叶莉芬[1]2003年在《脑室内注射胰岛素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡的影响》文中研究指明前言 新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic—ischemic encephalopathy，HIE)是由于围生期缺氧和脑血流减少或暂停而引起的新生儿中枢神经系统病变。它是导致儿童神经系统残疾的重要因素之一，目前发病机制尚未完全阐明，缺乏特异性治疗手段。凋亡作为神经元的主要死亡方式之一在HIE的迟发性损伤中占有重要地位，因此抗凋亡治疗可能成为临床治疗HIE的重要手段。胰岛素(insulin，IN)对成年大鼠局灶和全脑缺血性脑损伤均具有保护作用，最近又发现它能通过磷脂酰肌醇-3(PI-3)途径减轻培养神经元凋亡。我们给HIE新生大鼠脑室内注入胰岛素，观察其对神经元凋亡的影响并探讨其可能的抗凋亡机制。 方法 第一部分：胰岛素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡影响的病理观察 参照Rice法建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。14只HIE大鼠随机分为胰岛素干预组和对照组。模型制成后2小时干预组侧脑室注入小剂量胰岛素(1.0IU／kg)，对照组脑室内注入等体积磷酸盐缓冲液(PBS)。缺氧缺血后24小 — —％————M—— 时，HE染色和透射电镜观察各大脑皮层和海马部位神经细胞凋亡情况。侧脑室 注射后卯分钟断尾取血 100 VI左右，用微量血糖测定仪测血糖。 第二部分：不同剂量胰岛素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡的影响 参照Roe法建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。32只HIE大鼠随机分为 小剂量胰岛素组、中剂量胰岛素组、大剂量胰岛素组和对照组。模型制成后2 小时仅脑室内分另注入刁剂量门刀IU／k）、中齐量（25fo71’g）、大齐量（5刀n川唱） 叁种剂量的胰岛素和等体积PBS。缺氧缺血后24小时处死动物，取损伤侧脑组 织制成石蜡块，采用TUN’EL法检测凋亡，比较各组皮质和海马部位神经细胞凋 亡情况，深入探讨胰岛素在HIE中的抗凋亡作用。侧脑室注射后90分钟断尾取 血 100 pl左右，用微量血糖测定仪测血糖。 第叁部分：不同剂量胰岛素对Hill大鼠脑组织Caspase—3的影响 参照uce法建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。24只HIE大鼠随机分为 小剂量胰岛素组、中剂量胰岛素组、大剂量胰岛素组和对照组。模型制成后2 小时仅脑室内分另注入刁剂量门刀IU／k）、中齐量（2．seq）、大齐量（5刀n川唱） 叁种剂量的胰岛素和等体积PBS。缺氧缺血后24小时处死动物，取损伤侧新鲜 脑组织，采用 Western一blot法检测各组脑组织 Caspase—3 P20亚单位表达情况， 研究胰岛素可能的抗凋亡机制。 结 果 1．脑室内注入PBS的新生大鼠脑组织切片HE染色光镜下在皮质、海马、纹状 体部位可见较多典型凋亡细胞和凋亡小体，而脑室内注入小剂量胰岛素的大鼠脑 组织凋亡细胞和凋亡小体稀疏分布。 2．TUN’EL染色并计数凋亡细胞结果：皮质部位：小剂量胰岛素组凋亡细胞（56， 25）显着少于对照组（12．50，74）（P＝＝0刀of）；中剂量胰岛素组凋亡细胞（39， 48）显着少于对照组u二0刀of）；大剂量胰岛素组凋亡细胞（274，259）显着 多于对照组（P—0刀09）；中剂量胰岛素组凋亡细胞显着少于小剂量胰岛素组u ＝＝0007）。海马部位：小剂量胰岛素组凋亡细胞（l，13）显着少于对照组（30， 13）（尸＝口刀02）；中剂量胰岛素组凋亡细胞（13，吕）显着少于对照组（P＝＝0．001）； 3 — ———————————M大剂量胰岛素组凋亡细胞k．50，15）显着多于对照组（尸一0刀of入 中剂量胰岛素组凋亡细胞显着少于小剂量胰岛素组（尸＝0刀08人3．血糖检测结果：小剂量胰岛素组血糖水平（5．54士0．3 Inunol儿）与对照组（5．56土0．27。of／L）无显着差别（P＝0．934）；中剂量胰岛素组血糖水平（4．80土0．62nunol／L）显着低于对照组（P＝0刀02）；大剂量胰岛素组血糖水平（190土0．听no几）显着低于对照组（P＝0刀co）。4．C8spssc一3检狈结果：各组 C8spssC 一3 p20亚单位＊值比较：大齐量胰岛素组o值（7．680，11．6100）与对照组（8．4750，7．7700）相比，无显着差别（P＝＝l刀）；中剂量胰岛素 ID值门刀1，2．5775）显着低于对照组（P＝＝0刀06）；小剂量胰岛素组o值（2275，3．2475）显着低于对照组（P＝＝0刀16）；中剂
张瑛[2]2003年在《胰岛素样生长因子-1对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡及Caspase-3表达的影响》文中研究指明围产期窒息所致的缺氧缺血性脑病(Hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE)是导致新生儿死亡的常见原因，存活者常遗留严重的后遗症。HIE后神经元的死亡发生于两个不同的阶段：第一阶段为原发性神经元死亡，在窒息后早期发生，是由于缺氧缺血导致的细胞溶解坏死；第二个阶段为迟发性神经元死亡，发生在几小时之后。现在认为迟发性神经元死亡即为凋亡。因此，进一步对HIE后的凋亡进行研究，探讨HIE后凋亡的防治问题很有必要。 胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1, IGF-1)是神经营养因子中的一种，具有非选择性的神经营养作用。研究表明，IGF-1能减轻多种病理变化下神经元的凋亡。但IGF-1对新生动物缺氧缺血后神经元凋亡的影响及其剂量—效应关系目前报道较少。本课题在建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)模型后以不同剂量IGF-1侧脑室用药，观察其对神经元凋亡的作用，并且通过检测不同组之间大脑组织的死亡蛋白酶caspase-3活性亚单位P20表达的变化，对IGF-1的抗凋亡机制进行研究。 材料与方法 1．HIBD动物模型：取新生7d龄SD大鼠，体重12～14g，结扎左颈总动脉后放入低氧舱(含8％氧气)中2h。 2003年浙江大学硕士研究主毕业论文 2．实验分组及干预方法：HIBD后Zh将新生大鼠按体重编号，对照随机数字表分为 叁组：干预 1组、干预 2组和对照组。分别在其左侧侧脑室内注射 in g、5 n g的 IGFI 及等体积的PBS。注射部位为人字缝尖向嘴侧2刀mm，左侧1．smm，垂直2刀nun。 3．细胞凋亡及caspase－3表达的检狈 O）透射电镜法：HIBD后 24h处死动物，取缺血侧大脑皮层和海马新鲜组织各 lmm3 左右的标本。标本处理后通过 TECNAI型透射电镜观察正常、凋亡以及坏死神经元的形 态。 p）TUNEL法：HIBD后 24h处死动物，取缺血侧脑组织制成石蜡切片后用 TUNEL 法检测凋亡细胞。采用NBT显色，细胞核染成蓝黑色为TUNEL阳性细胞。在400倍光镜 下计数 TU’NEL阳性细胞数。每样本取 15个视野以上，大脑皮层计数 3000个，海马计数 1000个。 o）Western blot法：HIBD后 24h，取缺血侧大脑组织经裂解及蛋白浓度测定后上0℃ 保存。实验时每样本取 80 u g蛋白质，经 SDS－PAGE电泳及电转移后，分别加入羊抗 caspase习多克隆抗体及抗羊IgG。使用ECL显影。胶片扫描后采用NIH图象处理软件半 定量分析光密度。 4．统计学处理：采用 SPSS 10刀统计软件包非参数检验，叁组间比较用 Kluskal－Wallis 法，两两比较用Mann－Whitney法。结 果 1．电镜结果 PBS对照组的缺血侧大脑皮层和海马内可见较多具有明显凋亡特征的细胞及部分坏死细胞。两个IGF．l用药组的凋亡细胞相对较少。 2．不同剂量IGF－l对大脑皮层和海马神经元TU’NEL阳性细胞数的影响 在大脑皮层，计数3000个细胞，对照组、干预1组和干预2组的TUNEL阳性细胞数 的中位数（四分位数间距）分别为：114．0（59．5）、44．5（28．8）和36．5（21．6）。在海马， 计数 1000个细胞，对照组、干预 1组和干预 2组的 TUNEL阳性细胞数的中位数（四分位 数间距）分别为：29．0（23．2）、8．5（7．5）和 ZI．0（17．4）。两个mF－l干预组大脑皮层和 海马神经元的TUNEL阳性细胞数均明显少于缺氧缺血后注射PBS的对照组，差别有显着 2 2003年浙江大学硕士研究生毕业论文性意义（尸＜0刀5人在海马，干预 1组即 illg IGFI组的 TUNEL阳性细胞数明显少于干预2组即 5卜 g IGFI组，差另有显着性意义（尸＜0刀5）。 3．不同剂量 IGFI对大脑 caspasel P20亚单位表达的影响 叁组间 caspase习 P20亚单位的表达不尽相同。对照组、干预 1组和干预2组caspaselP20亚单位的光密度的中位数（四分位数间距）分别为 108．9（198．4）、5．1（12．4）和 27．5 （41．1）。干预 1组 P20亚单位的光密度明显低于干预 2组和对照组，差别有显着性意义（尸＜0刀5）。结 论 1．IGFI对新生大鼠HIBD后神经元的凋亡有一定的保护作用，是一种较好的神经营救因子； 2．IGFq的抗凋亡作用与caspase刁活性亚单位P20的下降紧密相关； 3．IGFI的神经元保护作用与剂量有一定的关系，in g IGFI比 5 u g IGFI效果更佳。
叶莉芬, 俞惠民, 汤宏峰[3]2003年在《脑室内注射胰岛素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡的影响》文中提出目的 探讨胰岛素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIE)神经细胞凋亡的影响。方法 建立新生大鼠HIE模型 ,缺氧缺血后2h治疗组侧脑室注入胰岛素1IU/kg,对照组注入磷酸盐缓冲液5μl。缺氧缺血后3.5h监测血糖。缺氧缺血后24h利用透射电镜及末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记法检测大脑皮层和海马两部位的神经细胞凋亡情况和采用免疫印迹法检测脑组织半胱天冬酶 -3(Caspase-3)P20亚单位表达。 结果 透射电镜下 ,对照组大脑皮层和海马部位易观察到凋亡神经细胞 ,治疗组则很少观察到凋亡神经细胞。治疗组皮层部位和海马部位的凋亡细胞明显低于对照组 (t=6.940和5.855,均P<0.01)。治疗组血糖水平与对照组差别无显着性意义(t=0.733,P>0.05)。治疗组Caspase -3P20亚单位ID值明显低于对照组 (w=24.00,P<0.05)。结论胰岛素具有减少HIE新生大鼠神经细胞凋亡的作用 ,其抗凋亡作用可能通过抑制Caspase-3的活化来实现。
杨俊梅[4]2005年在《胰岛素样生长因子-1在缺氧缺血性脑损伤后的变化及对神经生成的影响》文中研究表明胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor 1,IGF-1),是胰岛素样生长因子系统的重要成员之一。胰岛素样生长因子调节机体许多细胞葡萄糖的利用,是一种与机体组织增殖、分化和成熟有关的重要生长因子。IGF-1系大脑发育所必须,且在脑缺血(/再灌注)等多种病理状态下对机体发挥重要保护作用。它是一种多肽类激素,已证明对前体细胞增殖有促进作用。神经干细胞(Neural stem cell,NSC)通常被认为是一组具有自我更新和多分化潜能的克隆细胞群。在缺氧缺血性脑损伤后,IGF-1在血液中发生改变,并且局部应用IGF-1能够刺激NSC的增殖、迁移和分化,本研究通过两部分来阐述之,为脑缺氧缺血的保护提供新的思路。 第一部分 新生儿缺氧缺血性脑病血液中血糖、胰岛素、胰岛素样生长因子-1水平变化的研究 新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy,HIE)是新生儿窒息后的严重并发症,病情重,病死率高,并可产生永久性神经功能障碍。近年的研究发现,胰岛素、胰岛素样生长因子-1在中枢神经系统中起重要作用,并与HIE病理过程密切相关。在动物实验中发现IGF-1在缺氧缺血性脑损伤时对神经元有保护作用,并参与了脑损伤后神经元的修复过程。本试验旨在阐明HIE患儿急性期与恢复期血液中Glu、Ins、IGF-1的改变、叁者之间的关系以及缺氧缺血脑损伤后Ins、IGF-1对神经元的保护作用。
宋名杨[5]2016年在《丰富环境对HIBD新生大鼠海马CA1区BDNF及细胞凋亡的影响》文中研究指明目的：观察丰富环境对HIBD新生大鼠海马CA1区BDNF及细胞凋亡的影响,探讨丰富环境治疗HIBD的相关机制。方法：采用随机数字表法将7日龄Sprague-Dawley清洁级新生大鼠分为假手术组、模型组及丰富环境组,各组又分为术后14d、28d两个亚组(n=6)。参照Rice-Vannucci经典方法改良建立新生大鼠HIBD动物模型。模型组及假手术组置于标准环境中饲养,丰富环境组予以丰富环境干预治疗。术后14d、28d应用Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测大鼠海马CA1区BDNF蛋白的阳性表达情况,TUNEL法检测海马CA1区细胞凋亡情况。结果：1.各组大鼠学习记忆能力：在术后14d、28d时间点上,与假手术组相比,模型组逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.05),差异具有统计学意义；与模型组相比,丰富环境组逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数增多(P<0.05),差异具有统计学意义。2.各组大鼠BDNF蛋白阳性表达变化：在术后14d、28d时间点上,与假手术组相比,模型组大鼠海马CA1区可见BDNF蛋白阳性表达升高,差异具有统计学意义(P<0.0 5)；与模型组相比,丰富环境组大鼠海马CA 1区BDNF蛋白阳性表达更加明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.各组大鼠凋亡细胞阳性表达变化：在术后14d、28 d时间点上,与假手术组相比,模型组凋亡细胞阳性表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05)；与模型组相比,丰富环境组凋亡细胞阳性表达显着下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：1.丰富环境可以改善HIBD大鼠学习记忆的能力。2.丰富环境可以上调HIBD大鼠海马CA 1区BDNF蛋白表达,下调HIBD大鼠海马CA1区凋亡细胞阳性表达。
赵倩[6]2016年在《IGF-1对缺氧缺血性脑损伤新生小鼠急性期下丘脑Cyt-C、 Caspase-3表达及恢复期焦虑行为的影响》文中认为目的:探讨胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)对新生小鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)急性期下丘脑部位线粒体细胞色素C(Cyt-C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达及恢复期焦虑行为的影响。方法:采用改良Rice方法制备新生小鼠HIBD动物模型。将新生小鼠永久性结扎右侧颈总动脉后置于缺氧舱(含8%氧气和92%氮气)中持续缺氧2h。7日龄C57/BL小鼠126只随机分为对照组42只、HIBD组42只、HIBD+IGF-1组42只。对照组仅游离右侧颈总动脉,不结扎,不进行缺氧处理,HIBD+IGF-1组在HI后即刻给予腹腔内注射IGF-1(50ug/Kg),HIBD组、对照组在HI后即刻予腹腔注射等体积生理盐水。每组随机选取36只小鼠分别于术后0h、3h、6h、12h、24h、48h时点(n=6)取其脑组织标本,采用免疫荧光染色技术检测3组小鼠不同时点下丘脑区脑细胞线粒体Cyt-C、Caspase-3的表达。每组剩余6只小鼠,分别于日龄21d、28d、42d采用高架十字迷宫实验、空场实验测定小鼠焦虑行为。结果:1免疫组化HIBD组Cyt-C及Caspase-3免疫荧光OD值于术后3h时点开始升高,但与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),于HI后24h达高峰,6h、12h、24h、48h四个时点Cyt-C及Caspase-3免疫荧光OD值与对照组、HIBD+IGF-1组比较差异有统计学意义(P<0.05)。HIBD+IGF-1组各时点Cyt-C及Caspase-3免疫荧光OD值在6h、12h、24h、48h四个时点低于HIBD组,高于对照组,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。2焦虑行为(1)高架十字迷宫实验P21、P28、P42时各组间开放臂停留时间的比率、开放臂进入次数的比率比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中,HIBD组开放臂进入次数比率、开放臂停留时间的比率较对照组、HIBD+IGF-1组高,差异有统计学意义(P<0.05),对照组与HIBD+IGF-1组开放臂停留时间的比率、开放臂进入次数比率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。P21、P28、P42时各组间进入开放臂和闭合臂的总次数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)空场实验P21、P28、P42时各组间中央区运动距离百分比、中央区运动时间比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中,HIBD组中央区运动距离百分比、中央区运动时间较对照组、HIBD+IGF-1组高,差异有统计学意义(P<0.05),对照组与HIBD+IGF-1组中央区运动距离百分比、中央区运动时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。P21、P28、P42时各组间水平运动总距离比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.应用IGF-1干预治疗可以减少新生小鼠HIBD后下丘脑区Cyt-C及Caspase-3的表达;2.缺氧缺血性脑损伤后C57/BL小鼠青春期焦虑行为减少,而应用外源性IGF-1干预可使其焦虑行为恢复至正常水平。
武辉[7]2004年在《围产期缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡、胶质细胞病理及妥泰对其脑保护作用的研究》文中研究表明新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）是由于围产期各种缺氧缺血（HI）因素引起的神经系统损伤性疾病。死亡率高，往往有智力低下、脑瘫、癫痫等后遗症，是引起儿童神经系统伤残的常见原因之一，已成为国内外围产医学界研究的热点。HIE发病机制极其复杂，有关脑损伤的机理尚不完全清楚。 对HIE发病机制的研究多集中在神经元方面，随着对胶质细胞研究的不断深入，人们发现胶质细胞在脑HI后异常活跃，出现复杂的分子水平变化，对神经元的损伤具有双向作用。胶质细胞在不同的发育阶段可塑性及对微环境的反应不同，新生儿/鼠脑胶质细胞比成年人/鼠脑有更强的可塑性，但对HI有更大的易感性。以往对胶质细胞在HIBD中的作用的研究多集中于成年鼠，且多限于对星形胶质细胞，对小胶质细胞及少突胶质细胞的研究则较少。关于新生鼠或新生儿HIBD后叁种胶质细胞变化的全面研究尚未见报道。故对新生鼠或新生儿HIBD后整个胶质网络中不同细胞的复杂变化及其与神经元的相互关系的研究，将为下一步在更深层次上探讨胶质细胞在新生儿HIE的发病机制中的作用，以及由此在治疗方面开辟新的途径而奠定基础。 本研究分叁部分，第一部分研究新生儿HIE神经细胞凋亡、胶质细胞改变，以及神经病理与临床的联系；第二部分通过动物实验观察新生大鼠HIBD胶质细胞的变化及其与神经元凋亡的关系。第叁部分观察妥泰对新生HIBD大鼠的脑保护作用。 对25例新生儿HIE脑病理标本除进行组织病理研究外，并尝试通过免疫组化及原位末端TUNEL法观察HI条件下神经细胞凋亡及胶质细胞的变化，以期对新生儿HIE的发生、病程、围产儿的成熟度与神经病理进行综合<WP=113>分析，有利于对新生儿HIE的发病机制进行深入研究，以便指导临床。但通过HIE病理标本进行观察研究也存在一定的局限性，如死亡患儿均为重度，难以准确比较不同程度HIE患儿胶质细胞的变化规律；由于本病均于生后短期内死亡，无法观察胶质细胞在HIBD后不同时间点的动态变化，尤其是新生儿后期的变化；另外，临床因素复杂难以控制，无法在短期内总结出更深层次的规律，为此，本文拟通过动物实验来弥补这一不足。 由于胎儿宫内窘迫与出生窒息是导致新生儿HIE的最主要因素，故本研究通过结扎足月孕鼠双侧子宫动脉的方法复制围生期HIBD动物模型。应用免疫组化方法标记胶质细胞（GFAP标记星形胶质细胞，MBP标记少突胶质细胞，IsolectinB4凝集素标记活化的小胶质细胞），原位末端TUNEL法标记凋亡细胞，首次全面系统地观察围产期不同程度（轻度为结扎孕鼠双侧子宫动脉15min、重度为结扎孕鼠双侧子宫动脉25min）HIBD大鼠不同时间点（生后0.5h、3h、6h、24h、3d、7d、14d、21d、28d）叁种胶质细胞的变化规律及与神经细胞凋亡的关系。 妥泰是一种结构独特的高效广谱新型抗癫痫药物，新近国外学者已观察到其具有潜在的神经保护作用，但其对HIBD后叁种胶质细胞的变化及神经细胞凋亡的作用尚未见报道，故本研究应用结扎足月孕鼠双侧子宫动脉25min的重度HIBD动物模型，采用灌胃给药的方法，观察妥泰不同给药组（1次给药、5次给药）对重度HIBD大鼠的脑组织含水量、胶质细胞的变化、神经细胞凋亡、运动功能的发育的影响，并通过Morris水迷宫实验观察学习记忆能力。 研究结果显示： 1、死亡的新生儿HIE中92%为各种原因所造成的胎儿宫内窘迫及出生窒息。足月儿多发，均在6d内死亡，而2~3d为死亡的高峰时期。 2、25例新生儿HIE脑标本均存在不同程度的脑水肿、颅内出血及神经细胞坏变。新生儿脑水肿、颅内出血的临床症状不典型，不易被发现，而延误治疗。故在临床治疗中应重视脑水肿、颅内出血的高发性，注意更有针对性的治疗与预防。 3、同一病例不同部位水肿程度不同，急性缺氧病例延髓水肿重，越是<WP=114>靠近神经核的部位水肿越重；慢性缺氧大脑水肿较重，延髓改变相对较轻。 4、神经细胞病变包括肿胀、脱失、海绵状变性及层状坏死，足月儿大脑灰质锥体细胞、小脑蒲肯野细胞更易受损，早产儿小脑颗粒层细胞更易受损；慢性缺氧时大脑神经细胞病变的程度重，急性缺氧延髓改变重，混合性缺氧大脑灰质及延髓改变均较重；存活时间越长者小脑蒲肯野细胞病变的程度相对越轻。 5、25例新生儿HIE脑病理标本均可见星形胶质细胞增生，同一标本不同部位星形胶质细胞形态及增生程度不同，不同标本同一部位形态及增生程度亦不同，小脑增生程度表现为生后24h内死亡者增生程度重，生存时间越长，增生程度反而较轻；慢性缺氧大脑星形胶质细胞增生程度重，急性缺氧延髓增生程度重，混合性缺氧大脑及延髓增生程度均较重。 6、25例新生儿HIE均存在不同程度的神经细胞凋亡，存活时间3h的标本亦存在凋亡细胞，不同标本凋亡细胞数目不同，同一标本不同部位凋亡细胞数目亦不同。大脑以存活24h~6d神经细胞凋亡程度重，小脑以存活3d之内神经细胞凋亡程度重，延髓以存活24h~3d神经细胞凋亡程度最重。 7、正常剖腹产新生鼠生后6h开始轻度表达星形胶质细胞，生后14d 开始表达MBP阳性少突胶质细胞，随出生时间延长表达逐渐增强，小胶质细胞活化不明显。 8、HIBD?
佚名[8]2001年在《中华儿科杂志2001年第39卷索引(按汉语拼音字母次序排列)》文中认为主题索引Ａ癌基因 急性淋巴细胞白血病ＴＥＬ ＡＭＬ1融合基因与预后的关系(方拥军等 ) ( 7) :435氨氯西林钠 氨氯西林钠致血小板减少症 4例 (胡香玉等 ) ( 4 ) :2 13ＢＢ淋巴细胞 胰岛素样生长因子Ⅰ类受体反义核酸对脐血Ｂ淋巴细胞功能
孙田歌[9]2007年在《糖尿病合并急性脑梗死脑淋巴引流途径研究》文中提出背景和目的：糖尿病是急性脑梗死的独立危险因素,临床上高达37%-42%的急性脑梗死病人存在糖尿病,而糖尿病的存在可严重影响急性脑梗死的临床预后。因此,探讨糖尿病合并急性脑梗死的病理生理机制和有关防治措施十分重要。脑内物质的淋巴引流途径已被证实,然而该途径与急性脑梗死尤其是糖尿病合并急性脑梗死中的意义尚未得到阐明。本实验的目的在于定性及定量研究糖尿病合并急性脑梗死后脑内物质的淋巴引流途径的变化,并于阻断脑淋巴引流途径后观察该途径对糖尿病合并急性脑梗死后神经细胞损伤的影响,并从血管新生等角度探讨有关机制。研究方法：1.脑淋巴引流半定量研究参照线栓法进行改良阻断大鼠大脑中动脉制作急性脑梗死(Acute cerebral infarction,)模型。采用尾静脉注射链脲佐菌素(streptozocin, STZ)制作糖尿病(diabetes mellitus, DM)模型。将动物随机分为正常对照组(n=6)、假手术组(n=6)、单纯脑内注射示踪剂组(n=30)、ACI组(n=30)、DM+ACI组(先制作DM模型,然后制作ACI模型)(n=30)。对上述分组动物于尾壳核内注射示踪剂蛋白伊文思兰白蛋白复合物(Evans blue-labeled albumin, EBA),于不同时间点取脑、小脑、嗅球、颌下淋巴结、颈浅淋巴结、颈深淋巴结、腰淋巴结及颈总动脉做冰冻切片,应用荧光显微镜采集荧光图像并进行荧光半定量分析。2.脑淋巴引流定量研究采用颈淋巴管结扎和淋巴结摘除法制作大鼠脑淋巴引流阻断(cerebral lymphatic block, CLB)模型,ACI模型及DM合并ACI模型的制作方法同上。将动物随机分为假手术组a(n=5)、假手术组.b(n=5)、正常对照非CLB组(n=5)、正常对照CLB组(n=5)、ACI非CLB组(n=5)、ACI+CLB组(n=5)、DM+ACI组(n=5)、DM+ACI+CLB组(n=5)。对上述分组动物于侧脑室内注射放射性标记人血清白蛋白(human serum albumin, HSA)后不同时间点采集股动脉血并离心获得血浆,使用放免仪测定各时间点血浆每分放射性计数(counts per minute, cpm),并根据标记物放射性比度计算血浆HSA浓度,应用matlab程序设计软件计算药代动力学参数：消除速率常数Ka(h-1)、达峰浓度Cmax(μg/ml)、达峰时间tmax(h)。3.脑淋巴引流阻滞后对糖尿病合并急性脑梗死脑损伤的影响将动物随机分为正常对照组(n=6)、假手术组a(n=6)、假手术组b(n=6)、ACI组(n=6)、DM+ACI组(n=6)、DM+ACI+CLB组(先制作CLB模型,24小时后制作ACI模型或DM+ACI模型,,n=6)。对上述分组动物不同时间点采用免疫组织化学法检测脑内VEGF和CD31及Bcl-2和Caspase-3的表达。并采用Fluo-3/AM法测定细胞内游离钙离子浓度。研究结果：1.脑淋巴引流半定量研究显示,单纯脑内注射示踪剂组大鼠尾壳核注射EBA后,12h首先在嗅球检测到荧光信号,随后24h出现在颈总动脉周围间隙及颌下淋巴结,48—72h逐渐出现在颈浅淋巴结、颈深淋巴结及腰淋巴结。同一时间点比较不同部位淋巴结,72h前以颌下淋巴结荧光信号最强,以腹腔淋巴结最弱,72h时则颈深淋巴结荧光信号最强,仍然以腹腔淋巴结最弱。ACI组大鼠尾壳核注射EBA后,在颅外淋巴结及嗅球均较同时间点单纯脑内注射示踪剂组动物弱。DM+ACI组大鼠尾壳核注射EBA后,在颅外淋巴结出现的时间较单纯脑内注射示踪剂组和ACI组延迟,高峰时间点也延后。2.脑淋巴引流定量研究显示,ACI模型组的Ka(h-1)、Cmax(μg/ml)较正常对照其数值均显着下降(P<0.01),tmax(h)延长；DM+ACI模型组的Ka(h-1)、Cmax(μg/ml)与ACI模型组比较其数值也显着下降(P<0.01),tmax(h)延长。Ka(h-1)、Cmax(μg/ml)及tmax(h)正常对照组内CLB组较非CLB组Ka(h-1)平均值分别下降了57%、59%及延长了4-5小时,差别具有显着性(P<0.01)；ACI组内CLB组较非CLB组平均值分别下降了50%、57%及延长了5小时,差别具有显着性(P<0.01)；DM+ACI组内CLB组较非CLB组平均值分别下降了47%、32%及延长了5小时,差别具有显着性(P<0.01)3.正常对照组、假手术组a和假手术组b未检测到VEGF、Bcl-2及Caspase-3表达,但可见少量CD31表达；颈部淋巴结阻断后DM+ACI模型缺血半暗带区VEGF和CD31的表达明显下调,Bcl-2的表达也下调,而Caspase-3表达上调。VEGF.CD31和Bcl-2表达强度：ACI组>DM+ACI组>DM+ACI+CLB组；而细胞内钙离子浓度和caspase-3的表达强度：ACI组<DM+ACI组<DM+ACI+CLB组。研究结论：1.糖尿病合并急性脑梗死可导致脑内物质的淋巴引流途径功能不足,表现为脑内大分子物质经淋巴途径引流的量和速度下降。提示脑淋巴引流障碍是糖尿病加重急性脑梗死损伤的重要机制之一。2.脑淋巴引流途径阻滞后糖尿病合并急性脑梗死大鼠神经细胞损伤加重,同时VEGF表达和血管新生减少,Bcl-2表达减少,Caspase-3表达增加。表明脑淋巴引流途径可能通过调节血管新生和有关细胞因子而对糖尿病合并急性脑梗死后脑损伤起到内源性保护作用。
李克玲[10]2004年在《救脑宁注射液治疗实验性脑血肿家兔的作用及其机制研究》文中提出出血性中风多发生在中、老年高血压病人,是一种常见、多发病,由于其高病死率、高致残率,严重危害人类健康。近年来,大量文献显示,人们对缺血再灌注损伤所致的缺血性中风研究较多,而对出血性中风研究相对较少。本研究是在我们已往多年的工作基础上,以活血化瘀、清热解毒、化痰开窍法方药—救脑宁注射液为基础,以脑血肿周围损伤组织的神经细胞凋亡变化为切入点,从整体、细胞、分子、基因水平深入探讨中医药对实验性脑血肿以及原代神经细胞拟缺血再灌注损伤的保护作用,这将对指导中医临床及深入研究中医药有效方剂的作用机制提供实验依据。 本论文包括叁部分:(1)救脑宁注射液对实验性脑血肿家兔治疗作用的研究:复制家兔实验性脑血肿模型,观察脑组织病理学变化的演变规律,以及救脑宁注射液的治疗效应;(2)救脑宁注射液对缺血再灌注诱导原代神经细胞损伤的影响:在体外培养神经细胞拟缺血再灌注损伤模型上,观察救脑宁注射液抗损伤作用的细胞代谢、形态学与凋亡变化;(3)救脑宁注射液改善缺血再灌注所致原代神经细胞凋亡及其调控机制的研究:从细胞、分子、基因水平,在原代神经细胞拟缺血再灌注损伤模型基础上,试图从凋亡发生的两条主要途径:线粒体途径和死亡受体途径、Caspase-3 蛋白酶级联反应以及相关的上游调控基因等方面阐明救脑宁注射液抗神经细胞凋亡的作用环节与机制。 家兔脑血肿整体动物实验分为六组:正常对照组(Control),模型组(Model),救脑宁高剂量组(JNN-H),中剂量组(JNN-M),低剂量组(JNN-L)和清开灵注射液组(QKL)。实验各组分别在造模后 3、7、15 天(d)取材,观察动物一般情况、脑系数、脑组织含水量、脑组织 HE、Nissl’s、Mallory 染色、投射电镜形态学变化以及 TUNEL 染色显示凋亡细胞等指标变化,并采用计算机图像分析系统对相关形态学指标进行定量分析。 体外培养神经细胞拟缺血再灌注损伤实验也同样分为上述六组即:Control,Model,JNN-H,JNN-M,JNN-L,QKL。实验各组分别于单纯缺血 2 小时(h)及缺血 2h+再灌注 4h取材,检测细胞代谢率(MTT)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞凋亡率(流式细胞技术)、形态学、细胞 DNA 和 RNA 变化(AO 染色)、线粒体膜电位(流式细胞技术)、细胞内 pH 值(流式细胞技术)、细胞内 bcl-2/bax、Fas/FasL、Caspase-3 蛋白的表达以及RT-PCR 检测 bcl-2/bax mRNA 表达等指标变化,用计算机图像分析系统对相关指标进行定量分析。 主要实验结果如下: 1. 救脑宁注射液可改善实验性脑血肿家兔一般状态,减轻脑水肿及病理组织学变化,抑制凋亡发生 实验动物造模后,健侧(左侧)肌力下降,尤以前肢为重,行走病侧(右侧)偏转步态,以术后 7-9 天内明显;造模后 3、7、15 天,分别出现不同程度的脑水肿、脑组织含水量增加,以 3、7 天为重;脑组织病理形态学观察可见:(1)造模 3 天时,脑组织以广泛的细胞与间质水肿和出血为重,神经细胞不同程度的变性、坏死;(2)造模 7 天时,脑组织水肿仍较明显,出血现象有不同程度的改善,血肿周围脑组织出现明显的炎细胞反应与胶质增生现象,可见少量格子细胞;(3)造模 15 天时,从脑组织形态学变化上看,<WP=4>-2- 救脑宁注射液治疗实验性脑血肿家兔的作用及其机制研究脑组织水肿已不十分明显,出血现象也有减轻,血肿周围脑组织的胶质反应性增生及炎细胞浸润现象更加明显,并可见较多的格子细胞,血肿有明显的吸收表现。脑组织 TUNEL 染色,造模后皆有明显的阳性深染细胞出现,但以 7 天时凋亡表现最重。 救脑宁注射液高、中、低剂量组,在各取材时间点表现出不同程度地减小血肿面积,减轻脑组织含水量及血肿周围组织出血、水肿现象;TUNEL 染色显示,神经细胞凋亡阳性细胞数明显少于相同时间点的模型组;从叁种用药剂量对各指标的作用效果来看,以中剂量作用更好一些,其与清开灵的药效作用相比,要么相似要么更佳。 2. 救脑宁注射液有不同程度地提高神经细胞代谢率及 DNA、RNA 含量,降低 LDH 漏出率与凋亡率,改善缺血再灌注致形态学异常变化 神经细胞造模后,细胞代谢率 MTT 明显下降,LDH 漏出率、凋亡率明显升高,与正常对照组比较 p<0.05;形态学表现为:(1)倒置相差显微镜:可见有的细胞体积变大,轮廓不清,光晕不明显,突起肿胀、断裂或短缩。而有的细胞则体积缩小,颜色加深,光晕消失;(2)普通光学显微镜:HE 染色,神经元的数目较正常对照组明显减少,神经元突起形成的网络明显稀疏。神经元发生不同程度的肿胀,轮廓不清,突起有断裂、短缩;部分神经元体积变小,深染,出现核固缩现象等;Nissl’s 染色,可见细胞内尼氏体明显减少,模糊不清。(3)荧光显微镜:细胞内染色质稀疏,DNA、RNA 含量均减少,荧光强度明显减弱;部分神经细胞核明显固缩,核内染色质凝集呈块状分布,核膜完整。上述损伤性变化以缺血 2h+再灌注 4h 时为重。 救脑宁注射液高、中、低剂量组,在各时间点表现出不同程度地提高细胞代谢率、降低 LDH 漏出率和凋亡率的作用,与模型组比较 p<0.05;同时也显示出改善细胞形态学异常变化、增加细胞内 DNA、RNA 含量,保护神经细胞功能与结构免遭?
参考文献：
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[7]. 围产期缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡、胶质细胞病理及妥泰对其脑保护作用的研究[D]. 武辉. 吉林大学. 2004
[8]. 中华儿科杂志2001年第39卷索引(按汉语拼音字母次序排列)[J]. 佚名. 中华儿科杂志. 2001
[9]. 糖尿病合并急性脑梗死脑淋巴引流途径研究[D]. 孙田歌. 泰山医学院. 2007
[10]. 救脑宁注射液治疗实验性脑血肿家兔的作用及其机制研究[D]. 李克玲. 北京中医药大学. 2004
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