（广州中医药大学中药学院 广东 广州 510000）
【摘要】目的：研究葡聚糖微型凝胶柱测定盐酸川芎嗪脂质体包封率的方法。方法：以洗脱液的吸光度为指标,通过对比空白脂质体与盐酸川芎嗪的洗脱速度以确定测定盐酸川芎嗪脂质体包封率的方法条件。结果：于葡聚糖微柱加入脂质体3000r/min,3min离心,使样品进入微柱中，再重复于柱顶加入0.1ml纯化水并以3000 r/min离心3min5次，即可去除脂质体中的游离药物。结论：该法操作简便，重复性好，可以达到将脂质体与游离药物很好的分离的目的，用作盐酸川芎嗪脂质体的分离并测定包封率。
【关键词】盐酸川芎嗪;脂质体;包封率;微柱离心
【中图分类号】R943 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）36-0239-02
脂质体包封率是评价脂质体的重要指标,中国药典2010版脂质体制剂的指导原则指出脂质体包封率不得小于80%。测定脂质体包封率的方法有很多,一般为首先分离游离药物,再测定被包封药物或游离药物,从而计算出包封率。分离脂质体与游离药物可采用微柱离心法、超速离心法、透析法、凝胶柱层析法、超滤法、鱼精蛋白沉淀法等[1]。各种方法各有优劣，但葡聚糖微型凝胶柱先后被 Fry [2]、New[3]和 ElMaghraby[4]采用，这种方法不仅洗脱速度快(一般为几分至十几分钟),而且大大减少葡聚糖凝胶的用量,微柱仅需葡聚糖凝胶约0. 5 g,而常规柱用量为5～8 g。
1.仪器与材料
SpectraMax i3x 多功能酶标仪,SartoriusCP225D型电子分析天平，Sephadex G 50葡聚糖凝胶,大豆磷卵磷脂（阿拉丁）,胆固醇(阿拉丁),盐酸川芎嗪(成都瑞芬生物科技有限公司),维生素E（阿拉丁），十八胺（阿拉丁）,甲醇(分析纯，广州试剂厂)其他试剂(分析纯,市售)。
2.方法
2.1 分离脂质体与盐酸川芎嗪的建立
2.1.1供试品制备空白脂质体的制备：精密称取大豆卵磷脂100mg、胆固醇14.28mg、十八胺10mg、维生素E10mg于100ml圆底烧瓶，加入5ml无水乙醇超声溶解，于45℃水浴中，减压旋转蒸发30min，形成均匀薄膜；向圆底烧瓶中加入5ml纯化水常压旋转水化1h后置于冰水浴中超声，并过0.2μm纤维滤膜整理，即得空白脂质体。
盐酸川芎嗪溶液的制备：精密称取盐酸川芎嗪20mg置于10ml容量瓶，加纯化水定容，即得。
2.1 2G-50葡聚糖凝胶微柱的制备去一次性1ml注射器，弃去活塞和针头，以适量脱脂棉填入管底，置13mm*100mm试管中，以3000r/min离心3min脱水，凝胶体积缩减，形成与管壁分离的凝胶柱，重复装填，离心，至0.90～1.00ml刻度即可。
2.1.3操作步骤精密量取0.1ml空白脂质体与盐酸川芎嗪溶液于葡聚糖凝胶微柱柱顶各三份，以3000r/min离心3min使样品进入凝胶柱中，再分别于柱顶加入0.1ml纯化水，以2000r/min离心3min，重复加水、离心10次，收集每次的洗脱液以甲醇定容至1ml，取0.5ml至于96孔酶标板中，以甲醇：水为9：1为空白对照于290nm处测定吸光度，并绘制吸光度洗脱曲线（图1）。
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图1
3.结果与讨论
从图1看出以2000r/min离心3min，经7次洗脱才把脂质体完全洗脱下来，但盐酸川芎嗪也接近洗脱下来，空白脂质体与盐酸川芎嗪的分离度不足；以3000r/min离心3min3-4次足以把空白脂质体完全洗脱，且第7次后盐酸川芎嗪才被洗脱出，两个样品的分离度比较好；4000r/min离心3min的洗脱曲线则显示出空白脂质体一开始就被洗脱出来，但考虑到微柱装在玻璃试管中离心，离心转速不宜过大以免玻璃试管碎裂，最终选择使用葡聚糖凝胶微柱以3000r/min离心3min为分离盐酸川芎嗪脂质体与游离盐酸川芎嗪的实验方法。本方法既能利用葡聚糖凝胶柱的洗脱性能，又可减少葡聚糖的用量，增加洗脱效率。，
【参考文献】
[1] ZUIDAM N J,de VREH R,CROMMELIN D J A.Characterization of liposomes[M]// ORCHILIN .Liposomes:A Practical Approach.New York:OxfordUniv Press,2003:31- 78
[2] Fry DW,White JC,Goldman ID.Rapid separation of lowmolecularweigh solutes from liposomeswithoutdilution[J].JAnalBiochem,1978,90:809.
[3]New RR,Liposomes C:A practical approach[M].OxfordUniversity Press,2002.342.
[4]ElMaghrabyGM,W illiamsAC,Barry BW.Skin delivery of5-fluorouracil from ultradeformable and standard liposomesin-vitro[ J].J Pharm Pharmacol,2001,53:1069.
论文作者:陈俊杰
论文发表刊物:《医药前沿》2019年36期
论文发表时间:2020/2/25
标签：盐酸论文; 凝胶论文; 聚糖论文; 脂质体论文; 川芎嗪论文; 阿拉丁论文; 空白论文; 《医药前沿》2019年36期论文;