蒋一淼[1]2004年在《中国林蛙卵巢的组织学及免疫细胞化学研究》文中研究表明在卵泡的生长发育过程中，性类固醇激素及其受体有很重要的调控作用，原癌基因的表达也与卵子发生有着密切的关系。本研究选用中国林蛙为材料，运用组织学方法观察和探讨其卵泡发育周期；用免疫细胞化学方法，对雌二醇、孕酮、睾酮及其受体、原癌基因蛋白Myc、Fos、Myb在卵泡发育中的表达调控以及激素、受体、原癌基因叁者之间的关系进行研究，以求深入认识两栖动物的卵子发育机制。结果如下： 1．分布于秦岭地区的中国林蛙4月至7月卵巢系数较低，从8月开始，卵巢系数明显上升，翌年3月达到最高。对卵巢内卵泡在全年的显微结构进行观察，依据Chester对两栖动物卵泡发育的分期标准，将卵泡发育分为4期，Ⅰ期，原始卵泡期，4月的卵泡多为Ⅰ期；Ⅱ期，卵黄形成前期，5月至7月的卵泡多为Ⅱ期；Ⅲ期，卵黄形成期，8月的卵泡多为Ⅲ期；Ⅳ期，卵黄形成后期，9月至翌年3月的卵泡多为Ⅳ期。雌性成体在每年3-4月之间排卵，5月至翌年3月为卵泡发育阶段。中国林蛙卵泡发育的个体差异较小。 2．在中国林蛙卵泡发育的卵黄形成前期和卵黄形成期，雌二醇都有较强的表达；而在卵黄形成后期，雌二醇表达减弱。雌激素受体同雌二醇的表达时期基本一致，雌激素受体的阳性反应部位在卵母细胞核和胞质内。表明雌二醇能通过结合核内和核外雌激素受体，对卵母细胞的发育进行基因或非基因调控。同时，雌激素受体在卵泡细胞的表达，说明雌二醇还可能结合其受体对产生雌激素的卵泡细胞进行自我调控。 3．在中国林蛙的原始卵泡期和卵黄形成前期，孕酮在卵泡的表达为阴性；在卵黄形成期和卵黄形成后期，孕酮表达在逐渐增强。提示孕酮除了促进卵泡发育成熟外，还可能具有抑制卵黄合成的作用。孕激素受体的阳性反应与孕酮的表达时期基本一致，其阳性反应多出现在卵母细胞胞质和核膜上，表明孕酮与其受体结合后通过经典的基因或非基因途径来调控卵母细胞发育成熟的。 4．在中国林蛀原始卵泡期和黄形成前期的卵泡中，睾酮作为雌二醇的合成前体仅有少量表达，雄激素受体也为弱阳性反应；在卵黄形成期和卵黄形成后期的卵泡中，睾酮和雄激素受体均有较强表达，可能与促进卵泡成熟有关，也可能抑制卵黄蛋白的合成。雄激素受体定位于卵母细胞的胞质和胞核内，表明睾酮可通过基因或非基因途径调控卵母细胞的发育和成熟。 5.在中国林蛙的卵泡发育中，性类固醇激素的表达与其相应受体的表达结果基本一致。在I和H期卵泡中，雌二醇及雌激素受体表达较强时，孕酮及孕激素受体呈阴性，攀酮及雄激素受体表达较弱。而在工H和IV期卵泡中，孕酮及孕激素受体与攀酮及雄激素受体均有较强表达时，雌二醇及雌激素受体的表达则减弱。这些结果显示出叁种性类固醇激素对其相应受体有自身调节作用，对其他受体有异种调节的作用。另外，叁种性类固醇激素在卵泡的不同发育时期存在的差异性表达，与卵泡发育对激素的需求是相适应的。至于这种差异是由于它们在合成过程中相互转换、还是在功能上相互抑制而形成，仍待研究。 6.MyC在I和H期卵泡的卵母细胞胞质中呈阳性反应，在111和IV期中呈阴性。说明Myc蛋白在中国林蛙早期卵泡中发挥较大作用，参与卵母细胞的生长。在卵泡细胞中，Myc在I和H期卵泡表达较强，IH和IV期表达较弱。这与雌二醇的表达时期基本一致，而与孕酮表达时期相反。 7.FOS在I和H期卵泡的卵泡细胞中表达较弱，在111和IV期卵泡的卵泡细胞中表达较强。这与孕酮的表达结果一致。表明Fos作为癌基因的蛋白产物可以调节卵泡细胞合成幽类激素。 8.Myb在工和H期卵泡的卵泡细胞和卵母细胞胞质中均有表达，而在IH和IV期卵泡的卵泡细胞和卵母细胞中均无表达。表明Myb在卵母细胞的早期发育中起一定作用，并参与调节卵泡细胞合成踌类激素。 声厂.
杨纯[2]2004年在《秦岭山区中国林蛙精巢的组织学和免疫细胞化学研究》文中提出本研究运用组织学方法观察了秦岭山区中国林蛙精巢显微结构的年周期变化，结合精巢系数的变化探讨其生殖规律；采用免疫细胞化学方法，研究了精子发生过程中睾酮、雌二醇、孕酮及其叁种受体在精巢中的定位，原癌基因c-fos、c-jun和c-myc在精巢中的表达。试图揭示性类固醇激素及其受体与精子发生的关系以及原癌基因表达产物在精子发生中的作用，探讨精子发生的调控机制；同时观察了婚垫的显微结构以及睾酮和雄激素受体在婚垫内的免疫细胞化学定位，从而阐明年生殖周期中婚垫的显微结构、精巢系数和精子发生的关系。从实验结果分析中，得出以下结论： 1．秦岭山区中国林蛙的生精周期属于非连续型。精巢系数的变化与精子发生的活动周期相一致。精子发生一般从每年5月开始，翌年4月结束，历时一年。 2．生精周期由特征明显的5个时期构成。精原细胞增殖期(Ⅰ期)，5-7月，精巢系数最小，精原细胞进行有丝分裂，其它生精细胞尚未形成。精母细胞成熟分裂期(Ⅱ期)，8-9月，精巢系数最大，精原细胞、精母细胞和精子细胞在生精小管内共存。精子形成期(Ⅲ期)，9-10月，精子细胞变态形成成熟精子。成熟精子贮存越冬期(Ⅳ期)，11月-翌年2月，成熟精子贮存在生精小管中。精子排放期(Ⅴ期)，翌年3-5月，精巢系数显着下降，成熟精子从生精小管上脱离，排出体外。 3．睾酮与雄激素受体的细胞内定位具有一致性。睾酮与雄激素受体结合维持精原细胞活性和增殖潜能，促进精母细胞减数分裂，并参与精子细胞变态及维持成熟精子活力。婚配期间，睾酮含量升高可能有诱导支持细胞和精子的脱落，促进排精的作用。间质细胞合成睾酮并以自分泌的方式调节自身的合成功能，还以旁分泌的方式调节支持细胞类固醇激素的合成，进而调控精子发生。 4．雌二醇通过定位于生精细胞中的雌激素受体发挥调控作用，诱导精原细胞增殖、防止生精细胞凋亡、维持成熟精子功能。雌二醇可能在冬眠后精子发生的恢复中发挥作用。雌二醇通过旁分泌和自分泌方式调节间质细胞和支持细胞的类固醇合成，以维持生精周期不同阶段类固醇激素的合适浓度。除支持细胞和间质细胞外，生精细胞也可能合成雌二醇。 5．孕酮与孕激素受体通过基因组效应方式参与精子发生的调控。孕酮可能参与精子细胞变态以及变态后精子的成熟。间质细胞并非精巢内孕酮的唯一来源，生精细胞也可能合成孕酮。 6.原癌基因c一:、c一un和c一my。在中国林蛙精子发生中具有调控作用，并可能与类固醇激素合成调控有关。Fos、Jun和My。以不同的强度在精原细胞、精母细胞和精子细胞内分布，在精子和间质细胞内Myc呈阴性。AP一1复合体转运至精原细胞核中启动精子发生。精子细胞中高密度的Jun颗粒可能与精子细胞凋亡有关。支持细胞内表达的Fos、Jun和Myc可能参与支持细胞和生精细胞间的通讯。雌二醇和孕酮的共存互作有诱导精原细胞内原癌基因表达，促进精原细胞有丝分裂的作用。Fos，Jun，Myc在精巢中的表达强度与性类固醇激素合成量和精子发生进程相一致。 7.婚垫显微结构的变化与精巢系数、精子发生进程同步。婚垫表皮突起的形成是由于生发层细胞的增生、颗粒细胞数量增多和体积变大所致，它的消退是由于角质细胞包裹的颗粒细胞小体脱落所致。婚腺的发育与婚垫形成同步，婚配期间婚腺的分泌活动最旺盛。翠酮在婚垫中呈现周期性变化，皋酮与雄激素受体结合调控婚垫的结构和机能变化。婚垫的形态特征能间接反应精巢的机能状况。雌性成体前肢第一指皮肤的显微结构没有明显的季节性变化，这与翠酮含量较低，雌二醇含量较高有关。
参考文献：
[1]. 中国林蛙卵巢的组织学及免疫细胞化学研究[D]. 蒋一淼. 陕西师范大学. 2004
[2]. 秦岭山区中国林蛙精巢的组织学和免疫细胞化学研究[D]. 杨纯. 陕西师范大学. 2004