翟奕
湖南省胸科医院 湖南长沙 410013
摘要：目的：分析Xpert MTB/RIF联合T细胞斑点试验用于检测涂阴肺结核的价值。方法：2016年1月～2017年12月，医院传染科怀疑为肺结核痰涂片阴性的对象274例，均进行Xpert MTB/RIF联合T细胞斑点试验。结果：涂阴肺结核204例、非结核72例。血清T‐SPOT.TB灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率分别为70.59%、83.33%、92.31%、50.00%、73.91%，Xpert MTB/RIF则为70.10%、95.83%%、97.95%%、53.08%%、76.81%%，联合则为80.39%、90.28%、95.91%、61.90%、82.97%。联合诊断灵敏度与阴性预测值、符合率高于Xpert MTB/RIF，血清T‐SPOT.TB特异度低于Xpert MTB/RIF、联合，血清T‐SPOT.TB阴性预测值低于联合，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：Xpert MTB/RIF联合T细胞斑点试验用于检测涂阴肺结核并不能明显提高诊断的效用，但可以弥补两种技术单独使用的缺陷。
关键词：肺结核；涂阴肺结核；T细胞斑点试验；Xpert MTB/RIF
肺结核是常见的传染病，我国结核分枝杆菌（M.tuberculosis，MTB）携带者超过5亿人[1]。近年来，因人口老龄化、地区发展差异、环境变化，肺结核发生率呈波动上升趋势，老年患者明显增多。肺结核的预后与诊断时间关系密切，及早诊断治疗非常关键[2]。痰涂片检查是诊断肺结核的常用方法，但是涂阴性率较高，可以达到30%～40%，从而导致延迟诊断、预后不佳[3]。Xpert MTB/RIF联合T细胞斑点试验是两种新型的诊断技术，本文采用对比研究，评价两种技术用于涂阴肺结核的诊断效用。
1资料及方法
1.1一般资料
2016年1月～2017年12月，医院传染科怀疑为肺结核痰涂片阴性的对象274例，其中男160例、女114例，年龄（54.6±11.8）岁。纳入标准：①怀疑为结核病，采用PPD皮试、X线检查等怀疑为肺结核；②最终进行了培养法明确诊断；③临床资料完整。排除标准：①麻醉药物过敏，无法获得肺泡灌洗液；②无法配合检查对象；③活动性大咯血，急性期；④孕妇；⑤合并HIV感染；⑥明确结核病史；⑦合并免疫系统疾病，正在使用免疫抑制剂的对象。
1.2方法
1.2.1 初筛
主要通过X线为主的影像学技术、皮试、痰涂片检查，部分对象进行血标本的血清学或γ-干扰素释放试验，同时进行肺部X线检查，或伴有典型的肺结核表现。若一项为阳性，则怀疑为肺结核。则开展Xpert MTB/RIF联合T细胞斑点试验。涂阴肺结核：有或无典型肺结核临床症状，胸部X线检查与活动性肺结核病变特征相符，至少3份痰涂镜检抗酸染色阴性，并至少1次培养阳性。
1.2.2 检测与培养
（1）结核的诊断：取痰液或肺泡灌洗液进行图片镜检、培养，培养作为诊断的金标准。
（2）T细胞斑点试验：①采集肘部静脉血5ml，肝素锂抗凝，混匀，24h内送检，若无法立即检查，则需要-4℃下冷藏。②预热RPMI1640培养液，稀释后加入Ficoll淋巴细胞分离液，上机进行离心分离PBMCs，将其转移至无菌尖底离心管，至15ml，洗涤，再次离心，弃上清液。③向离心管加入AIM-V培养液1ml，常温下沉淀，定容至10ml，离心7min，弃上清。④分离取得细胞稀释液，取10μl待测，采用细胞分析仪计算细胞数。⑤配置成250000/100μl浓度的稀释细胞工作液，上机，进行酶联免疫斑点实验（ELISA），计算斑点数，自动读取判断输出结果。依次作为诊断标准。
（3）GeneXpert/RIF检测：怀疑非肺结核者，取1ml痰液标检测放入前处理管，加入相当于痰液标本体积两倍的SR痰标本处理液，将处理管放置在漩涡振荡器震荡20s，直至无可见的块状标本，静置15min，以无菌吸管吸取2ml液化后眼部，缓缓转入到Cartridge反应试剂盒中，将其转移到检测模块中，仪器进行自动化检测。检测的原理：碱处理-中和离心沉淀法处理提取于DNA，加入抗原试剂A、B处理后，进行PCR扩增、杂交，判断阳性以及耐药情况。
1.3 观察指标
Xpert MTB/RIF、T细胞斑点试验单独以及联合检测涂阴肺结核的效用。
1.4 统计学处理
采用SPSS20.0软件进行统计学处理，诊断效用比较采用检验，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 诊断结果
274例，其中为涂阴肺结核204例、非结核72例。血清T‐SPOT.TB、Xpert MTB/RIF、联合检测的结果如下表1。
3 讨论
本次研究显示，相较于单独应用，血清T‐SPOT.TB、Xpert MTB/RIF联合应用的均衡性有所提升，其中特异度无明显的改善，但是灵敏度、符合率明显上升，可以避免漏诊。目前有关于血清T‐SPOT.TB、Xpert MTB/RIF诊断涂阴肺结核的效用研究较多。有报道显示，GeneXpert对结核病的诊断敏感性、特异性均在80%以上，特异度可以在95%以上，与本文相近，但对于涂阴结核病灵敏度显著下降，本文研究中Xpert MTB/RIF灵敏度仅为70.10%，提示对于涂阴的对象，采用Xpert MTB/RIF可能无法满足需求[4]。T‐SPOT.TB实验其检测原理是通过结核分枝杆菌特异性抗原对外周血单个核细胞产生有效刺激，使用细胞因子γ干扰素的分泌检测抗原特异性T淋巴细胞的应答反应，一项meta分析显示其诊断菌阴性肺结核敏感性、特异性分别为 83%［95%CI（0.81，0.85）］、86%［95%CI（0.84，0.88）］，略高于本文，这可能与本文纳入标准非常严格有关[55]。两种技术检测的原理不同，理论上可以联合，可以提高诊断的效用。
小结：
Xpert MTB/RIF联合T细胞斑点试验用于检测涂阴肺结核并不能明显提高诊断的效用，但可以弥补两种技术单独使用的缺陷。
参考文献：
[1]庞倩雄.2011-2015年佛山市禅城区活动性肺结核患者的登记与治疗管理分析[J].中国社区医师，2017，33（35）：161-163.
[2]赵承杰，何雪姣.136例初治肺结核患者就诊延迟的影响因素分析[J].预防医学，2017，29（12）：1235-1237.
[3]崔书娟.2012-2016年吉林省老年结核病人流行特征分析[J].中国卫生工程学，2018，17（02）：204-206.
[4]黄毅，黄斌，胡昕，等.T-SPOT.TB在诊断中国菌阴肺结核患者中应用价值的Meta分析[J].中国循证医学杂志，2016，16（12）：1381-13987.
[5]李曙光，李莉，张修磊，等.酶联免疫斑点试验在菌（涂）阴肺结核辅助诊断中的价值Meta分析[J].现代预防医学，2017，44（3）：515-519.
论文作者:翟奕
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2018年6月18期
论文发表时间:2018/8/24
标签：肺结核论文; 斑点论文; 细胞论文; 阴性论文; 效用论文; 结核论文; 血清论文; 《中国误诊学杂志》2018年6月18期论文;