翟世伟[1]2004年在《大鼠原位小肠移植术后早期肠运动功能障碍的机理研究》文中研究说明目的：为探讨小肠移植术后早期移植肠运动功能障碍的机理，明确COX-2在大鼠早期移植肠功能障碍中的作用和机制，了解早期移植肠运动功能障碍的表现，同时寻求有效的治疗方法。 方法：本课题利用显微外科技术，建立了大鼠原位全小肠移植模型。为了避免免疫排斥和抗排异药物对移植物的复杂影响，采用同系大鼠(BN→BN)间移植。在稳定的小肠移植模型基础上，采用了RT-PCR的方法观察供肠及术后早期不同时段—术后0h、术后12h、术后24h和术后48h移植肠肌层中炎症反应的关键调控因子—COX-2 mRNA的表达情况。并采用LAB-SA免疫组化染色法了解COX-2蛋白的表达及其在肠肌层中的细胞定位，本课题也首次使用透射电子显微镜观察移植肠肌层的变化，以期了解早期移植肠运动功能障碍的机理。同时结合对正常小肠和48h移植肠肌条机械活动的体外试验，在体小肠传输实验和移植肠运动功能的放射学评价，明确早期移植肠运动功能障碍存在的特征。最后通过小肠传输实验观察了具有COX-2选择性抑制作用的中药青藤碱对早期移植肠运动功能障碍的疗效。 结果： 1．通过学习，熟练掌握大鼠原位全小肠移植技术，建立稳定的小肠移植模型。在正式实验阶段，供体手术时间平均为41.5±1.5min。受体手术时间平均为88.2±10.5min，其中吻合静脉时间平均为22.2±3.8min，吻合动脉平均时间为16.0±2.8min，吻合肠管(两个吻合口)平均时间为28±4.4min。正式实验阶段60例大鼠原位小肠移植，手术成功率86.7％。静脉血栓、腹腔出血和腹腔感染仍是大鼠原位小肠移植模型的主要死亡原因。大体病理观察术后24h可见移植肠轻度扩张，周径增粗，肠壁水肿，外观呈玫瑰色，48h上述表现更为明天津医科大学博士学位论文中文摘要显。常规病理HE染色见术后12h小肠粘膜绒毛肿胀明显，术后24h小肠粘膜大量剥落。术后48h小肠粘膜再生明显，术后96h小肠粘膜的绒毛高度等己接近正常。所有手术成功的大鼠均在术后3h内清醒，6h左右恢复进水，24h内恢复进食。术后72h大鼠体重平均减少5%左右。 2.RT-PCR法检测小肠移植手术中供肠及术后不同时段小肠肌层COX一2mRNA的表达结果显示:COX一2 mRNA在正常情况下只有微量表达;供肠组COX一2mRNA的表达量迅速上调:移植术后0h，COX一2 mRNA的表达进一步上调，在术后24h COX一2基因的表达达到高峰，然后迅速下调。免疫组化对小肠COX一2蛋白的检测表明:正常对照组小肠肌层中寄居有巨噬细胞，COX一2蛋白无表达或仅有微弱表达;术后24h肠肌层多个单核一巨噬细胞的胞浆里有COX一2蛋白的强阳性表达，正常小肠和术后24h肠肌层COX一2蛋白的表达存在着显着差异。本实验也首次发现粘膜层也存在着COX龙蛋白的表达，表达定位在粘膜上皮细胞和粘膜固有层白细胞。小肠平滑肌细胞本身并无COX一2蛋白的表达。透射电镜观察大鼠小肠移植术后早期各阶段小肠肌层的超微形态改变发现:术后0h肌层巨噬细胞活化，炎症细胞浸润，免疫应答反应存在，同时见到小肠平滑肌细胞损害征象。术后24h上述表现更为明显，平滑肌细胞的损伤程度也较0h组更为严重。 3.小肠环行肌条的体外收缩实验表明:小肠移植术后48h移植肠肌条的自发性收缩力与正常小肠肌条比明显降低，48h移植肠肌条对乙酞胆碱刺激的反应明显性也较正常小肠减低。小肠传输实验显示:移植术后48h小肠的传输功能明显延迟。灌胃钡剂造影的放射学观察也直观地显示:小肠移植术后移植肠传输功能明显降低，胃排空延迟。 4.小肠传输实验观察具有COX一2选择性抑制作用的中药青藤碱对移植肠运 动功能障碍的影响的实验表明:小肠移植手术中供受体同时给青藤碱可明显改 善小肠传输功能。 结论: 小肠移植手术造成术后早期移植肠肌层COX一2基因和蛋白的渐进性高表天津医科大学博士学位论文中文摘要达，表现为肠肌层强烈的分子和细胞的炎症反应，从而直接或间接地影响了小肠的运动功能。具有COX一选择性抑制作用的中药青藤碱供受体同时给药对改善移植肠运动功能具有显着作用。
冯舟[2]2005年在《iNOS对移植大鼠小肠运动功能及排斥反应作用的研究》文中认为探讨实验性小肠移植术后诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)对移植肠运动功能的影响及在排斥反应中的作用,并观察L-N~6-(1-亚氨乙基)-赖氨酸(L-NIL)、青藤碱(sinomenine, SIN)对iNOS的阻断作用。 第一部分 大鼠小肠移植模型的建立 目的:建立稳定的原位及异位大鼠小肠移植模型。方法:利用显微外科技术,构建大鼠小肠移植模型。结果:实验阶段施行原位小肠移植47次,异位移植55次,手术成功率分别为85.10%(40/47)、87.27%(48/55)。结论:经过短期的显微外科训练,可建立稳定的原位及异位大鼠小肠移植模型,为进一步研究移植免疫反应、移植肠功能奠定良好的基础。 第二部分 iNOS在同系大鼠移植肠组织中表达的研究 目的:检测同系大鼠异位小肠移植手术不同时段移植肠iNOS的表达。方法:按实验过程分为8组,包括正常小肠组(开腹后切取)、冷保存供肠组以及行移植术后0h、1d、2d、3d、4d、7d组。取各组小肠肠段采用半定量RT-PCR及免疫组化方法检测分析iNOS mRNA及iNOS蛋白表达的变化,并行病理组织学检查。结果:1.冷保存供肠炎性损伤病理分级较正常小肠组织高(P<0.05),至术后1d病理分级最高(P<0.05),然后渐降低,至术后7d病理分级与正常组织相近(P>0.05)。2.iNOS mRNA及蛋白在正常小肠组织只有极微量表达,冷保存供肠iNOS表达迅速上调(P<0.05),术后1d移植肠iNOS表达水平达到高峰(P<0.05),然后迅速下调,术后7d移植肠iNOS表达水平接近正常小肠组织(P>0.05)。3.免疫组化检测发现移植肠肌层及
董光龙[3]2001年在《一、大鼠小肠移植耐受中调节性T细胞作用及TLSF_(JM)免疫抑制作用的机理研究》文中研究指明目的 建立适合小肠移植动物实验研究的高成功率的大鼠小肠移植模型。方法 用小儿用5F心导管用鞘管作为供体门静脉-受体左肾静脉吻合袖套，部分腹主动脉作为供体肠系膜上动脉-受体腹主动脉端侧吻合袖套的双cuff技术重建移植物血液供应。选用供体回肠为主移植肠15cm于受体大鼠左下腹行双造口。结果 移植物平均缺血时间为12.5±1.2分钟，较未行双cuff组16.1±1.5分钟显着缩短；技术失败率在为5％（1/20），较未行双cuff技术组30％（6/20）显着降低；应用免疫抑制剂FK506后，无论在行双cuff或未第叫军医人学博十学位论义 中义摘要行Cliff组均不影［114手术的成功率，但应用FK506后大鼠体重下降显着小于未川厂＊506组。结论采用SF小儿心导管用鞘管制作的D’16／［脉－人肾静脉Ct；付，材料易得，管壁潜、内径大、硬度适当弹性好不变形。管壁外用手术用尖刀片反复刻划后，结扎线不易发生脱落；采用双CUff技术，极大地缩短了下术时间，显着提高了手术成功率；异位移植及移植肠双口腹壁造口，不破坏受体原有肠道连续和完整性，减少污染，缩短手术时问。有利于通过腹壁移植肠造口观察排斥反应，进行病理组织学检查和对移植肠功能进行研究；免疫抑制剂FK506有效抑制大鼠同种小肠移植的排斥反应，但不影响手术的成功率，且较发生排斥反应大鼠减少体重的丢失。
苏丹[4]2007年在《小承气合剂早期灌服促进结肠吻合术后胃肠动力恢复的安全性研究》文中指出目的：术后胃肠动力障碍普遍存在于各类腹部手术后，而胃肠动力的长时间抑制会出现一系列并发症，影响机体的恢复。既往由于担心过早促胃肠动力恢复会影响吻合口安全，故主张术后早期采用禁食、胃肠减压等期待疗法，待胃肠功能自然恢复。但近年来的研究证明：术后早期促胃肠动力恢复有利于机体的恢复；术后早期肠内营养更符合自然生理要求，能避免禁食、全肠外营养带来的一系列不良反应；并且，早期肠内营养安全可靠，并不增加吻合口瘘、腹腔感染等严重并发症的风险。本课题拟结合实验及临床研究，选择结肠端-端吻合造模大鼠及结肠吻合术后的患者作为研究对象，术后早期肠内给予在经方小承气汤基础上加入丹参组成的小承气合剂，观察小承气合剂早期灌服促术后胃肠动力恢复的效果，同时评价此方法的安全性。方法：分动物实验和临床研究两部分。(1)动物实验部分：用wistar大鼠造成结肠端-端吻合术后动物模型，随机分为实验组及对照组，实验组于术后第6小时开始小承气合剂灌胃，对照组灌服净化自来水，全部动物于术后第二、叁天早晨继续灌胃两天，每天一次。记录实验动物存活情况，有死亡动物应立即剖腹探查寻找死亡原因；术后第3、7、14天各取两组10例样本剖腹探查，观察吻合口愈合情况，行腹腔粘连指数评分；行吻合口压力负载试验，对比两组数据，得出结论。(2)临床研究部分：选择符合纳入标准的肠吻合术后患者作为研究对象，随机分为实验组和对照组。实验组在常规处理的基础上，于术后第4个小时起鼻饲灌服小承气合剂，每日服2剂，直至术后第一次排便停止。对照组按常规处理，禁食。观察患者对鼻饲灌服小承气合剂的耐受情况；住院期间有无吻合口瘘等严重并发症发生；记录肠鸣音恢复时间，第一次排气、排便时间。对比两组数据，得出结论。结果：(1)动物实验部分全部试验动物共死亡3只。其中实验组手术当天死亡1只，死亡原因为麻醉药过量，对照组术后第2天死亡1只，死亡原因为原发性肠瘘、腹腔感染；术后第3天死亡1例，死亡原因为肠梗阻。其余病例均存活至完成实验。除死亡病例外，其余大鼠均未见肠瘘及明显腹腔感染。吻合口粘连评分结果提示实验组吻合口粘连程度要小于对照组。在一定压力水压负载下，两组均无吻合口破裂情况出现。(2)临床研究部分实验组所有病例均能耐受鼻饲灌服小承气合剂，顺利完成实验。住院期间，对照组有1例于术后第7天出现肠梗阻，经保守治疗后治愈。实验组肠鸣音恢复时间、术后首次排气、排便时间均要早于对照组。结论：(1)结肠吻合术后早期灌服小承气合剂是安全的。大多数患者可以耐受，且并不增加吻合口瘘、腹腔感染、死亡的风险。(2)结肠吻合术后早期灌服小承气合剂能促进胃肠动力的恢复。能明显提早肠鸣音恢复、首次排气、排便的时间。(3)结肠吻合术后早期灌服小承气合剂能减轻术后肠粘连发生的程度。
方欢[5]2013年在《嗜酸乳杆菌对重型颅脑损伤后肠ICC和Cx43影响的实验研究》文中研究说明重型颅脑损伤(severe head injury, SHI)后因中枢神经系统的受累、缺血再灌注的打击以及颅内压升高等因素，使得胃肠动力障碍(gastrointestinal motility disturbances，GMD)的发生率高达80%以上，较其他创伤所致的GMD出现时间早，程度更重，严重影响救治效果和预后。临床上以肠动力不足更为常见。因此，有效恢复SHI后的肠动力有益于改善患者的临床结局。SHI后的肠动力不足主要表现为肠蠕动减慢或消失，迁移型复合波减少等。近年研究表明，Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal，ICC)是胃肠运动的起搏器及基本功能单位，其网络受损或缺失会导致胃肠动力异常。缝隙连接是介导胃肠平滑肌细胞和ICC间电化学信息交流的特殊通道。连接蛋白Cx43是此通道的结构基础，在ICC胞体和突起上均有表达，其表达异常亦与胃肠动力障碍密切相关。提示，维护肠道ICC网络及缝隙连接对扭转SHI后肠道动力不足，减少并发症的发生具有重要意义。益生菌是具有双向调节胃肠动力且无药物毒副作用的一种微生态制剂，可以改善感染、功能性消化不良等疾病引起的胃肠动力不足[1-2]。本课题组研究发现，益生菌不仅能使SHI患者的排便时间显着提前；还可促进伤后大鼠的胃排空，改善肠道菌群失调等。但益生菌通过何种途径对创伤后胃肠动力进行的调控机制尚不清楚，因此有必要对其进行深入研究。为探讨其作用机理，本实验选用益生菌中重要的单菌之一嗜酸乳杆菌，采用自制圆柱套杆撞击器，使用改良的自由落体撞击法建立SHI后肠动力障碍小鼠模型，通过观察SHI后小鼠末端回肠离体肌条运动，检测肠肌丛ICC数量，观测小肠组织Cx43蛋白表达的变化，分析ICC、Cx43与SHI后发生肠动力不足的关系；同时通过观察嗜酸乳杆菌干预后对上述指标的影响，探讨嗜酸乳杆菌对小肠肌条收缩、ICC和Cx43的调节作用及可能机制，以期为嗜酸乳杆菌的临床应用提供理论依据。本研究数据均以均数±标准差(ˉx±s)表示，统计学处理采用SPSS17.0统计软件包进行单因素方差分析和独立样本T检验，P＜0.05表示差异具有显着性统计学意义，P＜0.01表示差异具有非常显着性统计学意义。第一部分重型颅脑损伤小鼠肠动力障碍模型的建立目的：成功建立SHI后肠动力障碍的小鼠模型，适用于SHI后肠动力不足的研究；且模型可操作性强，稳定性、重复性好，比现有颅脑损伤模型致死率低。方法：60只健康雄性C57BL/6小鼠(体重21±3g)，随机数字表法分为假伤组和创伤组，采用自制圆柱套杆撞击器对小鼠致伤，假伤组只开骨窗不致伤。伤后1h、6h、1d、3d、7d检测脑含水量，神经行为学变化，小肠推进率；光镜下观察脑、肠组织的病理学改变，判定损伤后是否存在肠动力障碍以构建SHI后肠动力障碍模型。结果：创伤组小鼠打击后即刻出现原发性昏迷，伤后存在肢体活动受限，2～4h清醒后反应迟钝，1h、6h、1d、3d、7d的神经学评分较假伤组均有显着的统计学意义(P<0.01)；与伤后1h比较，伤后3d、7d均有不同程度的改善(P<0.05，P<0.01)；脑含水量在伤后1h即增加(P<0.05)，6h增加明显(P<0.01)，24h达峰值，3d后逐渐下降，7d后接近正常；脑组织病理变化符合重型颅脑损伤的变化过程。同时在致伤后1h，致伤组小鼠小肠推进率即下降(P<0.05)，6h达到最低值，伤后1d小肠推进率持续下降(P<0.01)；肠道病理亦显示出现急性炎症、出血和血管扩张等改变。以上特征提示该模型建立成功。结论：制备的SHI后肠动力障碍小鼠模型，适用于损伤后肠动力障碍的实验研究。第二部分嗜酸乳杆菌对重型颅脑损伤后肠ICC和Cx43影响的实验研究目的：阐明重型颅脑损伤后肠动力障碍小鼠ICC及细胞连接蛋白Cx43的变化；探讨嗜酸乳杆菌对SHI后肠动力不足的改善作用，初步探明嗜酸乳杆菌保护损伤后肠运动功能的机理。方法：72只清洁级雄性C57BL/6小鼠(体重20±2g)用第一部分方法致伤，按随机数字表法分为假伤组、创伤组和嗜酸乳杆菌组(嗜酸乳杆菌干预的创伤组)，每组8只。各组均自由饮食，每天灌胃一次。嗜酸乳杆菌组于伤后6h将嗜酸乳杆菌(菌株为YIT2004，由上海信谊制药厂馈赠)溶于培养基中灌胃，每只小鼠喂养量不低1x1010cfu/d；假伤组、创伤组灌同体积培养基溶液。于伤后3、7、14d取材，通过多通道生理信号采集处理系统监测小鼠小肠离体平滑肌收缩运动，观察肌条收缩频率、幅度、张力的变化。免疫荧光法检测ICC和Western blot法检测Cx43的变化。结果：1.小肠离体肌条收缩运动①假伤组各时相点肌条收缩模式规律，呈正弦波，波形光滑、连续。②伤后3d、7d，创伤组肌条运动与假伤组比较，平滑肌收缩幅度减弱、张力降低及频率减少，差异有统计学意义(P<0.01)，且收缩节律紊乱，波动时高时低，甚至波幅消失，且放大相同倍数后波形多锐化；14d时频率与假伤组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。③嗜酸乳杆菌组伤后3d、7d肌条收缩张力及频率较假伤组有不同程度紊乱(P<0.05)，但相对创伤组，3d肌条收缩张力具有统计学差异(P<0.05)。同时其运动模式规律，收缩幅度和频率均有明显提高(P<0.01)，且放大后波形连续，多数波形光滑，少数呈尖锐化。2.小肠Cajal间质细胞(ICC)的形态与数量①假伤组，小肠肠肌丛ICC呈长梭型或星状，细胞核大且DAPI染色清晰，有2～3个长分支，并与肌纤维或神经纤维平行走行，相互间形成完整网络样结构，网络密集。②创伤组，各时相点的末端回肠ICC kit阳性细胞数量减少，显着低于假伤组(P<0.01)，ICC分支变少且网络稀疏，相互间以及与平滑肌间出现较大的细胞间隙；③而嗜酸乳杆菌组3d的末端回肠ICC细胞数量明显少于假伤组(P<0.05)，14d仍未达到假伤水平；但与创伤组相比，嗜酸乳杆菌组3d、7d、14d的细胞数量均显着增多(P<0.01)，网络明显增多、密集。3.肠组织缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达创伤组各时相点与假伤组比较，Cx43蛋白表达量下降，差异均有统计学意义(P<0.01)；嗜酸乳杆菌组相对假伤组，虽然7d蛋白表达量有显着下降(P<0.01)，但与创伤组比较，3d、14d蛋白表达量均明显高于创伤组(P<0.01，P<0.05)。结论：1.重型颅脑损伤后3d即出现肠道平滑肌自主收缩运动紊乱，收缩幅度和频率降低，收缩运动减弱。2.重型颅脑损伤后肠肌丛ICC发生损伤，其数量减少，网络结构被破坏，且损伤后修复至少需要14d；重型颅脑损伤后肠组织Cx43表达减少，细胞连接受损。3.肠肌丛ICC数量减少和网络受损，以及Cx43的表达缺失或减少，是造成肠神经-ICC-平滑肌网络结构电信号传递障碍，引起肠道收缩模式紊乱，导致脑损伤后动力障碍的可能机制之一。4.嗜酸乳杆菌能改善重型颅脑损伤后肌条幅度降低，频率减少，张力降低而导致的收缩性减弱；降低ICC数量减少的程度，增加缝隙连接蛋白Cx43的表达，修复胃肠道基本功能单位的网络状结构，使其发挥正常作用。5.嗜酸乳杆菌能改善重型颅脑损伤后肌条收缩模式紊乱，提高肠动力，可能与保护了ICC的功能或是减轻ICC的损伤程度，恢复其数量及网络结构有关；同时也与增加伤后连接蛋白Cx43的蛋白表达，恢复伤后细胞间连接有关。
参考文献：
[1]. 大鼠原位小肠移植术后早期肠运动功能障碍的机理研究[D]. 翟世伟. 天津医科大学. 2004
[2]. iNOS对移植大鼠小肠运动功能及排斥反应作用的研究[D]. 冯舟. 天津医科大学. 2005
[3]. 一、大鼠小肠移植耐受中调节性T细胞作用及TLSF_(JM)免疫抑制作用的机理研究[D]. 董光龙. 第四军医大学. 2001
[4]. 小承气合剂早期灌服促进结肠吻合术后胃肠动力恢复的安全性研究[D]. 苏丹. 广州中医药大学. 2007
[5]. 嗜酸乳杆菌对重型颅脑损伤后肠ICC和Cx43影响的实验研究[D]. 方欢. 第叁军医大学. 2013