倪春苗1 沈瑛2 张静1 姚红1 忻丽菁1 沈静1
（1上海市虹口区疾病预防控制中心 上海 虹口 200082）
（2浙江嘉兴市秀洲区疾病预防控制中心 浙江 嘉兴 314000）
【摘要】目的：了解外环境中禽流感病毒分布情况，为禽流感的防控提供依据。方法：2013年4月—2015年12月间，共采集禽类外环境标本620份，采用荧光定量RT-PCR方法对标本进行禽流感核酸检测。结果：A型流感病毒阳性标本159份，阳性率为25.6%，H7为63份,阳性率10.2%,三年中外环境标本检测到FLuA的阳性率分别为18.3%，9%,34.6%，呈逐年上升的趋势。清洗禽类污水标本、笼具表面擦拭标本和宰杀或摆放案板表面涂抹的H7N9阳性检出率相对较高，分别为13.2%，12.3%，和11.3%。结论：农贸市场活禽交易场所禽流感病毒阳性率较高,可能是秀洲地区禽流感病毒传播的一个最重要渠道，有关部门应采取有力措施对其进行监管，做好综合性防控工作,杜绝人感染H7N9病例的再次发生。
【关键词】外环境；禽流感病毒；H7N9；阳性率
【中图分类号】S852.65 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）14-0395-02
H7N9禽流感是由A型流感病毒引起的一类人禽共患的呼吸道传染病，该病毒是一种新型的重组病毒，具有起病急、进展快、致死率高等特点。嘉兴市秀洲区在2013年和2015年，共发生人感染H7N9病例4例，死亡3例，病死率为75%。这对该地区的人类健康和公共卫生造成了严重威胁。由于嘉兴秀洲是一个家禽养殖大区，人们有喜爱吃活禽的生活习惯，这些都是禽流感在人际间传播的因素。为了了解活禽市场外环境禽流感分布情况，为该地区严峻的防控工作提供有利的科学依据，我们对该辖区内的活禽外环境进行了采样检测，现报告如下。
1.材料与方法
1.1 对象
根据中国疾病预防控制中心《职业暴露人群血清学和环境高致病性禽流感监测方案（2011年版）》和国家卫生计生局《人感染H7N9禽流感疫情防控方案（第三版）》要求，在嘉兴秀洲区设立了监测点采样和应急监测。选择了2013年4月—2015年12月之间的样品。
1.2 监测时间2013年4月—2015年12月，按监测规定要求，定期开展应急监测和病例而暴露溯源监测。
1.3 方法
1.3.1标本采集 擦拭标本采集，用蘸有采样液的棉拭子在笼具、案板上涂抹禽类，或禽肉最常接触的3～5个部位，然后放入含5ML采样液的采样管中，并将拭子尾部弃去。水样标本采集，用一次性玻璃棒将污水或引用水充分混匀。用20ML一次性注射器采集10ML置于15ML采样管中。粪便标本，用棉拭子从禽笼或地面采集新鲜禽类粪便5g，放入含有5ML采样液的采样管中。
1.3.2标本处理按照人感染H7N9 禽流感疫情防控方案(第3版)进行。用振荡器充分振荡标本管1min以上，将黏液打散，用无菌消毒镊子将含聚丙烯纤维拭子在管壁反复挤压后取出，于4℃静置5min，待自然沉淀后取上清。
1.3.3病毒ＲNA 提取在生物安全Ⅱ级(BSL－2)实验室的生物安全柜内进行病毒ＲNA提取，提取方法严格按照试剂盒(ambion)说明书进行。
1.3.4试剂配置及加样严格按照试剂盒说明配置试剂，加5μl标本核酸。
1.3.5核酸扩增使用ABI STEP ONE PLUS扩增仪，采取江苏硕世生物科技有限公司PCＲ扩增试剂的检测模式。条件设置和结果判定严格按照检测试剂盒要求。
2.结果
2.1 基本情况
2013年1月—2015年12月，共收集了禽类外环境标本620份，A型流感病毒阳性标本159份，阳性率为25.6%，其中2013年采集标本数为213份，阳性率为18.3%，2014年采集标本数为179份，阳性率为22.9%,2015年采集标本数为228份，阳性率为34.6%。可以看出，阳性率呈逐年上升的趋势。
2.2 Ａ型流感病毒感染共１５９份，其中未分型为72份，阳性率11.6%,H7为63份,阳性率10.2%,H9为19份,阳性率11.9%，H5为10份,阳性率6.3%。在分型株中，H7的感染率最高为10.2%。其中有5份标本重复感染，4份标本同时检测出H7和H9，一份标本同时检测出H7和H5。
2.3 标本类型，（1）笼具表面檫拭标本，共146份标本，阳性标本共46份，阳性率为31.5%。（2）宰杀或摆放肉案表面涂抹，共79份，阳性标本28份，阳性率35.4%。（3）粪便标本249份，阳性标本37份，阳性率14.8%。4.污水标本98份，阳性标本35份，阳性率35.7%。5.禽饮水48份，阳性标本13份，阳性率27.1%。在笼具表面擦拭标本、污水和禽饮水中共有5份标本重复感染。见表。
2.4 不同地区的农贸市场阳性检出率不同，洪合为40.4%，建设为5.4%，王店为30%，王江泾为41.7%，新塍为24.4%，新城为9.4%，油车港为19.0%，高照为6.5%。阳性率最高的为王江泾和洪合，分别为41.7%和40.4%。
2.5 休市前后，H7N9阳性检出率的变化 秀洲2014年12月20日采取休市措施，休市前，该区共采集禽类外环境标本62份，检出阳性标本16份，阳性率为25.8%，休市3天后，共采集标本50份，检出阳性标本6份，阳性率为12%，与休市前比较，有下降。
3.讨论
秀洲区在2013和2015年，共发生H7N9感染病例4例，根据流行病学调查这4例病例都有禽类相关环境的暴露史。区政府高度重视，各部门相互配合，花费了大量人力、物力和财力开展环境H7N9禽流感病毒病原学监测，并根据监测结果，市场管理部门在2014年11月和2015年10月关闭了全区的活禽交易市场。最大可能减少了病例的发生。
经过三年的外环境监测，城乡活禽市场标本A型流感病毒阳性率较高为25.6%，说明城乡农贸市场活禽交易场所是禽流感病毒传播的一个重要渠道。监测中发现城乡活禽交易市场，家禽来源复杂，市场条件简陋，通风效果差，卫生消毒设施不健全；普遍存在现场宰杀销售现象，场所狭小，条件简陋，加工流程不规范，禽脏器废弃物及污物未得到安全处置；从事禽养殖或交易加工人员预防意识淡薄，不戴口罩，徒手作业，未规范洗手等现象较普遍。建议应加强对活禽农贸市场的监管力度，定期消毒休市制度，必要时关闭城区活禽交易市场。
清洗禽类污水标本、笼具表面擦拭标本和宰杀或摆放案板表面涂抹的H7N9阳性检出率相对较高，分别为13.2%，12.3%，和11.3%。粪便标本的H7N9阳性率相对较低，为8.0%。实验室结果显示在笼具表面擦拭标本、污水和禽饮水中共有5份标本重复感染。，而粪便标本阳性结果大多为单一病毒，这与采样人员在采样过程中更倾向于采集新鲜粪便标本，而这类标本受交叉污染的可能性较小有关秀洲区2013—2015年活禽市场环境样本FluA阳性率为25.6%，远远高于嘉兴市的其他地区。其中2013阳性率为18.3%，2014年阳性率为22.9%,2015年采阳性率为34.6%，可以看出，阳性率呈逐年上升的趋势，表明秀洲区市活禽市场外环境中始终存在H5、H7、H9及其它型别禽流感病毒污染。这可能与秀洲的地理位置有关。秀洲相对与其他的地市，地理位置较低，水网密布，到了雨季，经常出现水淹的情况，这对禽流感病毒的传播提供了有利条件。因此水灾之后的消毒，特别是对农贸市场的消毒成了重中之重。
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论文作者:倪春苗1,沈瑛2,张静1,姚红1,忻丽菁1,沈静1
论文发表刊物:《医药前沿》2018年5月第14期
论文发表时间:2018/5/11
标签：标本论文; 阳性论文; 率为论文; 禽类论文; 阳性率论文; 环境论文; 禽流感论文; 《医药前沿》2018年5月第14期论文;