(黔南州检验检测院 贵州都匀 558000)
摘 要：关于肉制品的防腐剂检测没有明确的处理和检测方法，按照国标GB/T5009.29的要求第一法气相色谱法和第二法液相色谱法进行检测。气相色谱法前处理涉及有机溶剂的重复萃取，操作时间较长，比较麻烦，液相色谱法也没有明确肉制品的前处理方法。本文结合液相色谱法中的试样处理中的方法，对肉制品防腐剂的检测，采用了样品粉碎后90度水浴30分钟的方法，定容过滤后直接进样，缩短了检测的时间，提高了工作的效率，适合大批量处理样品。
关键词：高效液相色谱法测定 肉制品 防腐剂
在食品工业中，一般说来，在正常规定的使用范围内使用防腐剂对人体没有毒害或毒性极小。因此，食品防腐剂的定性与定量的检测在食品安全性方面是非常重要的。 山梨酸对霉菌、酵母菌、好气性细菌的生长发育具有良好的抑制作用。苯甲酸是一种广谱抗微生物试剂，对酵母菌、霉菌、部分细菌作用效果很好，在允许最大使用范酸的测定对肉制品中的苯甲酸、山梨酸前处理未作规定，由于脂肪、蛋白质含量较高，检测时按常规方法处理，不易提取完全，影响检测结果的准确性，同时，样品过滤也有一定的困难。本研究通过摸索，加沉淀剂调节PH值，建立一种简便快捷高效液相色谱法测定肉制品中苯甲酸、山梨酸的方法。
1仪器与试剂
1.1主要仪器
Waters公司2695e型 2998紫外检测器，Empower色谱数据处理围内，pH4.5 以下，对各种菌都有效 目前，测定山梨酸和苯甲酸的方法主要有：薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相色谱法等。随着越来越多的食品工业、药物配方和化妆品里混合使用防腐剂，我国对苯甲酸、山梨酸在食品中的用量做了严格规定，然而市场上常见检测出苯甲酸和山梨酸偶尔超标的肉制品。目前GB/T 5009.29 食品中苯甲酸、山梨系统，B-220型恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)，Waters公司C18柱。
1.2试剂
乙酸锌溶液（219g/L）；亚铁氰化钾溶液（106g/L）；0.02mol/L乙酸铵溶液；甲醇:色谱纯；苯甲酸和山梨酸标准储备液:1.00mg/ml(国家标准物质研究中心)。
1.3仪器条件
流动相:甲醇+0.02mol/L乙酸铵溶液=5+95；流速:1.0 ml/mim；色谱柱: Waters C18(250×4.6mm,5micron)进样量:10μl；检测波长:230nm；柱温:30°C。
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1.4方法
(1)样品的测定与标准曲线的绘制：分别提取山梨酸和苯甲酸标准储备液进行配置，得出0.0，0.01，0.02，0.04，0.06，0.08μg/ml标准浓度曲线系列，以上仪器的操作下，取10μl定量标准以及用液相色谱对样品溶液进行分析。以标准的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制出一个完整的液体测定曲线图，对所测定的样品结果通过峰面积的工作曲线可以算出。
1.5样品处理
对样品的称量要达到精确到小数点后第四位，称取5g左右混匀的样品放置在100ml的具塞试管中，加20 ml水，再加入乙酸锌溶液（219g/L）和亚铁氰化钾溶液（106g/L）各5.0ml，混匀后用0.1mol/L的氯化氢溶液调节到pH≈7，加水定容至刻度，盖上盖子上下摇动30余次，然后放置20min后，用快速滤纸过滤，所得的样液，用0.50μm滤膜进行过滤，再注入进样瓶中，等待检测。
2分析
2.1加沉淀剂的意义
对称取样品直接稀释定容后进样，样液比较浑浊，发现出峰时间虽然与标液出峰时间吻合，但因肉制品中含有大量的油脂和蛋白质，所出峰的峰型不好，杂峰较多，有些小峰会叠加进苯甲酸和山梨酸，严重时会出现岔峰，无法识别，也给计算带来了麻烦。也影响的柱子的寿命。而加入沉淀剂后的所得的样液比较清亮，杂峰干扰较少，峰型较好，不仅容易识别，也好计算。
2.2为什么调PH值
所测定的样品中和加入的试剂都呈弱酸性，按照1.5中样品处理后所得的样液，用精密PH试纸测量值大概在5.0-6.0之间，对不调PH值和调PH值至7.0的样液分别进样后发现出峰时间会有一些差异，调PH值的样液出峰时间与标样出峰时间完全吻合，但不调PH值的样液出峰提前了0.2分钟，用标液建的处理方法无法识别，所以调PH值目的就是为了出峰保留时间容易变动从而统一以保持被测物质的重现性.
2.3方法的线性范围及检出限量
本实验的线性范围苯甲酸0~200μg/ml,r=0.999 96,回归方程Y=17 000X+7 514;山梨酸0~300μg/ml，r=0.999 97，回归方程Y=29 442X+9 204。取置信因子P=0.96，仪器噪声电平的2倍为检出限，则山梨酸、苯甲酸标准溶液的最低检出浓度为0.12和0.08μg/ml。
2.4方法的精密度和准确度
对含山梨酸和苯甲酸的样品用本方法平行测定各6次。结果发现，山梨酸平均含量130mg/kg,相对标准偏差(RSD)3.4%；苯甲酸平均含量120 mg/kg，标准偏差(RSD)2.9%。在样品中加入不同标准浓度的2种溶液，测得山梨酸的回收率在96.6%~104.5%之间，苯甲酸的回收率在95.5%~102.5%之间，说明本方法准确度与精密度均较高,结果可靠。
试验结果表明,本方法的精密度和准确度较高,线性范围宽,比气相色谱检测法样品处理更简单、快速,试剂消耗少,从而减少杂质的引入,降低了空白值,提高结果的准确性,为油浸食品中的防腐剂检测提供更完善、可靠的手段。
参考文献
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论文作者:周健,王兴章,朱昌源,冷炯,孙金萍
论文发表刊物:《科学与技术》2019年第03期
论文发表时间:2019/6/21
标签：山梨论文; 苯甲酸论文; 样品论文; 色谱论文; 溶液论文; 肉制品论文; 防腐剂论文; 《科学与技术》2019年第03期论文;