实验中，由酶法同PH值、同温度下不同酶种对酶法提取物得率中，纤维素酶联合果胶酶提取率最高，为19.49%；酶法同PH值、同酶不同处理温度提取率中，45oC时提取率最高；酶法同温度、同酶不同PH值处理提取率中，PH值为3.5时提取率最高。结论：由纤维素酶+果胶酶、温度为45oC、PH值为4.5时，提取物取得率最高。
鱼腥草是中国药典收录的中药，来源为三白草科植物蕺菜（拉丁学名：Houttuynia cordataThunb.）的干燥地上部分，主要生长在中国西南三省阴冷潮湿的山区，夏季茎叶茂盛花穗多时采割，除去杂质，晒干。鱼腥草是我国传统中药材，其性微寒，味苦，具有清热解毒、排脓消痈、利尿通淋之功效[1]。鱼腥草花、叶、果含有槲皮素、槲皮苷、异槲皮苷、瑞诺苷、金丝桃苷、阿夫苷和芸香苷等黄酮类化合物，其中以槲皮素含量最高，且具有抗炎、抗过敏等作用[2]。鱼腥草味辛，具有抗菌、抗病毒、提高机体免疫力、利尿等作用。近些年来，在酶技术的高速发展中，科学工作者充分利用其特性开发了酶解法这一新的提取方法。酶的反应具有专一性高、催化活性强及作用条件温和等特点。20世纪90年代，国内许多学者开始将酶的特性与生物细胞的结构联系起来，陆续开展了将生物酶用于天然药物及中药的辅助提取，以达到提高有效成分浸出率的目的，取得了一定的效果。本文采用单一变量因素设计实验，变量分别酶种类、温度、PH值，测定其提取物取得率。现报道如下。
1 资料与方法
1.1基本资料
对照组男例，女例；年龄最大岁，最小岁，平均（±）岁；观察组男例，女例，年龄最大岁，最小岁，平均（±）岁，首次入我科进行急诊护理例，两组患者在性别、民族、年龄、文化程度等方面比较无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2入选标准：
1.3方法 准确称取15g鱼腥草若干份，根据与酶解法所涉及到因素进行单因素试验。①酶种类 按20U/g（鱼腥草）的标准，依次加入纤维素酶（200U）、果胶酶（200U）、木瓜蛋白酶（200U）、纤维素酶（200U）+果胶酶（200U）、纤维素酶（200U）+木瓜蛋白酶（200U）、果胶酶（200U）+木瓜蛋白酶（200U）、纤维素酶（200U）+果胶酶（200U）+木瓜蛋白酶（200U），调节PH至4.5，按1：20料液比加入ddH2O，于45oC酶解2.5h。将所得提取液经过浓缩后得浸膏，循环处理3次。②pH值 分别将溶液pH值调节至3.5，4.5，5.5，6.5，加入纤维素酶（200U）+果胶酶（200U），按同样的料液比加入ddH2O，在5oC酶解2.5h。提取液经过过滤、浓缩后计算的率，重复3次。③温度 调节PH至4.5，加入纤维素酶（200U）+果胶酶（200U），按同样的料液比加入ddH2O 2.5h，重复3次处理后得提取液浸膏，计算得率。
1.4疗效评价
1.5 统计学分析 采用SPSS 19.0软件，计量资料用（平均值±s）表示，采用t进行检验，P ＜0.05时，说明患者在治疗前后的比较存在差异，有统计学方面的意义。
2 结果
由表1 可知，由酶法同PH值、同温度下不同酶种对酶法提取物得率中，纤维素酶联合果胶酶提取率最高，为19.49%；由表2可知，酶法同PH值、同酶不同处理温度提取率中，45oC时提取率最高；由表3 可知，酶法同温度、同酶不同PH值处理提取率中，PH值为3.5时提取率最高。
3 讨论
大多数中药为植物性草药，其有效成分多存在于植物细胞的细胞质中。提取植物有效成分的方法有多种，姜涛[3]采用超声提取法提取鱼腥草总黄酮，对影响超声波提取鱼腥草中总黄酮的相关因子即乙醇的浓度、固液笔和提取时间等进行实验来确定其最佳的提取工艺。细胞壁作为由纤维素、果胶质等组成的致密结构，若选用合适的酶对中药材进行预处理，能有效分解细胞壁的组成成分，破坏细胞壁的结构，提高提取效率，缩短提取时间.纤维素酶法提取与传统提取方法（如超声法、微波法）相比，由于其具有专一、无毒、反应条件温和及催化活力可调控等优势而成为目前植物成分提取的热门方法之一[4]。段文录[5]研究了用纤维素酶法提取鱼腥草总黄酮的工艺条件，考察了纤维素用量、酶解时间、酶解PH值、酶解温度等对鱼腥草总黄酮提取率的影响。
酶法作为一种提取中药有效成分的新方法，无论在实践还是理论方面均未成熟和完善，存在多方面问题。酶作为生物催化剂，其活性易受温度、pH值、酶浓度及酶解作用时间等因素影响，这些因素稍有变化，便会影响酶的活性；在酶法提取过程中，酶有可能与中药所含某些成分发生反应，产生新的化学物质；在酶的灭活方面也有可能存在残留酶，从而对产物的纯度、得率及制剂疗效、质量检测与控制、制剂的剂型等产生影响；中药种类繁多，其细胞结构及有效成分不尽相同，需要根据实际情况选择酶的种类，尚无统一的参考标准。虽然酶解法尚不成熟，但相对于其他提取方法而言还是有许多优点，如可以提高产物提取率，保障产物的纯度、稳定性及活性，对中药成分影响小，缩短提取时间，降低耗能，操作和设备简单，成本低廉等。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：208
[2]石跃桂.鱼腥草研究文献综述[J].北京农业.2011（3）：121-122
[3] 姜涛，车环宇，刘畅.超声波提取鱼腥草中总黄酮的工艺研究[J].黑龙江医药，2010，23（4）：557-559
[4]Qian Z G，Cellulase-assisted extraction of polysacchairides from Cucurbita moschata and their antibacterial activity.Carbohydrate Polymers，2014，104（3）：432-434
[5] 段文录，吴峰敏，张延萍.纤维素酶法提取鱼腥草总黄酮工艺[J].河南科技大学学报：自然科学版，2010，31（1）：98-100
论文作者:梁鑫
论文发表刊物:《健康世界》2016年1期供稿
论文发表时间:2016/3/25
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