高基民, 郑仲承, 林来新妹, 王小宁, 刘新垣[1]1996年在《白细胞介素—2—绿脓杆菌外毒素融合蛋白的分高纯化及其复性研究》文中提出表达的白细胞介素－２－绿脓杆菌外毒素（ＩＬ－２－ＰＥ）融合蛋白以包含体形式存在于宿主菌中，为分离纯化表达产物提供了方便，但因需进行复性，也增加了后处理的难度．我们采用４ｍｏｌ／Ｌ尿素、０．５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的１×ＰＢＳ洗涤包含体两遍，再经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００分子筛及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ阴离子交换柱层析后，获得的融合蛋白纯度可达９０％～９５％。此外，我们从ＧＳＳＧ浓度、Ｌ－精氨酸浓度、复性蛋白质的起始浓度、复性液的ｐＨ值、复性温度及复性时间等参数入手，系统地研究了融合蛋白的复性条件，探索到了ＩＬ－２－ＭＥ４０和ＩＬ－２－ＰＥ６６４Ｇｌｕ融合蛋白复性的最适条件。
胡志明, 林来兴妹, 周明乾, 陈泽洪, 王小宁[2]2002年在《重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的纯化及复性》文中进行了进一步梳理目的探讨该所发明的新方法对重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素(IL2-PE664Glu)融合蛋白进行纯化与复性的效果。方法采用该所发明的新方法提纯包涵体,包涵体复性后,样品经DEAE-SepharoseFF离子交换层析,获得融合蛋白纯品。结果获得的具有生物学活性的融合蛋白纯度达到95%,复性回收率为80%。结论此包涵体分离纯化技术简便、实用,可为中试研究和规模化生产提供基础。
高基民, 黄洪莲, 郑仲承, 徐舲飞, 刘新垣[3]1995年在《人白细胞介素－2－绿脓杆菌外毒素融合蛋白的初步研究》文中研究说明白细胞介素－２：绿脓杆菌外毒素；融合蛋白；原核表达；细胞毒活性
高基民[4]1994年在《白细胞介素Ⅱ-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的研究》文中提出正常的静息T、B淋巴细胞和单核细胞表面不含高亲和力IL-2R。只有激活后才表达该受体。然而，某些淋巴瘤／白血病、自身免疫性疾病和同种异体移植物排斥反应中，一些异常的T、B和单核细胞则表达高水平的高亲和力IL-2R；并且，这些异常的细胞对相应疾病的发生发展有决定性的作用。此外，HIV-1感染CD_4~+淋巴细胞后，只能在有高亲和力IL-2R表达的激活态T细胞内复制，而在静息T细胞内则处于潜伏状态。 绿脓杆菌外毒素蛋白是613肽的单链蛋白，分子量66KD。该蛋白有三个主要结构功能区(domain)：细胞结合区，即Domain Ⅰa(1-252aa)，识别其特异的细胞受体，并与之结合；膜转位区，即DomainⅡ(253-364aa)，为毒素跨越细胞膜进入胞浆所必需；ADP-核糖基化活性区，即Domain Ⅲ(400-613aa)，通过裂解胞浆内NAD~+释放出ADP-核糖，后者再共价连接于延长因子-2(eEF-2)上令其失活，从而抑制细胞的蛋白质合成，最终导致靶细胞死亡。此外，若将PE的C末端Arg-Glu-Asp-Leu-Lys(即REDLK)突变成KDEL，突变子的细胞毒效
高基民, 黄洪莲, 王小宁, 徐舲飞, 郑仲承[5]1996年在《白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合基因的克隆及高效表达》文中指出利用聚合酶链式反应和寡核苷酸介导的定向诱变技术构建了白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素IL2-PE40、IL2-PE40KDEL、IL2-PE66~(4Glu)和IL2-PE66~(4Glu)KDEL融合基因的原核表达重组质粒,并实现了高效表达,表达产物占菌体总可溶蛋白的20％～30％。此外,由于这一表达质粒在IL-2cDNA与PE基因连接处引入了唯一的SmaⅠ位点,其5＇、3＇端分别含有唯一的EcoRⅠ、PstⅠ位点,因此可方便地用其它基因替换IL-2或PE基因而获得相应融合蛋白的表达质粒。
参考文献：
[1]. 白细胞介素—2—绿脓杆菌外毒素融合蛋白的分高纯化及其复性研究[J]. 高基民, 郑仲承, 林来新妹, 王小宁, 刘新垣. 生物化学与生物物理学报. 1996
[2]. 重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的纯化及复性[J]. 胡志明, 林来兴妹, 周明乾, 陈泽洪, 王小宁. 第一军医大学学报. 2002
[3]. 人白细胞介素－2－绿脓杆菌外毒素融合蛋白的初步研究[J]. 高基民, 黄洪莲, 郑仲承, 徐舲飞, 刘新垣. 生物化学与生物物理学报. 1995
[4]. 白细胞介素Ⅱ-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的研究[D]. 高基民. 第四军医大学. 1994
[5]. 白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合基因的克隆及高效表达[J]. 高基民, 黄洪莲, 王小宁, 徐舲飞, 郑仲承. 生物工程学报. 1996