山东省潍坊护理职业学院外护教研室
摘要：目的：探讨经间充质细胞衍生因子-1（SDF-1）诱导后非小细胞肺癌细胞中趋化因子受体4（CXCR4）/趋化因子受体7（CXCR7）表达的变化。方法：培养非小细胞肺癌细胞A549，分别通过逆转录PCR（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western-blot）检测不同浓度SDF-1诱导前后A549中CXCR4/CXCR7 mRNA和蛋白的表达水平。结果：经SDF-1诱导后，CXCR4/CXCR7 mRNA和蛋白表达水平均明显增高，P<0.01，且呈浓度依赖性。结论：SDF-1可以浓度依赖方式上调非小细胞肺癌细胞中CXCR4/CXCR7的表达。
关键词：非小细胞肺癌细胞；SDF-1；CXCR4；CXCR7
肺癌是许多国家致死率最高的恶性肿瘤。SDF-1是有多种生物学效应的小分子蛋白。CXCR4是SDF-1的特异性受体，在非小细胞肺癌细胞中表达；研究发现SDF-1存在另一受体CXCR7[1]，高表达CXCR7与临床病理分期Ⅰ型的非小细胞肺癌早复发、转移有关[2]。
1资料及方法
1.1资料
蛋白Mark、抗体β-actin、辣根酶标记山羊抗兔/鼠（北京中杉金桥）、抗体CXCR4、CXCR7（美国Abcam）、细胞培养人肺癌细胞株A549。
1.2方法
培养非小细胞肺癌细胞A549，分别通过RT-PCR和Western-blot检测不同浓度SDF-1诱导前后A549中CXCR4/CXCR7的mRNA和蛋白的表达水平。
1.2.1A549细胞培养及分组
用DMEM培养基、10%胎牛血清培养A549，换液、传代，选3代细胞，以6×105/cm2密度接种7cm2培养皿，加10%FBS、1%双抗的LG-DMEM培养24h后弃培养液，细胞随机分4组：对照组及1、10、100μg/L SDF-1诱导组，各组加基础培养基培养48h后检测。
1.2.2mRNA和蛋白测定
提取细胞总RNA，100V电泳30min测条带分布及亮度。PCR扩增后，DNA Maker、不同目的基因扩增产物、内参扩增产物各取3μl上样，2%琼脂糖凝胶80-100V电泳30min，凝胶成像系统扫描图像行灰度分析。裂解细胞提取蛋白，A570nm测OD值，算蛋白浓度。SDS-PAGE电泳，260mA、110min转膜，染色，验转膜效果，洗净，低转速封闭2h。免疫杂交：一抗：CXCR4（1：500），CXCR7（1：1000），β-actin（1：5000）。CXCR4于4℃孵育48h，余抗体4℃过夜。加二抗1：5000，室温孵育2h。加发光液，显色，拍照，凝胶成像系统扫描图像行灰度分析。
1.3统计学处理
用SPSS19.0软件分析数据，计量资料±s表示，组间比较用单因素方差分析和t检验；计数资料用ｘ2检验；P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
与对照组相比，经不同浓度SDF-1诱导后，诱导组CXCR4与CXCR7 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高，P<0.01，且呈浓度依赖性，见表1。
3讨论
CXCR4与CXCR7均在非小细胞肺癌细胞中表达，CXCR7对肿瘤内皮细胞血管生成起重要作用[3]。本研究发现，对照组A549几乎不表达CXCR4与CXCR7，SDF-1诱导组CXCR4与CXCR7mRNA和蛋白的表达水平显著提高，呈浓度依赖性。说明经SDF-1刺激后非小细胞肺癌细胞表面CXCR4与CXCR7的表达增强，浓度越高，表达越强。癌变时，表达上调的SDF-1能提高A549细胞表面CXCR4与CXCR7的表达水平，使二者与SDF-1的结合力增强，促使A549沿SDF-1浓度梯度向病变组织发生迁移、黏附。
参考文献：
[1]Balabanian K，Lagane B，Infantino S，et al.The chemokineSDF-1/CXCL12 binds to and signals through the orphan receptorRDC1 in T lymphocytes[J].J Biol Chem，2005，280（42）：35760-66.
[2]Iwakiri S，Mino N，Takahashi T，et al.Higher expression of chemokine receptor CXCR7 is linked to early and metastatic recurrence in pathological stage I nonsmall cell lung cancer[J].Cancer，2009，115（11）：2580-93.
[3]Yamada K，Maishi N，Akiyama K，et al.CXCL12-CXCR7 axis is important for tumor endothelial cell angiogenic property[J].Int J Cancer，2015V137N12：2825-36.
通讯作者：邢华苑，本科，讲师，潍坊护理职业学院。
论文作者:牛坤汀,赵晓田,魏长安,邢华苑（通讯作者）
论文发表刊物:《健康世界》2017年19期
论文发表时间:2017/11/22
标签：细胞论文; 肺癌论文; 浓度论文; 诱导论文; 蛋白论文; 受体论文; 水平论文; 《健康世界》2017年19期论文;