吴渊文[1]2003年在《自制HCA-Ⅱ肾保存液对肾脏低温保存的动物实验研究》文中研究表明HC-A肾保存液经过近20年的临床应用，已经得到广泛的肯定，在国内肾脏移植领域发挥了重要作用。近年来随着器官保存及器官移植过程中的缺血-再灌注损伤理论的发展，我们参考国外成功的多器官保存液的组成成分特点，并发掘祖国医学的优势，在HC-A肾保存液的基础上作了进一步的改进，研制成功HCA-Ⅱ肾保存液。在此基础上，我们采用离体肾脏灌注模型，作了HCA-Ⅱ肾保存液对肾脏低温保存效果的生化学改变的实验研究，并选择草犬进行同种肾脏移植，观察移植存活率情况。第二NN大学硕士毕业论文 在临床应用中，我们发现HC—A肾保存液存在以下缺点：1．硫酸镁浓度较大，低温时可析出，沉淀于保存液和肾血管中。2．甘露醇可能对离体肾脏有损害。3．pH值偏低且不稳定，不足以防止细胞的酸化作用。}tCA—II肾保存液主要特点为：1、离子浓度调整为细胞内液型(高钾低钠)，细胞内外离子浓度相似，保存期间细胞内外离子交换减少，能量消耗减少，有利于再灌注时迅速恢复跨膜阳离子梯度和细胞功能，阻止细胞水肿的发生。明显降低了硫酸镁浓度，减少了其低温时的析出；2、以组氨酸／组氨酸盐酸替代甘露醇，其浓度比为160／16(mmol／I。)，如此高浓度的缓冲对作为一种非渗透性成分，能明显抑制组织的酸化；3、加入右旋糖酐一40(DEX一40)。DEX一40对微循环有较好的作用，有利于再灌注，可增加保存效果：4、加入具有可清除氧自由基作用的川芎提取物一川芎嗪，它是川芎的有效成分之一，化学结构为四甲基吡嗪(TMP)，药理研究证明，其盐酸盐和碳酸盐均具有抗血小板聚集作用，并对已聚集的血小板有解聚作用，尚能扩张小动脉改善微循环和脑血流，产生抗血栓形式和溶血栓的作用。已有实验证明川芎嗪具有改善血液流变性的作用，能增进微循环，提高组织缺血缺氧的耐受力，进一步的研究表明川芎嗪能调节类前列腺素代谢，其作用类似于血栓素A2合成酶抑制剂，主要影响血栓素A2合成，而对其他花生四烯酸代谢产物无明显影响。川芎嗪还具有钙拮抗效应，能抑制离体细胞对钙离子的摄入，避免了细胞内钙超载引起的细胞损伤。 一种成功的器官保存液的组成应满足下列五个要求：(1)减少因低温保存导致的细胞水肿：(2)防止细胞的酸化作用；(3)防止灌洗保存过程中的细胞间隙膨胀；(4)防止或减轻再灌注损伤；(5)提供再生高能磷酸化合物的底物。从HC—A肾保存液的组成成分上看已满足了以上五个要求。为了验证该保存液的效果，我们进行了草犬肾脏的保存试验及保存后器官的移植试验。在保存实验中，我们分别进行了不同保存时间后的肾脏组织形态学的观察、能量物质的测定、生物化学的改变以及保存液PH值的测定。在移植试验中，我们进行了草犬肾脏的自体移植试验。通过以上试验说明，我们所研制的ItCA．II肾保存液可以明显防止因低温保存导致的细胞水肿及其酸化、防止或减轻组织器官的再灌注损伤并能够提供保存期间组织器官代谢所需的再生高能磷酸化合物的底物，移植试验中也取得了良好的移植存活率。所以说我们研制的}tCA．II肾保存液是一种成功的保第二军医大学硕士毕业论文存液，且因其成本低、易于储运、易于自行配制更加适合于我国的国情。
董秀哲[2]2011年在《自制多器官保存液对家兔肾低温保存的实验研究》文中提出研究背景：器官保存是移植的叁大技术之一,为了缓解器官短缺的矛盾和不断提高患者存活率,移植临床对器官保存技术提出了更高的要求。单纯静态低温保存仍然是最简单和常用的器官保存方法,单纯低温保存中常使用器官保存液包括HTK (Histidine-Ketoglutarate)、Cesiior液和UW (University of Wisconsin)液。其中UW液可以成功保存犬肾在72小时以上,保存肝脏在30小时左右,是器官保存液的金标准,但是其成分复杂、价格昂贵,配方存在两高问题：高钾、高粘滞度,而且使用中暴露出一些缺点,不能完全适应临床需要。国内目前大器官移植、多脏器联合移植迅速开展,但是迄今还没有成功研制出国产长效多器官保存液,无法满足日益增长的移植临床需要。实现多器官保存液的国产化是我国器官保存研究的重点,因此我们在吸收国内外器官保存液的优点的基础上,配制了AMU多器官保存液,并通过观察离体家兔肾低温保存期间皮质形态学情况,氧自由基损伤伤情况,以及间接测定保存期间肾皮质细胞的能量代谢,研究其对家兔肾脏的低温保存效果。实验目的：1.配制AMU多器官保存液,确定自制多器官保存液配方成分和含量。AMU以磷酸盐作为能力强大的缓冲系统,能够有效抑制低温缺氧环境条件下细胞和组织酸化。谷胱苷肽(还原型)、异搏定和MgCl2可以减轻低温缺血导致的线粒体功能损伤、抑制细胞内钙超载和氧自由基损伤,减轻缺血冷损伤,从而延长保存时间；以ATP-MgCl2的形式提供了外源性ATP,使其更易透过细胞膜,提高了多种脏器移植后的生存能力和移植前组织内的ATP含量,有助于低温保存期间维持细胞能量代谢；尿激酶通过抗栓和溶栓作用,保证保存器官的微循环。2.建立家兔离体肾脏单纯低温保存模型,在低温保存的各时间点,对光镜和电镜下的肾皮质细胞的肿胀、线粒体的肿胀、胞质空泡化,基底膜裸露、小管水肿、坏死等形态学指标进行描述性研究,比较不同保存液保存期间皮质显微结构和超微结构变化,特别是线粒体在低温保存中的损伤程度。3.检测低温保存中肾皮质匀浆脂质过氧化产物(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的改变,研究在低温保存的各时间点,组织细胞受自由基攻击的严重程度和不同保存液清除氧自由基的能力。4.能量代谢间接测定：在低温保存的各时间点,分离得到肾皮质线粒体,检测线粒体功能的改变,主要包括线粒体呼吸控制率(RCR)和磷氧比(ADP/O),借此反应保存期间呼吸链的整体活性和细胞氧化磷酸化生成ATP的效率。离体兔肾低温保存期间,检测肾皮质Na+-K+ATPase活力的改变。上述实验间接反映不同保存液低温保存肾脏能量代谢的保护作用,同时把低温缺氧损伤后不同保存液皮质线粒体的形态变化和功能变化联系起来研究。实验方法：1.AMU多器官保存液配制：AMU液仍然以磷酸盐为缓冲系统,以ATP-MgCl2的形式提供了外源性ATP,使其更易透过处于缺血、缺氧状态的细胞膜,且ATP-Cl2与腺苷对缺血再灌注肾脏的保护作用基本相同；去掉了UW液内极昂贵的羟乙基淀粉和较贵的棉食糖,用临床效果可靠而价格低廉的低分子右旋糖酐-60、蔗糖替代,能够降低灌注液的粘滞度,有利于各种脏器的原位灌注；添加了钙离子拮抗剂异博定,防止出现保存组织中钙超载和保持内环境的稳定;添加了分子量较大的抗血栓剂尿激酶,用尿激酶的抗栓和溶栓作用,以及低分子右旋糖酐-60的药理作用,保证保存器官的微循环；设计渗透压为343±5mOsm/L,pH值为7.4±0.1左右。配制完成后,500m1聚乙烯塑料包装。采用高温高压消毒。生产出的AMU保存液是澄清、无色、透明、无菌溶液。(该项工作由延边医院制剂室负责完成)。2.建立家兔离体肾脏单纯低温保存模型：按无菌手术原则进行术前准备,氯胺酮2mg/kg经耳静脉注射麻醉家兔。腹部正中切口,切除前给予肝素3mg/Kg,在髂血管分叉处上方约lcm处游离腹主动脉和下腔静脉,主动脉剪开一小口,向上置入灌注管,在置管下方结扎阻断腹主动脉；在肾动脉上方结扎向上的腹主动脉之后,开放灌注管分别以0-4℃AMU液和对照组保存液UW液或HCA液进行肾脏的灌注,灌注压100 cmH20,灌至肾脏变苍白；分别切除双肾,立即浸入冰生理盐水中降温,浸入无菌的相应0-4℃保存液中保存。在家兔肾保存的0、24、48、72、96小时切取肾皮质标本,按光镜或电镜标准制备标本,对光镜和电镜下的肾脏皮质细胞的水肿、胞质空泡化、肾小管坏死、线粒体水肿、嵴破坏等形态学指标进行描述性研究,比较不同保存液组肾皮质显微和超微结构变化,特别是线粒体在低温保存中的损伤程度。3.在兔肾保存的24、48、72小时切取肾皮质标本,肾皮质1%匀浆进行马斯亮兰法蛋白定量后,应用硫代巴比妥酸法(TBA法),根据公式测定皮质1%匀浆中MDA含量,应用黄嘌呤氧化酶法测定肾皮质1%匀浆,根据公式测定SOD酶的活性。4.检测肾皮质线粒体功能的改变,主要指标包括线粒体呼吸控制率和磷氧比。在家兔肾低温保存的各时点,取皮质标本(1.5g),匀浆器冰水浴中进行电动匀浆。应用低温高速离心机,差速离心法分离得到皮质线粒体悬液,双缩脲法测定其蛋白含量；平衡记录仪描记四态呼吸曲线(使用琥珀酸和ADP作为反应底物),并计算呼吸Ⅲ态、Ⅳ态耗氧速率、线粒体呼吸控制率和磷氧比,观察低温缺血对线粒体功能的损伤及AMU液组和HCA液组中线粒体整体功能和氧化磷酸化效率的变化及差异。5.在兔肾保存的24、48、72小时切取肾皮质标本,肾皮质制成2%的匀浆,进行考马斯兰法蛋白定量后,按试剂一：试剂二：试剂四：试剂六＝130：40：40：的比例配制混合液,酶促反应后定磷,根据公式计算Na+-K+ATPase活力。结果：1.光镜和电镜病理检查结果。发现AMU液组和UW液组病理改变在各个时病变程度无明显差异。光镜下两组保存24小时肾小球、肾小管结构基本完整,肾小管上皮细胞少量肿胀变性；48小时后肾小球结构基本正常,肾小管上皮细胞小灶状坏死和小管上皮细胞水肿较明显,上皮细胞核轻度固缩,刷状缘部分脱落,基底膜裸露,髓质部间质轻度水肿。72小时后上述病变进一步加重,肾小管上皮泛且严重的浑浊变性,部分细胞破碎、坏死。96小时后上述病变更加重,但AMU液组病变程度较UW液组为重。电镜所见,保存24小时,AMU液组、UW液组细胞核改变、线粒体肿胀相似。AMU液组和UW液组保存48小时核略变形,核质边聚,线粒体多数肿胀,嵴减少；72小时后细胞核变形、核质固缩,线粒体严重肿胀、破裂；96小时后AMU液组电镜下病变明显比UW液组重。以上说明AMU液保存72小时时形态学方面与UW液大体相当,保存96小时时AMU液组病变明显重于UW液组。2.低温保存期间,实验AMU液组和对照HCA液组肾皮质SOD活性均出现明显降低趋势。低温保存24小时,AMU液组SOD活性与HCA液组比较,无显着性差异(p>0.05),但保存48小时至72小时后,SOD活性明显高于HCA液组,有显着性差异(p<0.05)；随着低温保存时间的延长,AMU组和HCA组肾皮质MDA含量逐渐增加。AMU液组肾皮质MDA含量在各时间点显着高于HCA液组,具有明显差异(p<0.05)。以上说明在减轻氧自由基损伤方面优于HCA液。3.线粒体活性改变。随着低温保存时间的延长,AMU液组和HCA液组肾皮质线粒体呼吸Ⅲ态耗氧速率和线粒体呼吸控制率、磷氧比下降。除24小时外,其余时点AMU液组肾皮质线粒体呼吸Ⅲ态耗氧速率均高于HCA液组,两组间差异明显(p<0.05)；低温保存期间AMU液组和HCA液组的Ⅳ态耗氧速率均有轻度的升高,多数时点AMU液组和HCA液组间无明显差异(p>0.05)；但保存72小时后,AMU液组显着高于HCA液组(p<0.01)；低温保存的各时点ADP/O2,保存24小时,AMU液组和HCA液组无显着性差异(p>0.05),48小时后,AMU液组明显高于HCA液组,存在显着性差异(p<0.05)。以上说明AMU保存液在保持线粒体整体功能和氧化磷酸化生成ATP的效率显着高于HCA保存液。4.随着低温保存时间的延长,AMU液组和HCA液组肾组织Na+-K+ATPase活性逐渐下降。保存24小时和48小时,AMU液组与HCA液组无明显差异(p>0.05)；保存72小时,AMU液组Na+-K+ATPase活性明显高于HCA液组,存在明显差异(p<0.05)。以上说明AMU保存液在减缓Na+-K+ATPase活性下降方面显着优于HCA保存液。结论：AMU液保存的家兔肾在保存至72小时为止,皮质形态学改变方面与UW保存液相似,两组间无明显差异；保存96小时时,AMU保存液病变程度较UW保存液为重；在氧自由基损伤、能量代谢方面,大部分指标AMU液组均比HCA液组好,两组间存在明显差异。家兔离体肾脏单纯低温保存的病理和生化功能的研究结果提示,AMU液对肾脏皮质低温缺血损伤的保护效果比HCA液好,而与UW液的对肾脏皮质保护效果相似,AMU液并不亚于UW液。而且AMU液配方中去掉了UW液中极昂贵的羟乙基淀粉和较贵的棉食糖,代之以临床效果可靠而价格低廉的低分子右旋糖酐-60和蔗糖,大部分为国产原料,必然大大降低生产成本及价格。AMU液改进了UW液的高钾、高粘滞度的缺点；且配方简单,使用方便,因此更具有临床应用前景。
罗明[3]2007年在《自制多器官保存液的实验研究》文中认为目的研制具有自主知识产权的多器官保存液并验证其保存效果。方法在既往长征医院器官保存液研制的基础上研制出SMO多器官保存液。通过SMO液对小型猪肾脏低温保存过程中形态学改变和代谢研究评价其对肾脏保存效果;用SMO液低温保存小型猪肝脏12小时后原位肝移植评价其对肝脏保存效果。结果SMO液在短时间内低温保存肾脏效果与HCA-II液相同,对肾脏长时间低温保存的效果则好于HCA-II液。SMO液能够维持肝脏组织完整的功能形态,有效保护肝脏微循环,减轻低温保存损伤和再灌注损伤,保证了供肝具有良好活力。结论SMO多器官保存液缓冲能力强大,能量底物充足,既维持溶液的高渗特性又避免了粘滞度过高,保持中等浓度的钾离子和钠离子减轻了细胞水肿和高钾的危害,同时加入了中药的有效活性成分,具有鲜明的中国特色。
周智华[4]2006年在《器官保存液的实验研究》文中进行了进一步梳理HCA-Ⅱ保存液是在HC-A保存液配方基础上进行全面改进，按照保存液组成的要素，添加了磷酸盐缓冲系统、细胞膜保护剂和抗氧化能力的川芎嗪，提高了能量底物的含量和渗透压；SMO多器官保存液以木糖醇作为大分子物质和提供能量的底物，拥有独特的缓冲系统、细胞膜稳定剂，增加了氧自由基清除剂川芎嗪，并且在使用前不需添加任何辅助成分。本实验中我们通过HCA-Ⅱ液与HC-A液、UW液对比，进行形态学、生物化学方面以及肾脏移植动物实验方面的研究，为临床应用提供实验依据；SMO液与HTK液、UW液对比，对大鼠肝脏低温保存期间，通过观察光镜、电镜形态改变、细胞凋亡发生、线粒体结构和功能改变、超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量，以及细胞能量代谢的改变，初步研究SMO液对离体肝脏单纯低温保存的效果。
刘东明[5]2010年在《AMU多器官保存液对兔肾脏低温保存生化学能量指标的实验研究》文中研究说明目的通过与HC-A肾脏保存液进行比较,研究我院自制AMU多器官保存液对兔肾低温保存期间生化能量指标的影响。方法建立兔离体肾脏单纯低温保存模型,通过与HC-A肾脏保存液进行比较,对照组用0-4℃HC-A保存液对供肾进行单纯灌注和保存,试验组用0-4℃自制AMU保存液对供肾进行单纯灌注和保存,分别于24,48,72h后进行下述指标检测。1,肾皮质线粒体呼吸控制率(RCR)的定量检测,通过极普法检测系统进行检测。2,肾皮质Na+-K+-ATPase活性的检测,应用生化比色法进行检测。3,肾皮质线粒体中钙离子的含量,应用生化甲基百里香酚蓝比色法进行检测。结果1,线粒体呼吸控制率(RCR)的变化：AMU液组和HC-A液组均出现降低趋势,两组液体单纯低温保存兔肾脏24h,RCR差异无显着性,保存48,72hAMU液组均明显高于HC-A液组(P<0.05).2, Na+-K+ATPase活活性：AMU液组和HC-A液组肾皮质Na+-K+ATPase活性均出现降低趋势,保存24h和48h,Na+-K+-ATPase活性,AMU液组和HC-A液组无明显差异(P>0.05)：保存72h, AMU液组Na+-K+ATPase活性明显高于HC-A液组,存在明显差异(P<0.05),。3,线粒体中Ca2+含量：AMU液组和HC-A液组均出现增高趋势两组液体单纯低温保存兔肾脏24h,线粒体中钙的含量差异无显着性,保存48,72hAMU液组均明显低于HC-A液组(P<0.05)。结论1,AMU液对保存兔肾皮质线粒体完整性和氧化磷酸化偶联程度优于HC-A液。2,AMU液对保存兔肾皮质Na+-K+-ATPase活性及肾脏供能方面优于HC-A液。3,AMU液对保存兔肾皮质线粒体钙酶活性的提高防止钙超载方面优于HC-A液。4,AMU液对兔肾脏低温保存肾皮质细胞能量代谢方面的保护效果比HC-A液好,具有临床开发应用前景。
谢娟华[6]2013年在《不同保存液对供肾抗氧化能力及病理超微结构的影响》文中指出目的：本课题采用乳化氟碳液(Perfluorocarbon Emulsions, PFCE)、高渗枸橼酸盐腺嘌呤液(hypertonic citrate adenine solution, HCA)及二者混合液（HCA/PFCE）对大鼠离体肾脏进行氧化损伤和细胞凋亡及病理形态超微结构的比较研究，以评价叁组保存液对离体肾脏的保存效果，从而为临床寻找一种安全有效的供肾保存方法。方法：选择72只雄性SD大鼠随机将分为6组，每组12只。各组分别采用对应HCA液、HCA/PFCE液、PFCE液原位灌洗双侧肾脏后快速切取，离体置于0-4℃20ml上述相应液体中分别保存24h、48h后，取肾皮质检测MDA含量、SOD活性和Bcl-2的表达，同时取肾皮质制成光镜和透射电镜标本观察肾的形态及超微结构变化。结果：（1）叁组保存液肾皮质的MDA、SOD活性与时间无关(P>0.05)；（2）叁组保存液组间的MDA、SOD、Bcl-2和病理积分比较有统计学差异(P<0.05)；（3）叁组保存液24小时Bcl-2和病理积分与48小时相比有统计学差异（P<0.05）；（4）叁组保存液间电镜下超微结构的肾小管上皮细胞损伤程度比较，HCA/PFCE组和PFCE组均轻于HCA组，而HCA/PFCE组稍轻于PFCE组；叁组保存液24小时的肾小管上皮细胞损伤轻于48小时。结论：PFCE液对减轻供体肾脏的氧化损伤和细胞凋亡优于HCA/PFCE液，故PFCE液对供体肾脏保存效果较好。
朱楠[7]2007年在《SMO液对猪肝胆道保存效果的实验研究》文中认为目的验证国内自制的SMO多器官保存液对猪肝胆道的保存效果。方法本实验在长征医院SMO多器官保存液系列研究的基础上,以肝脏移植动物模型和肝脏单纯低温保存为实验平台,通过观察胆道上皮细胞的形态学改变、细胞凋亡指数以及胆汁、血清生化方面的变化,探讨和评估SMO多器官保存液对猪肝胆道的保存效果。结果形态学变化提示,NS组保存效果略差于保存液组(UW液、SMO液)。光、电镜观察各时点SMO组比NS组损伤轻,与UW基本一致;随着保存时间的延长,叁组凋亡指数均上升,各组间无明显变化(p>0.05),保存16hr后,SMO组凋亡指数明显低于NS组(p<0.05);与UW液无明显区别(p>0.05)。结论SMO液对猪肝胆道低温的保存效果总体上与UW液相当,优于NS,而在防止细胞水肿方面较UW液稍差。SMO液的胆道冲洗效果明显优于UW液。SMO液作为胆道冲洗液是有效的、可行的。
戴晨[8]2012年在《人工虫草复合液对无心跳大鼠离体肾保护效应及机制研究》文中研究指明目的：探讨人工虫草复合液对无心跳大鼠离体肾的保护效应及机制。方法：将无心跳大鼠离体肾随机分为人工虫草复合液组（CS n=30）、高渗枸橼酸盐腺嘌呤液组（HC-An=30）、生理盐水组（NS n=18）。观察灌注后保存6h、12h、24h后肾组织病理改变、细胞凋亡指数（AI）、肾组织超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量、Bcl-2/Bax、Caspase-3蛋白表达。结果：1）离体灌注6小时，CS组肾组织损伤程度轻于HC-A组，AI低于HC-A组（9.72±1.63vs19.50±1.95；P＜0.05, P＜0.05）。离体灌注12小时，CS组肾组织损伤程度明显轻于HC-A组，AI低于HC-A组（14.04±1.14vs24.25±2.79；P＜0.05, P＜0.05）。离体灌注24小时，叁组间肾组织损伤程度无显着性差异。（P=0.07）；2）离体灌注6小时和12小时，CS组SOD活力高于HC-A组（148.88±11.69vs91.27±7.65；113.18±8.74vs76.10±4.98），两组间有显着差异（F=165.47P=0.001；F=179.04P=0.001）；CS组MDA含量低于HC-A组（2.73±0.45vs4.66±0.40；3.27±0.35vs5.50±0.36），两组间有显着差异（F=142.41P=0.001；F=356.38P=0.001）；3）离体灌注6小时和12小时，CS组肾组织Bcl-2/Bax表达高于HC-A组（3.69±0.64vs2.15±0.18；2.08±0.26vs1.28±0.16），两组间有显着差异（F=72.40P=0.001；F=87.80P=0.001）； CS组Caspase-3表达低于HC-A组（10167.96±2150.19vs16499.65±2154.3；14307.06±1406.73vs22653.98±1033.68），两组有显着差异（F=60.94P=0.001；F=82.81P=0.001）。结论：人工虫草复合液对无心跳大鼠离体肾具有保护效应，且12小时内的保护效应优于HC-A液；其作用机制由人工虫草抗氧化作用介导，减少细胞凋亡发挥保护效应。
张建军[9]2004年在《改良供体肝肾联合切取法的建立及他克莫司在器官保存中的作用》文中研究说明器官移植是拯救终末期器官疾患的最有效或唯一有效的治疗手段。进入21世纪以来，医学科学的发展速度大大加快，作为医学之巅的器官移植更是迎来了一个蓬勃发展的新时期。到目前为止，我国器官移植医学出现过两次高潮。上世纪70年代末80年代初，由于免疫抑制治疗的突破性进展带来了移植物近期存活率的大幅度提高，从而掀起了以肾移植为代表的第一次器官移植高潮。随着近年来基础医学、药学、临床技术水平以及国家整体经济水平的长足发展，随着手术技术、免疫抑制治疗措施以及整体医学水平的进一步提高和完善，近两年来以肝移植大规模开展为标志的第二次器官移植高潮已经到来。作为现代医学的集合成果，器官移植水平已成为衡量一个医院乃至一个地区整体医学实力的重要标志，也有着越来越广阔的发展前景和治疗需求。 供器官获取是器官移植的第一步，也是最关键的一步，没有良好的供器官，器官移植根本不可能成功，因此供体质量越来越成为移植界关注的焦点。本研究本着方便实用、安全高效的原则，从供器官获取的手术方式和器官保存液改良两个不同的角度，探讨在现有技术条件下提高供器官质量的有效途径。 一、改良供体肝肾联合切取方法的建立和体会我们在借鉴国内外的肝脏获取方法的基础上，率先在国内建立了快速供肝获取法，之后从提高效率和质量、降低人力资源的耗费以及提高器官获取的安全性出发又改进建立了改良供体肝肾联合切取方法。 改良供体肝肾联合切取方法的主要改进有：1、在胰头下缘显露肠系膜上静脉或在胰颈部剪开胰腺实质暴露肠系膜上静脉及脾静脉，在与脾静脉汇合处下方肠系膜上静脉向上插入门静脉灌注管，此法明显缩短了门静脉插管时间，并可避免右肝动脉变异或肠系膜上动脉变异发出右肝或肝固有动脉时造成动脉损伤：2、门静脉灌注先采用4℃的HCA液1000ml灌注，继之以UW液2000ml，此法纠正了由于UW液过于粘稠，第二军医大学博士论文改良肝肾联合切取&他克莫司在器官保存中的作用流速慢，而使肝脏外周部分在短时间内难以达到快速降温的缺点;3、动脉灌注采用日以液2000ml灌注，继以1000叫UW液，此法保证动脉系统快速降温，同时又在保存运输过程中使动脉系统充盈UW液，有利于降低术后长期胆道并发症:4、常规应用4℃平衡液或日CA经胆囊切口冲洗胆道，以冲出胆道中的胆汁和胆泥，防止其对胆道粘膜的溶解和破坏。最后应用UW液经胆总管断端逆行灌注胆道，防止冷保存过程中残留胆汁对胆道内皮的直接损伤作用，也有利于降低术后长期胆道并发症。 同时我们还结合临床取肝经验，自制了灌注管道，并在临床广泛应用。其优点包括:1、管道口径大，流速快;2、插口与UW液和H以液外包装配套，方便连接;3、动脉插管的气囊导管使阻断腹主动脉上端简单又可靠;4、门静脉插管前有胶皮拌，不易脱落;5、工厂化生产，易于携带，方便使用。 肝肾分离技术的改进包括:1、从背面剪开腹主动膜，直视左、右肾动脉，肠系膜上动脉及腹腔干，在左右肾动脉以上分离动脉，完全避免损伤肾动脉;2、在直视下显露肝下下腔静脉，在左肾静脉上缘横断腔静脉，有效地避免了下腔静脉和肾静脉的损伤。 实践证明，与快速供肝获取法比较，改良供体肝肾联合切取方法能够明显缩短供体器官的切取时间，而且没有降低供器官的质量，手术后患者各项肝肾功能参数均没有产生显着差异。改良供体肝肾联合切取法不但能够保证供体的质量，也可以提高移植器官的利用率，能有效地减少原发性移植器官功能衰竭或功能延迟恢复。改良供体肝肾联合切取具有简便、实用的特点，易于掌握，能更好、更快地推进器官移植事业的发展。 二、他克莫司(「K506)对供肝的保护作用及临床肝移植疗效观察 近年来的研究证明他克莫司通过多种机制抑制炎症反应，减轻缺血再灌注损伤。我们于2003年10一12月期间，随机选取16名病员作为试验组，在试验组病员肝脏保存液中添加他克莫司并使其终浓度为20nglml。另外18名病员作为对照组，在取得所有患者知情同意的基础上，实施了临床研究。 试验结果表明他克莫司作为器官保存液添加剂提高了肝移植的临床疗效。肝移植术后早期试验组病员总胆红素、丙氨酸转氨酶等肝功能指标改善的速度明显比对照组更快，部分数据有统计学差异。 肝组织标本分别保存12h、36h和72h后进行的生化检测表明，他克莫司能够改善第二军医大学博士论文改良肝肾联合切取&他克莫司在器官保存中的作用细胞代谢，降低缺血损伤。尤其是长时间保存后(72h)，试验组肝细胞的线粒体呼吸控制率、Na+一K十.ATp酶活力、线粒体Caz十含量、组织ATp含量、组织含水量等测定结果明显优于对照组，结果数据间有统计学差异。 肝移植手术中以蛋白水经门静脉灌洗时，由下腔静脉收集最初的流出液ZOml。我们采用双抗体夹心EUSA法检测了其中主要的炎症性细胞因子在灌洗流出液中的浓度。结果发现肿瘤坏死因子一。(下NF一。)和白介素一l(I L-1)在两组供肝灌洗流出液中的浓度有统计学差异，提示他克莫司有助于降低低温保存过程中组织细胞产生前炎症细胞因子。 肝组织标本分别保?
参考文献：
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[4]. 器官保存液的实验研究[D]. 周智华. 第二军医大学. 2006
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[6]. 不同保存液对供肾抗氧化能力及病理超微结构的影响[D]. 谢娟华. 暨南大学. 2013
[7]. SMO液对猪肝胆道保存效果的实验研究[D]. 朱楠. 第二军医大学. 2007
[8]. 人工虫草复合液对无心跳大鼠离体肾保护效应及机制研究[D]. 戴晨. 新疆医科大学. 2012
[9]. 改良供体肝肾联合切取法的建立及他克莫司在器官保存中的作用[D]. 张建军. 第二军医大学. 2004