王先梅[1]2001年在《高血压靶器官（脑、心）损害基因表达变化的基础与临床研究》文中认为背景与目的 高血压病为临床常见病与高发病，其发病机理仍未完全阐明，目前多认为由环境因素与遗传因素相互作用引起。在我国，冬季心脑血管疾病急症也明显增加。另外。在盐敏感性方面也存在个体差异，敏感者过多的钠盐摄入可使血压升高。脑卒中是高血压病最严重的并发症之一。但引起脑血管病的原因很多，遗传因素和环境因素均起重要作用。环境因素的作用使得基因的表达谱发生改变。在众多环境因素中，高盐和寒冷环境对脑血管功能调节起重要作用。因此，我们认为高盐饮食和特殊的环境温度可能对我国脑卒中的发生有重要影响。在以往的研究中，我们选择了高盐与冷应激作用于正常Wistar大鼠，第二到叁周大鼠血压即明显升高。血RAAS、平滑肌AT_1表达、Ca~(2+)及动脉壁内皮NOS/NO均有明显改变。但在上述两因素诱导的高血压模型上脑卒中的发病率如何，该模型是否可以实验模拟人类高血压诱发的脑卒中的实际情况，仍未进一步深入研究。 最近，我们建立了非外科手术和非遗传因素，单纯由环境因素诱发的大鼠卒中模型，发现给予Wistar大鼠高盐饮食（8％，G/G）加冷刺激（4±2℃，每天4小时）共8周后，仅10～17％的大鼠出现卒中样发作。上述结果提示在相同的种属遗传背景下，是否出现卒中，可能存在环境因素诱导的卒中易感基因。由于方法学的原因，已有的研究仍局限在某个候选基因上，脑卒中致病基因的大规模筛选，尤其与环境因素诱发的高血压相联系，国内外还未见报道。 除了大脑以外，心脏同样是高血压危害的重要靶器官之一。高血压心脏损害易并发心肌缺血、心律失常、心力衰竭和狩死。心肌细胞同样是高度依赖线粒体供能的细胞之一。线粒体基因3243位点突变可引起人类多种疾病。 鉴于上述问题，本研究主要：1．探讨环境因素对大鼠血压的影响。2．筛选环境因素造成脑卒中的易感基因。3．探讨线粒体基因3243位点多态性与高血压靶器宫损害的关系。 方法 3月龄的雄性 Wistar大鼠 100只分为四组：（l）冷刺激组（28只）：每天给予冷刺激（4土ZOC，每天4小时）；（）复合组（28只）：给予冷刺激（4上 2 oC，每天 4小时）及高盐饮食（8％，G／G）；（）高盐组 （8只）：每天给予高盐饮食（8％，G／G）；（4）正常对照组（16只）。实验时间共8周。每周测鼠尾压、心率；．运用复合环境因素造成脑卒中的鼠脑和正常WIStar大鼠鼠脑作为组织来源，建立两个差减文库；将两个文库进行前向和反向杂交，PCR扩增出差异片段，并对这些片段进行测序；利用NCBI网络资源，对差异片段作生物学信息分析；收集临床高血压患者、脑卒中患者及高血压伴有心脏患者的血液标本，提取DNA，应用限制性酶切片段长度多态性方法，观察患者线粒体基因突变。 结果 1．血压与心率：第一周末，寒冷、高盐、复合组的尾压、心率比对照组均明显升高（P＜0刀1），叁周末血压达到最高（分别为127刀土6刀，125．9t5，5，131t6刀mmHg）。 2．生物学信息分析：每组随机挑取288个白色菌落，两组共576个。随后对这些克隆进行了序列测定。其中正常组共有230个序列可用，卒中组共有226个序列可用，其余的不可用的序列为测不通的序列或载体自连。全部可用序列均通过互联网在NCBI序列检索中心进行BLAST比较分析，其中正常组 119个克隆在 nr中有明显的同源序列，同源性均在 90％以上，占 51．7％，被认为是己知基因；95个克隆在 dbEST中有明显的同源序列，占41．3％，被认为是已被发现的EST；剩余的16个克隆在nr或dbEST均未发现同源序列，被认为是新基因片段，占 7％。而卒中组 126 Vlll个克隆在nr中有明显的同源序列，同源性均在90％以上，占55．8％，被认为是已知基因；78个克隆在dbEST中有明显的同源序列，占34．5％，被认为是己知的EST；剩余的22个克隆在nr或dbEST均未发现同源序列，被认为是新基因片段，占9．7％。与dbEST同源的序列及克隆的新片段目前功能仍然未知。从功能分类来看，脑卒中时线粒体基因（43个克隆与线粒体基因高度同源，Prto刀1）表达明显上调，而细胞与机体防御基因表达明显下调0 刀1人 3．线粒体基因3243位点多态性：BSp 1201（G”GGCCC）酶切PCR产物，病例及对照组PCR产物酶切后琼脂糖iB凝胶电泳均呈单一条带，未见 2个条带。说明不能被 BSp 120切开。 结论 1．应用复合环境因素成功地复制了大鼠高血压模型；环境因素对血压有明显影响。 2．应用SSH，我们筛选了576个克隆，并对其进行分析，其中正常组 119个克隆被认为是已知基因，占引尸％；95个克隆被认为是已被发现的EST，占41．3％；剩余的16个克隆被认为是新基因片段，占7％。而卒中组126个克隆被认为是已知基因，占55．8％；78个克隆被认为是已知的EST，占34．5％；剩余的22个克隆被认为是新基因片段，占9．7％。从功能分类来看，脑卒
李浩[2]2009年在《降压胶囊治疗老年单纯收缩期高血压的疗效评价与作用机制研究》文中研究说明目的评价中药降压胶囊对老年单纯收缩期高血压(EISH)的疗效与作用机制。同时,探讨病证结合治疗模式的临床效应与作用途径。方法(1)检索古代相关文献、近十年来老年高血压及老年单纯收缩期高血压的文献资料,整理分析西医、中医及中西医结合领域对老年高血压及老年单纯收缩期高血压的研究现状。(2)采用多中心、随机、双盲、对照的研究设计方法,将符合纳入病例标准的270例EISH患者分为叁组,即中药降压胶囊组(简称中药组),降压胶囊联合尼莫地平组(简称联合组)和西药尼莫地平组(简称西药组)各90例。共241例患者完成试验,29例脱落,脱落率为10.7%,其中中药组脱落10人,联合组脱落14人,西药组脱落5人。试验疗程为4周,分析评价各组对患者临床症状、降低血压及改善生活质量的作用;观察各组治疗前后尿免疫球蛋白(IgG)、尿微量白蛋白(mALB)、β_2微球蛋白(β_2-MG)、转铁蛋白(TRF)和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)五项联检指标的变化情况,分析各组对早期肾损害的防治作用。观察各组治疗前后血清一氧化氮(NO),血浆内皮素-1(ET-1)、血栓素B_2(TXB_2)、6-酮-前列腺素F_(1α)(6-Keto-PGF_(1α))以及血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)含量变化,探讨药物治疗作用的可能机制与途径。(3)以自发性高血压大鼠(SHR)模型为研究对象,将SHR66只,随机分为6组(每组11只):模型组(给予等量纯净水)、降压胶囊小剂量组(2g生药/kg,简称中药小剂量组)、降压胶囊大剂量(4g生药/kg,简称中药大剂量组)组、降压胶囊小剂量(2g生药/kg)+尼莫地平(5mg/kg)组(简称联合小剂量组)、降压胶囊大剂量(4g生药/kg)+尼莫地平(5mg/kg)组(简称联合大剂量组)、尼莫地平(5mg/kg)组(简称西药常量组)。连续灌胃8周。观察血压、左室重量指数(LVMI)、内皮素-1(ET-1)、降钙素基因相关肽(CGRP)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、心肌血管紧张素1型(AT1)受体蛋白及mRNA的表达情况。结果(1)老年单纯收缩期高血压属老年高血压的一个常见类型,具有随年龄增长收缩压逐渐升高、波动不稳、易发生心血管事件并严重影响生活质量的特点。中医药对老年高血压有较好的降压作用,尤其在改善症状、提高生活质量等方面有突出优势,但中西医结合的治疗模式,能明显取得优势互补临床效应。目前尚缺乏大样本符合循证医学原则治疗EISH的中医或中西医结合研究证据。(2)降压胶囊治疗后能明显降低EISH收缩压,联合尼莫地平治疗有明显协同降压效应(P＜0.05),且联合用药降低收缩压作用明显优于单纯中药或单纯的西药治疗(P＜0.05)。降压胶囊对阴虚阳证候患者的降压效应明显优于非阴虚阳亢证候患者(P＜0.05):中西联合用药对阴虚阳亢证候患者的降压作用,又明显优于单纯中药或西药两组阴虚阳亢证候患者(P＜0.05)。降压胶囊及其联合尼莫地平两组对EISH患者24h收缩压及白天收缩压均较治疗前明显降低(P＜0.05):而联合用药对患者夜间收缩压也有明显降低(P＜0.05),同时,对白天收缩压的降低作用既明显优于单纯中药和单纯的西药组(P＜0.05)。降压胶囊及其联合尼莫地平两组均能明显改善患者的临床症状积分值(P＜0.05),且对阴虚阳亢证候患者的症状积分改善也均优于西药尼莫地平组。降压胶囊治疗后能改善EISH患者SF-36生活质量量表七个维度的积分值(P＜0.05),且对其中的五个维度积分值的改善优于尼莫地平(P＜0.05),但其联合尼莫地平治疗对八个维度的积分均能明显改善(P＜0.05),并且均优于尼莫地平(P＜0.05)。降压胶囊及其联合尼莫地平治疗后均能明显降低患者尿微量白蛋白及β_2微球蛋白的水平(P＜0.05);联合用药后降低患者尿微量白蛋白作用又明显优于单纯中药或西药组。降压胶囊及其联合尼地平两组均能改善EISH患者血浆(清)NO、ET-1、TXB_2、6-Keto-PGF_(1α)、hs-CRP水平,均优于治疗前(P＜0.05,P＜0.01);联合治疗降低血浆TXB_2水平作用又优于单纯中药或单纯西药组(P＜0.05)。(3)降压胶囊及其联合尼莫地平治疗8周后,均能明显降低SHR模型收缩期血压值(P＜0.05,P＜0.01),而治疗4周后,仅降压胶囊大剂量联合尼莫地平有明显的降压效应(P＜0.05)。降压胶囊(大剂量组)及其联合尼莫地平治疗后,能明显降低SHR左室重量及其左室重量指数(P＜0.05);同时,能明显降低SHR血浆ET、AngⅡ水平,且升高SHR血浆CGRP水平(P＜0.05),尤其降低ET及升高CGRP水平作用均优于西药尼莫地平(P＜0.05)。降压胶囊及其联合尼莫地平各剂量组均能够使SHR心肌AT1受体蛋白及mRNA表达显着降低(P＜0.05,P＜0.01);但降压胶囊联合尼莫地平治疗后,这种表达的降低更为显着,既优于单纯中药组又优于单纯西药组(P＜0.05,P＜0.01)。结论降压胶囊对EISH有较好的临床疗效,改善细胞内皮功能、抗炎及降低心肌AT1受体蛋白及mRNA表达等可能是其部分作用机制。降压胶囊联合尼莫地平的病证结合治疗模式,对EISH的治疗有明显的协同效应,值得推广应用。
刘相菊[3]2011年在《GSPE对哇巴因高血压大鼠靶器官的保护机制研究》文中研究说明原发性高血压(EssentialHypertension, EH)简称为高血压,为一种独立的心血管疾病,是导致多种心脑血管疾病的重要病因及危险因素,可影响心、脑、肾等多个重要脏器的结构和功能,最终导致这些重要器官的功能减退及衰竭,已经成为心血管疾病死亡的主要原因之一。现已证实心血管重构及靶器官损害与高血压的预后是密切相关的,因此,高血压病的现代治疗策略认为不应只局限于降低血压,更重要的是保护靶器官免受损伤,逆转心肌肥厚和血管重构(vascular remodeling, VR),这样才能有效降低高血压并发症的发生率和病死率。因此,对高血压状态下血管重构及靶器官损害机制的研究具有重要意义。哇巴因(ouabain)是一种新发现的类固醇类的肾上腺皮质激素,作为内源性的洋地黄物质,为主要的钠泵抑制物之一。诸多研究表明,哇巴因含量升高与原发性及继发性高血压发病密切相关。目前研究一致认为哇巴因与细胞膜上的钠泵结合后,可以使得钠泵的构型发生改变及功能受到抑制,血管内皮细胞出现继发性改变,最终导致血压升高。近年来国外学者通过给予大鼠长期注射小剂量哇巴因,建立起一种新的高血压模型即哇巴因高血压大鼠,该高血压模型的许多特点都与原发性高血压患者(尤其是低肾素型高血压)非常相似,目前已经成为高血压发病学研究中的一个有价值的动物模型。葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin extract, GSPE)是一种抗氧化作用极强的生物制剂,它具有强大的自由基清除能力,可以减少或清除氧自由基对机体组织和器官的损害作用。已有大量的研究发现,葡萄籽原花青素通过抗氧化损伤作用可以预防大鼠心脏的缺血再灌注损伤。除了强大的抗氧化作用,GSPE还具有保护血管内皮作用及抗炎作用。而有关GSPE在高血压方面的研究,目前国内外尚未见报道。因此本研究应用哇巴因构建高血压大鼠模型观察哇巴因导致高血压所致心、脑、肾、血管等重要脏器的损害,同时给予天然药物GSPE干预,观察其对哇巴因高血压大鼠血压及血管重构的影响,并进行RT-PCR及Western Bloting检测主动脉NF-κB和TGF-β1的基因和蛋白表达,探讨GSPE对哇巴因高血压大鼠靶器官的保护机制。第一部分哇巴因高血压大鼠模型建立及重要靶器官损害的研究研究背景：流行病学资料显示,我国人群高血压患病率上升很快,估测目前全国有高血压患者约1.6亿。因此,我们面临的高血压防治任务是非常艰巨的。高血压导致脑、心、肾和主动脉等重要靶器官的病理改变,往往与血管结构和功能改变有着密切联系,血管重构是其基础。除了异常的血流动力学因素外,血液循环中的血管紧张素Ⅱ、血栓素、炎性因子、内皮素、氧化低密度脂蛋白等多种因素均可作为信号,被内皮细胞等感受器所感受,再通过多种信号转导途径传导至其他感受器和效应器,进而释放调节因子如生长因子、细胞因子、基质调节因子和血管活性物质等,引起血管结构和功能的变化。由于高血压的发病机制与高血压引起的病理生理变化很难截然分开,血压的波动性和高血压定义的人为性以及发病时间的模糊性也使高血压血管重构及靶器官损害的始动机制很难确定。目前逆转血管重构、保护靶器官亟待解决的问题是明确血管重构及靶器官损害是否始动于高血压之前,从而在血管重构及靶器官损害的初始阶段即采取干预措施,以有效降低高血压的致残率和致死率。本文以雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠为实验动物,通过长期小剂量腹腔注射哇巴因观察其引起大鼠血压升高的作用,并观察大鼠脑、心、肾、主动脉等主要靶器官的病理变化,探讨哇巴因是否具有独立于血压升高的直接靶器官损害作用以及哇巴因导致这些靶器官发生病理改变的可能机制,同时也为高血压血管重构及靶器官损害的机制研究提供一个新的契机,进而为寻找高效且有逆转血管重构、保护靶器官的治疗高血压药物奠定理论基础。研究方法：40只雄性SD大鼠适应性饲养5天后进入实验,随机分为2组：哇巴因组20只,每日晨腹腔注射哇巴因27.8μg·kg-1；正常对照组20只,每日晨腹腔注射生理盐水1 mL。第3周末每组随机处死各10只,剩余20只大鼠于第6周末全部处死。1.实验开始前及开始后每周末测量大鼠尾动脉收缩压1次。收缩压测量采用大鼠尾动脉间接测量法—尾套法。2.实验开始后的第3周末和第6周末,留取脑、心、肾、主动脉和肠系膜动脉等标本进行HE染色、电镜观察。另外留取大脑皮质进行尼氏体(Nissl)染色、主动脉切片行天狼猩红饱和苦味酸染色。结果：1.哇巴因组大鼠的血压逐渐升高,至6周末哇巴因组大鼠的血压开始明显升高并高于同周龄的正常对照组大鼠。2.3周末,哇巴因组大鼠主动脉电镜观察发现结构改变,而6周末哇巴因组大鼠主动脉出现内膜增厚,血管重构改变,心肌细胞肿胀,肌丝排列紊乱。结论：1.小剂量哇巴因长期腹腔注射6周后SD大鼠的血压明显升高,可成功建立哇巴因高血压大鼠模型。2.哇巴因高血压大鼠在血压明显升高之前即出现了主动脉等主要靶器官的超微结构损害,提示病理浓度的哇巴因可导致主要靶器官的损害,且该作用的发生始于哇巴因升高血压之前。3.哇巴因高血压大鼠是较为理想的高血压动物模型。第二部分GSPE对哇巴因高血压大鼠靶器官的保护机制研究研究背景：原发性高血压(EH)的发病原因是多种多样的,而高血压靶器官的损害机理究竟为何尚不明确。因此探寻靶器官损害的机理、寻找安全有效的药物干预高血压及靶器官损害的发展过程显得尤为必要。葡萄籽原花青素(GSPE)是从葡萄籽中提取出来的一类多酚化合物的总成,它具有多种生物学活性,具有潜在的临床应用价值。目前已经有大量研究发现GSPE具有极强的抗氧化活性,在动脉粥样硬化、缺血再灌注以及化疗药物引起的心肌损伤中可发挥保护作用。哇巴因作为一种内源性的洋地黄物质,是主要的钠泵抑制物之一。可以诱导高血压的发生,诱导高血压靶器官损害的出现。因此本研究应用哇巴因构建高血压大鼠模型,在建立模型的同时给予GSPE灌胃治疗,观察GSPE对哇巴因性高血压大鼠血压水平的影响,同时,对主动脉进行光镜、电镜观察,探讨GSPE对高血压血管重构能否起到保护性作用,对NF-κB即TGF-β1进行荧光定量PCR和Western bloting检测,并探讨其可能存在的机理。研究方法：40只雄性SD大鼠随机分为2组：哇巴因组20只,每日清晨腹腔注射哇巴因27.8μg·kg-1+生理盐水1ml灌胃；GSPE治疗组20只,每日晨腹腔注射哇巴因27.8μg·kg-1+GSPE 250mg·kg-1灌胃。6周后实验结束时,留取主动脉进行HE染色、天狼猩红染色、免疫组织化学染色、透射电子显微镜观察、将另取部分组织至—80℃冰箱保存,对NF-κB及TGF-β1进行荧光定量PCR和Western bloting检测。结果：1.GSPE能够显着降低哇巴因高血压大鼠的血压,这表明GSPE具有一定的降压作用。2.哇巴因组大鼠主动脉血管重构较重,而GSPE组能够抑制哇巴因高血压大鼠主动脉血管重构。3.通过RT-PCR及Western Bloting技术,发现GSPE治疗后,能够显着抑制哇巴因高血压大鼠主动脉NF-κB p65以及TGF-β1 mRNA的表达(P<0.05或0.01)。结论：1. GSPE具有保护哇巴因高血压大鼠靶器官损害的作用。2. GSPE在一定程度下可降低哇巴因高血压大鼠高血压的进程,延缓血管重构的发生。3. GSPE通过抑制NF-κB/TGF-β1途径,减轻大鼠主动脉组织中的炎症反应,起到保护哇巴因高血压大鼠血管重构的作用。
涂晓龙[4]2009年在《补益肾气法对自发性高血压大鼠动脉弹性影响的研究》文中研究表明目的:探讨补益肾气法对高血压血管弹性和高血压进程的影响,并揭示其可能的作用机制。方法:在“补益肾气法治疗老年人高血压的研究”课题前期研究基础上,从理论研究、文献评述、实验研究(血压、主动脉胶原分布、含量的变化,NO、ET-1)叁个方面探讨补益肾气法的作用机制。以自发性高血压大鼠为模型,采用随机分组法分为阴性对照组(模型组)、益肾降压合剂高、低剂量组、阳性对照组(拉西地平)。给予相应药物(益肾降压合剂、拉西地平)连续灌胃共8周。测定给药前及给药后收缩压和心率动态变化,硝酸还原酶法测定NO、放射性免疫法测定ET-1。取自发性高血压大鼠胸主动脉,采用Masson氏叁色法染动脉胶原和sirius red苦味酸染色法行胶原特殊染色,用德国leica公司Qwin V3图像分析软件系统软件进行图像分析,计算胶原面积与统计场总面积比值。Ⅰ型胶原(ColⅠ)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)采用免疫组织化学染色方法(SP法) ,图像分析经标准灰度校正后,计算胶原面积与统计场总面积比值。结果:益肾降压合剂可明显地降低自发性高血压大鼠的收缩压及心率;调节血管活性物质,升高NO含量、降低ET水平;使主动脉胶原含量降低,Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达减少。结论:补益肾气法能平稳地控制血压,治疗延缓了SHR血压发展进程,能够改善自发性高血压大鼠动脉弹性及血管的异常舒缩功能,是防治高血压病及其并发症的可靠方法。
刘延波[5]2007年在《人类心房利钠肽基因导入对自发性高血压大鼠血压及其靶器官损害影响的实验研究》文中研究表明原发性高血压(Essential Hypertension,ESH)是一种常见的多基因、多因素慢性疾病,传统药物治疗难以令人满意,而基因治疗则具有诱人的临床应用前景。针对高血压发病的不同机制,选择不同的调控基因进行治疗,将可能达到长期控制和治疗高血压的目的。大量研究表明,心房利钠肽(ANP)参与了高血压发生和发展,导入ANP基因不仅能有效降低大鼠血压,而且可减轻高血压的终末器官损害,因此成为高血压基因治疗最佳侯选基因之一。本研究所采用质粒载体pcDNA3.1+含有巨细胞病毒的CMV启动子,其转录活性最高,并含有来自牛生长激素基因的PolyA序列,可以较好地保证转录后mRNA在体内的稳定性,国内尚无应用此质粒携带hANP基因进行高血压转基因研究的报道。本项研究首先成功钓取hANP cDNA并构建了重组质粒pcDNA3.1+ /hANP,进而通过直接骨骼肌注射法及尾静脉注射法导入SHR进行转基因治疗。结果表明,重组质粒pcDNA3.1+/hANP可在SHR骨骼肌内有效表达hANP的mRNA及其前体蛋白,并可进入血循环引起血浆ANP水平的升高,进而有效降低大鼠的血压,同时可对SHR的饮水量、尿量产生短期影响,而对其心率、体重、进食无显着影响。组织病理及形态学检查结果表明,肌注途径转基因方法在有效降低大鼠血压的同时,还有效地逆转了高血压所致的终末脏器(如心、肾)损害。本研究还观察了一些与pcDNA3.1+/hANP基因治疗安全性相关的一些主要生理、生化指标的改变,并检测了SHR对表达hANP蛋白后是否存在免疫反应。结果表明,采用裸质粒经静脉及肌注途径导入SHR后,对SHR的体温、体重、心率、进食量没有影响;各组大鼠亦未观察到呕吐、腹泻、活动减少或躁动等可能与治疗相关的异常症状;与基因治疗相关的五个生化指标组间比较未见异常;转基因后在各实验组大鼠体内也未检测到抗hANP抗体的存在,说明通过pcDNA3.1+质粒载体携带目的基因hANP通过肌肉注射或静脉注射途径导入SHR体内是一种较为安全的转基因治疗手段。
胡丽娜[6]2012年在《叁草降压汤对人脐静脉内皮细胞一氧化氮和内皮素-1生成的影响》文中指出目的1探讨经方在高血压治疗中的应用现状；2初步分析SCD不同组分对脐静脉内皮细胞NO、ET-1生成的影响。方法1理论研究系统整理运用《伤寒论》及《金匮要略》中经方治疗高血压的相关文献,参考刘渡舟教授《新编伤寒论类方》中伤寒论方的分类方法进行分类讨论。通过相关文献的整理,系统地探讨了经方在高血压治疗中的使用情况。2实验研究实验分为空白对照组(control)和5个药物组,即SCD醇提组(SCD-EXT)、SCD水洗组(SCD-W)、10%SCD醇沉组(SCD-10ET)、50%SCD醇沉组(SCD-50ET)95%SCD醇沉组(SCD-95ET),其中每个药物组设5个不同浓度,即1000μg/ml、100μg/ml10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml,每个浓度设4个复孔。将SCD不同组分配制为5mg/ml,再在超净台内将各组分浓缩液用ECM分别稀释至所需浓度,加入24孔板中,培养箱孵育4h后观察细胞生长状态并收集培养上清,1OOOr/min离心取上清。分别用硝酸酶还原法测定细胞上清中的NO含量,酶联免疫分析法(ELISA)双抗夹心法检测ET-1含量。结果1理论研究全文共搜集了54个经方,占《伤寒杂病论》所载方剂的近五分之一,除赤石脂汤类,几乎涵盖了《新编伤寒论类方》的所有方类。现代中医医家并未被固有观点所束缚,落入中药西用的窠臼,而是紧抓经方“有是证,用是方的原则”,将大量经方灵活巧妙地运用于原发性高血压病的临床实践中,取得显着的疗效。2实验研究(1)SCD对NO生成的影响不同组分与空白对照组相比,提示10μg/ml、1μg/ml和0.1μg/ml的SCD有效组分均对HUVEC中NO的生成有促进作用,其中,给药浓度为10μg/ml时,SCD-50ET组NO含量与对照组相比有明显差异(P<0.05),SCD-10ET组、SCD-95ET组细胞上清中NO含量与对照组相比有显着差异(P<0.01)；给药浓度为0.1μg/ml时,SCD-95ET组细胞上清中NO增高最明显,与对照组相比,有显着差异(P<0.01)对SCD各组分对HUVEC分泌NO作用的影响进行组间比较可见,给药浓度为100μg/ml时,SCD-95ET组NO含量最高,且SCD-EXT组、SCD-50ET组、SCD-10ET组与SCD-95ET组比有明显差异(P<0.05)；给药浓度为10μg/ml时,SCD-W组与SCD-50ET组、SCD-10ET组、SCD-95ET组与SCD-EXT有明显差异(P<0.05)；给药浓度为0.1μg/ml时,SCD-95ET组与SCD-10ET组、SCD-50ET组相比有明显差异(P<0.05),SCD-95ET组与SCD-W组、SCD-EXT组相比有显着差异(P<0.01)(2)SCD对ET-1生成的影响不同组分与空白对照组相比,1000μg/ml的SCD有效组分对HUVEC中ET-1的生成有促进作用,但与对照组相比未表现出显着差异。而100μg/ml10μg/ml、lμg/ml和0.1μg/ml的SCD有效组分均对HUVEC中ET-1的生成有抑制作用。给药浓度为100μg/ml时,SCD-50ET组、SCD-EXT组与空白对照组相比有明显差异(P<0.05)；给药浓度为10μg/ml时,SCD-50ET组、SCD-10ET组与空白对照组相比有明显差异(P<0.05)；给药浓度为1μg/ml时,SCD-50ET组、SCD-95ET组和SCD-EXT组与空白对照组相比有明显差异(P<0.05),SCD-W组、SCD-10ET组与空白对照组相比有显着差异(P<0.01)；给药浓度为0.1μg/ml时,SCD-W组与空白对照组相比有明显差异(P<0.05),SCD-50ET组、SCD-10ET组、SCD-EXT组与空白对照组相比有显着差异(P<0.01),SCD-95ET组与空白对照组相比无差异(P>0.05)对SCD各有效组分对HUVEC分泌ET-1作用的影响进行组间比较可见,在10μ g/ml、1μg/ml和0.1μg/ml时,SCD各个组分均对HUVEC分泌ET-1有抑制作用,但各组分之间比较差异不明显,仅在给药浓度为100μg/ml时,SCD-95ET组与SCD-EXT组ET-1的含量有明显差异(P<0.01)结论1采用辨证与辨病相结合,大量的经方可以用于高血压病的治疗,减少西药的使用剂量、种类和副作用,为许多顽固性高血压的治疗提供了方法,显着改善了高血压患者的不适症状,提高患者的生活质量。2叁草降压汤(SCD)及其不同组分均对体外培养的HUVEC NO生成具有促进作用、对ET-1的生成具有明显的抑制作用。
刘庆萱[7]2016年在《高血压病中医证型与心血管危险因素的相关性研究》文中提出目的:观察高血压病不同中医证型与心血管危险因素的相关性,以此来指导高血压中医辨证。方法:本研究对象来自2015年2月至12月在山东省立医院心内科确诊高血压病(Hypertension)的住院病人158例,收集患者的基本临床信息,测量血压、TC、LDL-C、HDL-C等,并进行高血压分级、危险因素分层,并根据《中药新药临床研究指导原则》将患者分为四种中医证型,采用IBM SPSS22.0 Stastistics软件对数据进行统计学分析。结果:(1)痰湿壅盛组的极高危患者比例是四种中医证型中的最高的(56.6%),有统计学意义。(2)舒张压的均值排序:痰湿壅盛>肝火亢盛>阴阳两虚>阴虚阳亢,有统计学意义。(3)BMI均值在四组中排序为:肝火亢盛>痰湿壅盛>阴阳两虚>阴虚阳亢,有统计学意义。(4)TC均值在四组中的排序为:肝火亢盛>阴虚阳亢=痰湿壅盛>阴阳两虚,有统计学意义。HDL-C均值在四组中的排序为:肝火亢盛>阴虚阳亢>痰湿壅盛>阴阳两虚,有统计学意义。(5)靶器官损害分布在四组中的排序是:阴阳两虚>痰湿壅盛>阴虚阳亢>肝火亢盛,有统计学意义。(6)合并临床症状构成比在四组中的分布排序是:痰湿壅盛>肝火亢盛>阴阳两虚>阴虚阳亢,有统计学意义。(7)Logistic回归分析显示,肝火亢盛组密切相关的危险因素是Hcy与性别,根据求出的相关系数大小看相关性:Hcy>性别;阴虚阳亢组密切相关的危险因素是Hcy与BMI,根据求出的相关系数大小看相关性:Hcy>BMI;阴阳两虚组密切相关的危险因素是LDL-C与年龄,根据求出的相关系数大小看相关性:LDL-C>年龄;痰湿壅盛组密切相关的危险因素是LDL-C与BMI,根据求出的相关系数大小看相关性:LDL-C>BMI。结论:肝火亢盛高血压病人更易有超重和血脂异常的倾向,阴阳两虚的高血压病人靶器官受累最严重,痰湿壅盛高血压病人的危险分层最高,临床合并症最多。心血管危险因素与中医高血压证型的划分有显着相关性。
佚名[8]2018年在《冠心病合理用药指南(第2版)》文中指出循证医学相关方法说明2018年3月1日,由国家卫生计生委合理用药专家委员会和中国药师协会组成指南修订联合委员会,经3次联合会议讨论后最终确定了指南修订的总体原则及新指南拟回答的核心问题。指南工作组针对这些核心问题制定了具体的文献检索和评价策略,综合评价、筛选出相关文献。修订过程主要
吴赛[9]2016年在《基于瘦素介导的下丘脑JAK2/STAT3通路探讨加味半夏白术天麻汤改善肥胖性高血压的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:本课题拟通过加味半夏白术天麻汤干预肥胖性高血压大鼠,应用现代分子生物学技术,以下丘脑、主动脉为靶器官,以瘦素/瘦素受体和瘦素介导的JAK2/STAT3途径为切入点,观察加味半夏白术天麻汤对瘦素介导的下丘脑JAK2/STAT3通路的影响,评估加味半夏白术天麻汤降压、减肥的药效并初步明确其机制,为从本质上改善肥胖性高血压、平衡机体神经-内分泌功能、预防心血管事件的发生提供新的治疗思路。方法:1.肥胖性高血压大鼠的模型建立:143只wistar大鼠采用高脂饲料饲养25周的方法造模,同时取16只wistar大鼠为对照组,给予普通饲料饲养。25周后,筛选高脂饲料组中体重、血压均超过(≥)对照组平均值25%的63只大鼠纳入模型组。定期记录两组大鼠体重、血压,检测血脂及血清中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、瘦素(Lep)、内皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)水平,观察主动脉、心、肝、肾等靶器官形态。2.加味半夏白术天麻汤改善肥胖性高血压的药理学研究:33只模型组大鼠随机分为加味半夏白术天麻汤高剂量组(8只,HBBTMD组,9.2 g?kg-1?d-1),加味半夏白术天麻汤低剂量组(8只,LBBTMD组,4.6 g?kg-1?d-1),替米沙坦组(8只,TEL组,3.4 mg?kg-1?d-1),模型组(9只,生理盐水2ml?d-1),与对照组(10只,生理盐水2ml?d-1),共灌胃12周,定期记录检测大鼠血压、体重。12周后,大鼠麻醉后,取血、下丘脑、主动脉及内脏脂肪组织。检测大鼠血清血脂、Lep、AngⅡ、NPY及NO的含量。HE染色观察各组大鼠脂肪组织及主动脉组织形态。免疫组织化学染色法观察大鼠下丘脑及主动脉中瘦素受体(Lep R)及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的分布。RT-PCR检测大鼠下丘脑及主动脉JAK2、STAT3、SOCS3、Lep R及AT1R的m RNA表达改变。Western Blot法检测大鼠下丘脑中JAK2、STAT3、SOCS3、Lep R及AT1R的蛋白表达含量。3.JAK2/STAT3是加味半夏白术天麻汤发挥中枢调节药效的主要作用通路的验证实验:通过对大鼠第叁脑室注射AG490(JAK2特异性拮抗剂),阻断下丘脑JAK2/STAT3信号转导通路,观察推测加味半夏白术天麻汤是否主要通过作用于JAK2/STAT3通路发挥药效。12只HBBTMD组大鼠随机分为AG490+HBBTMD组(6只),HBBTMD组(6只);12只模型组大鼠随机分为AG490+模型组(6只),模型组(6只);AG490+HBBTMD组与AG490+模型组第叁脑室注射2μmol/ml AG490溶液5μl,HBBTMD组与模型组第叁脑室注射生理盐水5μl。2h后麻醉大鼠取下丘脑,Western Blot检测下丘脑JAK2、STAT3及SOCS3的蛋白表达含量。结果:1.肥胖性高血压大鼠模型的建立:经高脂饲料饲养25周后,与对照组相比,模型组体重、血压显着升高(P<0.05),TC、LDL-C明显升高(P<0.05),TG、HDL-C无明显变化(P>0.05)。模型组的AngⅡ、Lep和ET-1显着升高(P<0.05),NO显着下降(P<0.05)。可观察到模型组大鼠脂肪细胞体积明显增大,主动脉重塑,心肌细胞肥大样变,肝细胞脂肪样变及部分肾小球坏死。2.加味半夏白术天麻汤改善肥胖性高血压的药理学研究:经药物干预12周后,各组肥胖性高血压大鼠的血压体重均有不同程度的下降,其中,HBBTMD组体重、血压显着下降(P<0.05)。HBBTMD组与LBBTMD组的TC、LDL-C下降(P<0.05),HBBTMD组血清循环AngⅡ、Lep和NPY水平显着下降(P<0.05),NO显着升高(P<0.05)。HE染色观察HBBTMD组的脂肪细胞体积减小,高血压主动脉重塑程度显着改善。免疫组化显示HBBTMD组下丘脑及主动脉AT1R分布密度显着减少(P<0.05),下丘脑Lep R分布密度增加(P<0.05),主动脉Lep R分布密度减少(P<0.05)。RT-PCR显示HBBTMD组和LBBTMD组下丘脑的Lep R、JAK2、STAT3的m RNA表达量显着上升(P<0.05),SOCS3及AT1R的m RNA表达量显着下降(P<0.05)。HBBTMD组和LBBTMD组主动脉的Lep R、JAK2、STAT3、SOCS3及AT1R的m RNA表达量显着下降(P<0.05)。HBBTMD组下丘脑的JAK2、Lep R、STAT3的蛋白表达量显着上升(P<0.05),SOCS3及AT1R的蛋白表达量显着下降(P<0.05)。提示加味半夏白术天麻汤可能通过调节下丘脑功能、改善机体瘦素抵抗,发挥降压减肥的功效,其药理作用与JAK2/STAT3信号通路关系密切。3.JAK2/STAT3通路是加味半夏白术天麻汤发挥中枢调节药效的主要作用通路的验证实验:模型组大鼠在第叁脑室注射AG490后,下丘脑JAK2及STAT3蛋白的表达几乎被完全阻断(P<0.05)、SOCS3的蛋白表达显着升高(P<0.05);HBBTMD组大鼠在第叁脑室注射AG490后,下丘脑JAK2及STAT3蛋白的表达量急剧显着下降(P<0.05),SOCS3蛋白的表达量显着上升(P<0.05),但是仍然比模型组及AG490+模型组大鼠JAK2及STAT3蛋白的表达量略高(P<0.05),SOCS3蛋白的表达量略低(P<0.05)。结果提示JAK2/STAT3通路可能不是加味半夏白术天麻汤发挥中枢调节的唯一作用通路,但确是其发挥药效的最主要作用通路之一。结论:加味半夏白术天麻汤可以降低肥胖性高血压的大鼠的体重、血压、血脂及血清AngⅡ、Lep、NPY水平,升高血清NO水平。通过对肥胖性高血压大鼠下丘脑和主动脉的m RNA和蛋白质表达分析,推测其机制与其改善机体瘦素抵抗密切相关。经证实,加味半夏白术天麻汤可以有效通过激活下丘脑中JAK2/STAT3途径,抑制SOCS3的表达,因此,推测JAK2/STAT3信号转导通路是加味半夏白术天麻汤发挥改善选择性瘦素抵抗、降压减重药效的主要作用通路。
参考文献：
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[4]. 补益肾气法对自发性高血压大鼠动脉弹性影响的研究[D]. 涂晓龙. 山东中医药大学. 2009
[5]. 人类心房利钠肽基因导入对自发性高血压大鼠血压及其靶器官损害影响的实验研究[D]. 刘延波. 吉林大学. 2007
[6]. 叁草降压汤对人脐静脉内皮细胞一氧化氮和内皮素-1生成的影响[D]. 胡丽娜. 北京中医药大学. 2012
[7]. 高血压病中医证型与心血管危险因素的相关性研究[D]. 刘庆萱. 山东中医药大学. 2016
[8]. 冠心病合理用药指南(第2版)[J]. 佚名. 中国医学前沿杂志(电子版). 2018
[9]. 基于瘦素介导的下丘脑JAK2/STAT3通路探讨加味半夏白术天麻汤改善肥胖性高血压的机制研究[D]. 吴赛. 山东中医药大学. 2016
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