朱文忠[1]2001年在《离体鼠工作心脏灌注模型中腺苷对缺血再灌注心脏能量底物代谢的影响》文中研究指明腺苷作为内源性核苷，是一个重要的代谢性中间产物。腺苷通过和细胞表面 特殊腺苷受体的相互作用在整个机体起到广泛的调节和控制作用。文献报道腺苷 有显着的心脏保护作用，但这一作用的确切机制众说纷坛，没有定论。近年来， 腺苷在心脏能量代谢中的作用引起广泛关注。能量缺乏时容易生成腺苷的现象提 示腺苷的心血管作用似乎是调节氧供与能量需求之间的平衡，这意味着心脏代谢活性与腺苷释放之间存在敏感的联系。本课题通过建立离体鼠工作心脏灌注模 型，在灌注葡萄糖和脂肪酸的条件下研究腺苷对缺血和再灌注期间心脏的机械功 能、外源性葡萄糖酵解、糖氧化、代谢产物含量以及心脏超微结构的变化；同时， 在预先经短暂缺血(而非缺血预适应)的心脏中研究腺苷对随后长时间缺血和再 灌注心脏糖酵解、糖氧化、庄生成、代谢产物含量和心脏超微结构作用的变化， 并研究了α肾上腺素能受体阻滞剂──酚妥拉明在缓解腺苷于这类心脏中不良 反应中的作用，为腺苷心脏保护作用机制的进一步研究提供一条思路。主要研究 内容、方法和结果如下： 一、离体鼠工作心脏灌注模型的建立采用Neely等报道的方法，用雄性Sprague-Dawley大鼠灌注Krebs-Henseleit 缓冲液(37℃，pH7.4，95%O2和5%CO2充分饱和)建立非再循环式的离体鼠 工作心脏灌注模型，同时保留Langendorff灌注系统，使该灌注装置成为双灌流 系统。该模型较好地模拟了在体心脏做功时的工作状态，使左心房前负荷保持在 1.5kPa，主动脉后负荷保持在10.7kPa。非再循环式的灌注方法使离体心脏避免 了长时间灌注带来的代谢产物堆积和实验参数测定基点不同的缺点，便于对多种 干扰因素进行综合判断，使用该模型顺利地完成了后续实验。 二、腺苷对离体心脏缺血和再灌注期间糖代谢和机械功能的影响 在灌注改良Krebs-Henseleit缓冲液(含游离钙2.5mM、葡萄糖11mM、预先用3%牛血清白蛋白溶解结合的脂肪酸1.2mM、胰岛素500μU/ml)的离体鼠工 二 博士学位论文 中文摘要 作心脏中，缺血前或再灌注时使用腺昔O P M）显着改善了经 60ndn低流量 缺血（冠脉流量打）心脏机械功能的恢复（分别从1二．31士7．68o／增加至 7o．58士2一84％和6905士二28巴％）；缺血期间的糖氧化被抑制（从o．35士〕则到 0刀8士0刀2 n moVmin·g干重X这一抑制作用不受腺昔的影响，再灌注期间糖 氧化恢复至认29士0刀3 n moUmin·g干重，此时使用腺昔进一步增加了糖氧化 m．40士 0刀9 n moUmin·g千重入 缺血前使用腺昔抑制了不受缺血影响的糖酵 解的速率（从 4．77士0．66至 2．64士0．76 n moymin·g干重人缺血前或再灌注时 使用腺苦均使再灌注期间的糖酵解受到抑制（分别为2．77土1．03和L73土o．71 moUnun·g干重，对照组为 4刀7士045 u moUndnY干重X腺昔对糖代谢的作用 降低了缺血和再灌注期间来源于糖代谢的庄生成：腺苦增加了缺血后再灌注期 间的冠脉流量，这可能和心脏机械功能的增加有关，缺血期间冠脉流出液乳酸含c 量显着增高（从2．08土0．34到22．42士7．56mmo oo），再灌注后有所降低（8．65士 3，43mmow），缺血前和再灌注时使用腺昔进一步降低了缺血期间冠脉流出液的 乳酸含量（分别为5．gi士1．93和365土14lmmow），反映了这些心脏中糖氧化 作用的增强；腺苦保存了缺血期间的心肌糖原，降低了心脏摄取葡萄糖，但并不 增加缺血期间的糖原分解，再灌注期间腺昔抑制葡萄糖的摄取。 叁、AIS心脏中腺昔对缺血后糖代谢和机械功能作用的转变 在经预先缺血应激（lS）——两段10min缺血继以sndn再灌注一一耗竭 糖原的心脏中，腺昔乃00 p M）刺激了糖酵解而非抑制糖酵解（从4．68士2．38，增至 5．92士 l．98 u moUmin·g干重），使庄的生成增加（从 8．64土 4．80到 10．70 士 4．18 n molimin·g干重L抑制了再灌注后心脏机械功能的恢复（恢复至缺血 前的16．46土2．96％，对照组为31．65土4．74％）。在灌注无底物（葡萄糖、脂肪酸） 灌注液以耗竭糖原（SFGD）的心脏中，药物治疗前的糖原含量与 lS心脏相似 （68．12士m．35和65．15士n65 pm叱干重），腺昔（500pM）抑制了有氧灌注 SFGD心脏中的糖酵解和庄生成。在SFGD心脏中，与未治疗心脏相比，长时 间缺血后的再灌注期间?
薛辉[2]2010年在《新型心脏保护液对心肌保护作用的实验研究》文中进行了进一步梳理心脏保护液目前已应用于心脏外科各种体外循环下心脏直视手术和心脏移植手术中,能够为心脏提供有效的心肌保护,极大地促进了心脏外科的发展。根据目前国内外在心脏手术中对心脏保护液的选择及对心脏保护液的研究进展,我们研制了新型的心脏保护液,并通过离体鼠心Langendorff模型及小型猪体外循环心脏直视手术模型将它和目前广泛应用于心脏手术中的HTK心脏保护液及St·ThomasⅡ心脏保护液进行了对比研究,旨在进一步研究心脏保护液的作用机制及最佳成份以提高心肌保护效果。本研究分为两部分,第一部分为通过建立离体鼠心Langendorff模型进行离体鼠心灌注-冷存-再灌注实验,模拟心脏移植手术对心脏供体获取、保存及移植过程中心脏保护液对心肌的保护。实验从血流动力学(冠脉流量、心率、左心室收缩峰压、左心室舒张期末压、左心室发展压,心脏作功指数、左心室收缩期压力最大上升速率、左心室舒张期压力最大下降速率)、心肌酶(肌酸激酶同工酶及心肌肌钙蛋白T)、心肌含水率、冠状动脉内皮细胞功能(一氧化氮含量、内皮素-1含量)、抗过氧化反应(超氧化物歧化酶、丙二醛)、心肌叁磷酸腺苷和心肌病理结构(光镜、电镜)等方面对新型心脏保护液、HTK保护液和ST·ThomasⅡ保护液的心脏保存效果进行评价。结果显示,新型心脏保护液在各方面均优于或等同于HTK保护液和ST·ThomasⅡ保护液的心脏保存效果。第二部分为通过建立小型猪体外循环手术模型进行小型猪体外循环下心脏直视手术实验,模拟临床体外循环下心脏直视手术过程中心脏保护液对心肌的保护。实验从血流动力学、心肌酶、心肌含水率、冠状动脉内皮细胞功能、抗过氧化反应和凋亡心肌细胞检测(凋亡细胞形态学观察、凋亡细胞阳性率、心肌细胞凋亡相关基因蛋白表达)等方面对新型心脏保护液、HTK保护液和ST·ThomasⅡ保护液的心脏保护效果进行评价。结果显示,新型心脏保护液在各方面均优于或等同于HTK保护液和ST·ThomasⅡ保护液的心肌保护效果。两部分实验分别建立了用于心脏保护液研究的离体及在体动物实验模型,初步检验了新型心脏保护液对大鼠及小型猪的心肌保护作用并得到了较为满意的实验结果,为下一步对心脏保护液的实验研究打下基础。
李寒[3]2005年在《开放MitK_（ATP）通道对缺血再灌注心肌保护作用研究》文中研究说明心脏直视手术中,心肌缺血性损伤和再灌注损伤是影响术后心脏功能恢复的重要因素,心肌保护一直是心血管外科领域的研究重点。随着近年来对心肌ATP 敏感钾离子通道研究的不断深入,发现开放心肌K_(ATP)通道可对缺血再灌注心肌起到重要的保护作用,逐渐成为心肌保护研究新的热点。研究发现:心肌线粒体和内皮细胞结构及功能的损伤在缺血再灌注损伤机制中起重要的作用。心脏直视手术中心肌缺血及再灌注可导致线粒体和内皮细胞损伤及功能紊乱,从而通过不同途径引起细胞结构和功能失调。由此可以推断,围手术期加强对心肌线粒体和内皮细胞的保护,可以减轻心肌缺血再灌注损伤,促进术后心脏功能的恢复。国内外研究提示K~+通道开放剂预处理可能减轻心肌缺血再灌注损伤,改善心肌保护效果。目的:本研究通过动物模型的制备,观察线粒体K~+通道开放剂二氮嗪对缺血再灌注心肌线粒体、内皮细胞结构和功能,以及心肌结构和功能的影响,探讨其心肌保护作用及机制。方法:本研究采用Langendorff 离体心脏灌注模型和大鼠离体工作心脏灌注模型,分叁部分进行。第一部分,SD 大鼠50 只,随机分为五组,制备Langendorff 大鼠离体心脏灌注模型,A 组为正常对照;B 组停灌30min,复灌30min;其余各组分别灌注不同的停搏液:C 组灌注高钾停搏液;D 组灌注含二氮嗪的停搏液;E 组灌注含二氮嗪停搏液之前10min 给予格列苯脲。实验终了取心肌组织,部分心肌制病理切片,电镜下观察线粒体改变;部分心肌用差速离心法提取线粒体并进行检测。采用紫外分光光度法检测细胞色素氧化酶活性,RT-PCR 检测其mRNA 表达变化;分别采用定磷法、高效液相法、激光共聚焦显微镜扫描、免疫组化和放免法检测H+-ATP 酶活性、心肌ATP 含量、线粒体膜电位、细胞色素C 含量、自由基生成。第二部分,新西兰白兔50只,随机分组,制备Langendorff 离体心脏灌注模型。A 组为正常对照;B 组停灌30min, 复灌30min;其余各组分别灌注不同的灌注液:C 组灌注含血灌注液;D 组灌注含二氮嗪的含血灌注液;E 组灌注含二氮嗪灌注液之前10min 给予格列苯脲。实验终了取心肌组织,免疫组化检测细胞间粘附分子-1 表达;RT-PCR 检测其细胞间粘附分子-1mRNA 表达变化;放免法检测肿瘤坏死因子-a、一氧化氮、血小板活化因子、髓过
付作林[4]2006年在《去甲肾上腺素在急性冬眠心肌中的释放和作用》文中进行了进一步梳理目的：冬眠心肌是缺血性心肌病冉灌注治疗后心功能恢复的主要组成部分，再灌注前维持冬眠心肌的存在对于心肌的存活和再灌注后心功能的恢复都是非常重要的。目前认为，心肌冬眠是以心脏对心肌的缺血适应为特征的一种内源性保护机制，然而，触发和维持心肌冬眠的机制仍不清楚。去甲肾上腺素在心肌缺血过程中起了重要的作用，而它在心肌冬眠中的作用尚未明确。本实验拟采用离体鼠心急性冬眠模型，对急性心肌冬眠时心脏去甲肾上腺素的释放和去甲肾上腺素在急性心肌冬眠形成中的作用进行探讨。方法：建立大鼠离体心脏Langendorf等容收缩灌注模型，观察低灌120分钟过程中左心室内压力、心室率、冠脉流量、乳酸脱氢酶的漏出和心肌的超微结构改变，并观察了心脏去甲肾上腺素的自发性释放和电场刺激引起的释放及盐酸酪胺和去甲内咪嗪对释放的影响，同时观察了利血平或生理盐水处理或灌流液中加入去甲肾上腺素的心脏低灌120分钟时冠脉流量、乳酸脱氢酶漏出、心肌叁磷酸腺苷、磷酸肌酸、糖原含量、Bcl-2、Bax表达产物的平均吸光度值、心肌细胞凋亡和心肌的超微结构，并用酪胺试验评价心脏交感神经末梢去甲肾上腺素的耗竭情况。结果：1、低灌开始后，冠脉流量、压力心率乘积和乳酸脱氢酶的漏出分别迅速降至低灌注前水平的8.5％、12.2％和23.7％，在随后120分钟的低灌过程中，以上指标没有进一步显着的降低或升高，复灌后冠脉流量和压力心率乘积迅速升高至低灌前水平；低灌120分钟后，心肌的超微结构未出现明显的改变，多巴酚丁胺引起心脏的收缩压明显增加(由20.5±3.9mmHg增加至65.0±10.2mmHg，P＜0.01)。2、低灌1分钟、120分钟和加入去甲丙咪嗪后冠脉流出液中去甲肾上腺素的含量之间差异没有显着性(P＞0.05)；电场刺激引起的心脏去甲肾上腺素的溢出在低灌120分钟时明显少于低灌前(P＜0.05)，复灌30分钟时与低灌前相比无显着差异(P＞0.05)。3、酪胺试验证明利血平组心脏交感神经末梢的去甲肾上腺素被耗竭，低灌120分钟时利血平处理的大鼠心脏的左心窒压力心率乘积、冠脉流量、乳酸脱氢酶漏出、心肌叁磷酸腺苷、磷酸肌酸、糖原含量、Bcl-2、Bax表达产物的平均吸光度值和凋亡心肌细胞数与被生理盐水处理者无明显差异(P＞0.05)，但灌流液中加入去甲肾上腺素低灌120分钟时，心室压力心率乘积、冠脉流量、心肌叁磷酸腺苷、磷酸肌酸、糖原含量、Bcl-2表达产物的平均吸光度值均明显降低，而乳酸脱氢酶的漏出、Bax表达产物的平均吸光度值和凋亡心肌细胞数明显增加(P＜0.05)，心肌的超微结构明显破坏。结论：1、此模型符合急性心肌冬眠的特征，提示大鼠离体心脏的急性冬眠模型被成功建立。2、离体鼠心急性冬眠时不伴有心脏去甲肾上腺素白发性释放的明显增加，电场刺激引起的心脏去甲肾上腺素的释放明显减少，再灌注30分钟时电场刺激引起的心脏去甲肾上腺素的释放完全恢复，提示在急性心肌冬眠的形成过程中，心脏的交感神经可能也经历了一个冬眠的过程，再灌注治疗可能有利于心脏交感神经功能的恢复。3、外源性的去甲肾上腺素可以引起心功能进行性的降低，这可能与冠脉流量的降低、心肌细胞的坏死和凋亡有关，提示外源性的去甲肾上腺素可能是加速冬眠心肌结构和功能恶化的一个重要因素，而心脏本身的去甲肾上腺素可能并没有参与急性心肌冬眠的形成。
赵晓丽[5]2011年在《丹曲林对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用》文中指出目的：探讨丹曲林对大鼠缺血再灌注心肌损伤的保护作用。观察丹曲林对缺血再灌注心肌梗死面积,LDH活性变化,血液动力学的变化来评价心肌的损伤程度；检测心肌细胞的高能磷酸化合物,嘌呤代谢产物腺苷,次黄苷,黄嘌呤,次黄嘌呤,尿酸含量的变化,以及嘌呤核苷酸代谢途径的酶：5'-核苷酸酶(5'-nucleotidase,5'-NT),腺苷脱氨酶(adenosine deaminase, ADA),嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase, PNP)以及黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase, XO)和嘌呤补救合成途径的关键酶：次黄嘌呤(鸟嘌呤)磷酸核糖转移酶(HGPRT)和腺嘌呤磷酸核糖转移酶(APRT)活性的改变,来研究丹曲林对缺血再灌注心肌能量代谢的影响。方法：72只健康雄性Wistar大鼠(n=72)随机分为3组：对照组、缺血再灌注组和丹曲林处理组,建立Langendorff离体心脏灌注模型。各组均先用Krebs液灌注平衡30min,正常对照组继续灌注90min,缺血再灌注组在平衡30min后全心缺血30min,再灌注60min;丹曲林处理组Krebs液中逐量加入丹曲林,使循环体系的终浓度为5μmol/L,然后缺血30min,再灌注60min。测定丹曲林不同浓度时心率、主动脉流量、冠状动脉流量和心输出量的变化；用高效液相法检测心肌组织中高能磷酸化合物,嘌呤代谢产物的含量,以及核苷酸代谢途径酶活性的变化；紫外分光法检测灌流液LDH活性；再灌注结束后以氯化四唑(TTC)染色法观察心肌梗死面积。结果：1.丹曲林对心脏血液动力学的影响及其心肌保护作用：丹曲林降低了缺血再灌注心肌的梗死面积(P<0.05), LDH释放量明显减少(P<0.01)。丹曲林对缺血再灌注心脏的血液动力学没有明显作用,只是冠脉流量有轻微增加(P<0.05)。2.丹曲林对缺血再灌注心肌能量代谢的影响丹曲林处理组高能磷酸化合物含量明显高于缺血再灌注组(P<0.05)。丹曲林灌注后,嘌呤代谢产物的释放量均有显着降低(P<0.05)。3.丹曲林对嘌呤核苷酸代谢途径以及补救合成途径酶活性的影响丹曲林处理组与缺血再灌注组相比,5'-核苷酸酶,腺苷脱氨酶,黄嘌呤氧化酶活性均明显增加(P<0.05),嘌呤核苷磷酸化酶的活性明显降低(P<0.05)。丹曲林处理组HGPRT和APRT的活性显着低于缺血再灌注组(P<0.05)。结论：1.丹曲林明显延缓了再灌注心肌的缺血性损伤。丹曲林对缺血再灌注心肌没有表现明显的血液动力学效应,只有冠脉流量稍微增加。丹曲林具有负性肌力作用,但其是否对心肌产生保护作用还尚不清楚。2.能量耗竭是心肌缺血再灌注损伤的始发因子,心肌收缩依赖于Ca2+自细胞外间隙内流,触发位于肌浆网终末池的RyR通道开放,细胞质增加的Ca2+激活收缩系统。由于心肌缺血,ATP合成阻断以及Ca2+超载导致心肌过度挛缩,更加重了ATP耗竭。丹曲林抑制Ca2+释放,降低Ca2+超载,从而减少心肌两个主要的酶：肌球蛋白ATP酶和肌浆网Ca2+ ATP酶活性,ATP消耗减少,缓解心肌过度挛缩,促进了缺血再灌注心肌的能量恢复。由于心肌缺血,嘌呤核苷酸依次降解为ATP-ADP-AMP-腺苷-次黄苷-次黄嘌呤-黄嘌呤-尿酸,尿酸为终产物。缺血再灌注导致各种底物的积累,嘌呤代谢产物增加表明嘌呤核苷酸降解加速,ATP再合成减少。丹曲林减少了嘌呤代谢产物的含量(P<0.05),提示丹曲林有助于促进嘌呤代谢的恢复。3.心肌缺血再灌注一个明显的特征是Ca2+超载。Ca2+超载激活了钙蛋白酶-1,引起心肌纤维组成蛋白和骨架蛋白的降解,导致心肌细胞的完整性破坏,细胞内的酶释放出来。丹曲林降低了细胞质的Ca2+浓度,抑制了钙蛋白酶的活化,减少了钙蛋白酶对细胞膜骨架蛋白和结构蛋白的降解,有助于维持细胞完整性,细胞内的酶较少释出,因此与缺血再灌注组相比,丹曲林处理组表现较高的酶活性。ATP降解产物次黄嘌呤和腺嘌呤可以通过磷酸转移酶途径参与ATP再合成。本实验条件下,丹曲林处理组APRT和HGPRT活性明显低于缺血再灌注组,提示磷酸转移酶途径对缺血再灌注心肌ATP再合成贡献不大。
杨双强[6]2005年在《河豚毒素心脏停搏液用于离体大鼠心肌保护的实验研究》文中认为目的:研究河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)心脏停搏液对离体大鼠缺血/再灌注心肌在器官水平和细胞水平的保护作用,探索新的心肌保护方法。方法:实验Ⅰ. 取 Wistar 大鼠心脏建立 Langendorff 灌注模型和 Neely左心室工作灌注模型,分成 2 组:即 TTX 停搏组和 STH-2 停搏组。TTX组用 TTX 心脏停搏液停搏,STH-2 组用 St.Thomas No.2 cardioplegia(STH-2)停搏。停搏后将鼠心置于相应配伍的停搏液中,7℃保存 5小时后恢复灌注。观察停搏前和再灌注后各组心脏血液动力学、心肌酶学、能量物质腺苷酸含量和心肌超微结构等方面的改变。实验Ⅱ. 用酶解法分离Wistar大鼠心脏获得具有搏动性的心室肌细胞悬液,随机分成基础组、STH-2 组和 TTX 组。基础组仅以 K-H 液处理,STH-2 组和 TTX 组分别应用 STH-2 和 TTX 心脏停搏液处理,建立模拟缺血/再灌注损伤的停搏/复搏心肌细胞模型,应用激光扫描共聚焦显微镜与荧光探针相结合的技术,测定各组心肌细胞不同时期的[Na+]i和[Ca2+]i。用倒置显微镜观察细胞搏动情况和形态学变化。结果:1.离体大鼠心脏 Langendorff 灌注模型停搏前两组之间的指标无
于明懂[7]2011年在《含左西孟旦的心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用的实验研究》文中研究指明目的观察含左西孟旦(levosimendan, Levo)的St.Thomas'Ⅱ(STH-2)心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血—再灌注损伤(Myocardical ischemia reperfusion injury, MIRI)的保护作用,并探讨其作用是否与开放ATP敏感性通道有关。方法32只健康成龄雄性wistar大鼠,体重250-300g,随机分为4组,每组8只。3%戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉,肝素钠(500IU/kg)腹腔注射抗凝。麻醉满意后,开胸取出心脏,连接到改良Langendorff灌注装置上,37℃K-H液(Kerbs-Henseleit Bicarbonate Buffer, KHB)平衡灌注30min后,L0组为对照组：灌注STH-2停搏液；L1组：STH-2液中加入Levo0.03μmol/L; L2组：STH-2液中加入Levo0.3μmol/L, LG组：STH-2液中加入Levo0.3μmol/L和格列苯脲(Glibenclamide, Glib) 10μmol/L停搏。停跳120min后,37℃K-H液再灌注30min。记录各组平衡灌注未及再灌注10 min、20 min、30 min时的心功能参数：心率(Heart rate,HR)、左心室形成压(Left ventricular developed pressure, LVDP)、左室内压上升最大速率(+differential pressure timemaxium'+dp/dtmax)、左室内压下降最大速率(-differential pressure timemaxium'-dp/dtmax)。留取各组平衡灌注未及再灌注10 min、20 min、30 min时的冠脉流出液,测定肌酸激酶(Creatine Kinase, CK),乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase, LDH)活性。再灌注30min后,留取各组大鼠心尖周围组织约200 mg于液氮中保存,备测定丙二醛(Malondialdehyde, MDA)、叁磷酸腺苷酶(Adenosine triphosphate, ATP)含量和超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)活性。剩余心肌组织称重后,于110℃烘干箱烘干24h后称重,计算心肌组织含水量。结果(1)心功能参数变化各组缺血前HR、LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax差异无统计学意义(P>0.05)；缺血再灌注后各组HR、LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均有下降趋势(P<0.05)；与LO组比较,L2组心功能指标明显升高(P<0.01),L1组和LG组差异无统计学意义(P>0.05)；与L1组比较,L2组心功能明显升高(P<0.05或P<0.01),LG组差异无统计学意义(P>0.05)；与L2组比较,LG组心功能明显降低(P<0.05或P<0.01)。(2)对心肌漏出酶的影响缺血前各组CK、LDH活性差异无统计学意义(P>0.05)；与基础值比较,各组再灌注期间CK和LDH活性均升高(P<0.01)；与L0组比较,L1组和L2组CK和LDH的活性降低(P<0.05或P<0.01),LG组差异无统计学意义(P>0.05)；与L1组比较,L2组CK和LDH的活性降低(P<0.05或P<0.01),LG组差异无统计学意义(P>0.05)；与L2组比较,LG组CK和LDH的活性均升高(P<0.05或P<0.01)。(3)对心肌组织中ATP、MDA、水的含量和SOD活性的影响再灌注末,与L0组比较,L1组MDA含量降低,SOD水平均升高(P<0.05),L2组ATP含量和SOD水平升高,MDA含量降低(P<0.01),LG组各指标差异无统计学意义(P>0.05)；与L1组比较,L2组ATP含量和SOD水平升高,MDA含量降低(P<0.01),LG组各指标差异无统计学意义(P>0.05)；与L2组比较,LG组ATP含量和SOD水平降低,MDA含量升高(P<0.01)；四组心肌含水量差异无统计学意义(P>0.05)。结论含左西孟旦的STH-2心脏停搏液可改善缺血—再灌注心脏功能,减轻心肌细胞损伤,对心肌缺血—再灌注损伤具有一定的保护作用,其保护效果与浓度有关,机制可能与开放ATP敏感性钾通道有关。
鲁可权[8]2003年在《超极化心脏保存液对离体大鼠心脏低温保存的实验研究》文中认为随着心脏移植的飞速发展，对心脏保存液的要求也是越来越高。UW液在我国广泛应用，但其较高的血管并发症发病率、高粘滞度、高昂的价格以及对心脏保存时间短等缺点限制了它的临床应用价值，因此，研制出一种全新的保存液成为必要。本实验在UW液及HTK的基础上，应用含有钾离子通道开放剂的心脏保存液对心脏长时间保存进行了初步的尝试。 目的 为提高心脏保存效果，延长保存时间，减少术后并发症，希望研制出一种方便、有效的新型心脏保存液，能延长心脏保存时间。方法在UW液及HTK液的基础上配制出含钾离子通道开放剂的超极化心脏保存液(HCS)：乳糖酸钠80mmol／L，KCl 10 mmol／L，MgSO_4·7H_2O 4mmol／L，CaCl_2 0.15mmol／L，Bicine(N-二[羟乙基]甘氨酸)90mmol／L，Nicorandil 0.1mmol／L，腺苷5 mmol，谷氨酰胺20mmol／L，精氨酸2mmol／L，别嘌呤醇1mmol／L，右旋糖酐-40 50g／L，pH值为7.40±0.10，渗透压为310-330mOsm／L。S-D大鼠(200-250g)24只，随机分为3组，分别用HCS液、UW液、K-H液对大鼠离体心脏进行逆行灌注，低温保存，观测组织光、电镜改变以及细胞酶学及能量变化，应用Langendorff装置鼠工作模型进行心脏功能测定，比较24h后心功能的恢复率。结果 心脏保存24h后，HCS组在光、电镜上改变与UW液基本相同，二者比H-K液效果好；心功能指标显示：K-H组左心室功能损伤严重，UW组及HCS组左心室功能损伤较轻。HR恢复率、LVPSP恢复率、+dp／+dtmax恢复率分别为：K-H组(38.66±4.82、48.77±8.31、30.70±5.67)％、UW组(76.65±6.89、79.97±4.67、73.72±4.25)％、HCS组(78.92±7.18、76.35±7.82、71.11±9.75)％，叁项第二军医大学硕士毕业论文超极化心脏保存液对离体心脏低温保存的实验研究比较均为UW组与HCS组无统计学差异，但与K一H组差异显着。CF恢复率为K一H组(45.16士6.78)%、UW组(47.99士6.71)%、HCS组(76，35土7.82)%，HCS组最高，差异显着(P<0 .05)，K一H组与Uw组间统计学无差异;冠脉循环回流液LDH、CPK、pH变化值:LDH、CPK为K一H组最高(P<0.05)，姗组、HCS组间无统计学差异;pH变化值:HCS组变化最小，与另外二组均有统计学差异，K一H组、姗组间无统计学差异。心肌含水量为K一H组(85.84士1.66)%最高(P<0.05)，UW组(83.64土0.72)%、HCS组(84.02士1.94)%间无统计学差异;ATP含量由高到低为HCS组(4.59士0.29)。mo魄、Uw组(3.04士0.19)。mo魄及K一H组(1 .97士0.18)。mof/g，叁组间比较均有统计学差异。心脏复跳时间比较:HCS组(6.41士1.36)分钟与UW组(6 .37士1.79)分钟无差异，较K一H组明显短。结论含钾离子通道开放剂的HCS保存液在24h内对大鼠心脏有明显的保护作用，明显减轻缺血再灌注损伤;心脏功能恢复率基本等同于UW液的水平;在能量保护、改善细胞酸中毒方面则优于Uw液。
魏珂[9]2003年在《线粒体ATP敏感性钾通道与幼兔心脏保护的关系研究》文中研究表明目的：1．了解药物(二氮嗪)预处理对幼兔心脏有无保护作用，并与缺血预处理(IPC)对比。2．探讨线粒体ATP敏感性钾通道(mK_(ATP))在预处理过程中的作用及其机制。 方法：大耳白兔(兔龄小于28d)34只随机分成5组：Ⅰ组(n=8)：K-H缓冲液灌注30min后St.ThomasⅡ号停跳液(STH)停跳；Ⅱ组(n=8)：K-H液平衡灌注15min后二氮嗪(100μmol/L)灌注5min，再用K-H液灌注10min，STH停跳；Ⅲ组(n=5)：K-H液平衡15min后用5-HD(100μmol/L)与二氮嗪(100μmol/L)共同灌注5min，再用K-H液冲洗10min，STH停跳；Ⅳ组(n=8)：K-H液平衡15min后，全心缺血5min，复灌10min行IPC，STH停跳；Ⅴ组(n=5)：K-H液平衡至10min，5-HD(100μmol/L)灌注5min后行IPC，STH停跳。建立langend(?)rff模型，常温(38℃)停灌30分钟，复灌45分钟，模拟I/R过程。观察并监测再灌后心脏血流动力学变化、冠脉流出液心肌酶、心肌组织内ATP含量，电镜下观察心肌损伤程度并对线粒体进行形态学半定量分析。 结果：I/R后二氮嗪预处理组的线粒体评分较IPC组(P＜0.05)和对照组(P＜0.01)低，5-HD与二氮嗪合用后线粒体评分仍较对照组低(P＜0.05)。二氮嗪预处理组和IPC组LVDP、±dp/dt_(max)恢复在多个时间 重庆医科大学硕_l研究生学位论文点上均优于对照组，而再灌末心肌组织ATP含量也高于对照组(尸<0.01)，冠脉流出液中的叁种心肌酶值均较对照组降低(尸<0.01)。 结论:1.二氮嗦预处理能产生与IPC相似的心肌保护作用，并且较IPC对线粒体的保护效果更好。2.mKATP通道和细胞膜KATP通道(sKATP)共同参与了IPC过程，且以mKATP通道的作用为主。
原春辉[10]2003年在《犬移植胰腺热缺血损伤的实验研究》文中认为前言 胰腺是具有双重分泌功能的特殊器官，具有低血流、易损伤的特点，要求保存条件较高，进一步针对胰腺自身特点，改进保存液，对提高移植胰腺存活率是十分必要的。目前胰腺保存仍存在由保存损伤引起的器官遗弃、移植胰腺功能恢复不良现象，并增加了手术并发症，降低了胰腺移植的生存率。这些都迫使我们在胰腺灌注和保存条件、能量代谢底物提供、保存液性质、保存损伤机制及防治措施等方面作进一步研究，以力求获得突破。 供体器官的短缺严重影响了器官移植的发展。在临床移植实际工作中经常要面临热缺血时间较长器官供体是否可以应用的问题。另外是否可以在术前通过检测手段来判定移植后器官功能恢复情况，这对医生及病人来说都是至关重要的。我们通过对热缺血时间较长的胰腺经保存后进行节段自体移植，了解移植后移植物生存率，并检测保存后胰腺组织中腺苷叁磷酸(ATP)和腺苷核苷酸(TAN)水平，探讨其与移植预后的关系。 在缺血再灌注损伤中，由于一氧化氮(NO)具有调节血管张力、抑制血小板和白细胞粘附、改善移植物微循环等作用，因此，通过增强NO-cGMP依赖机制以增加NO不失为设计新型器官保存液提供了一种新的策略。人们已经认识到了NO的双刃剑作用在缺血再灌注损伤中的作用，一方面可通过与氧自由基相互作用激活磷脂酶A_2(PLA_2)产生脂质过氧化样作用。另一方面作为强烈的血管舒张因子，可使腺泡血管直径增大，并阻止血小板粘附、聚集及白细胞的粘附。有实验证明NO合成的前体物质L-精氨酸(L-Arg)可有效保护胰腺，减轻胰腺水肿，减少腺泡出血坏死，改善循环。NO是由多种组织和细胞产生的免疫调节分子，以L-Arg为底物，在NO合成酶(NOS)催化下产生的。近年研究表明，移植器官缺血再灌注后中性粒细胞向缺血再灌注组织的浸润与器官再灌注损伤有关。我们Euro Collin(EC)液中分别添加L-Arg、N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)和生理盐水(Saline)，分别对犬离体胰腺节段进行低温灌注保存，应用犬胰节段移植模型，研究是否可以增加移植胰腺组织NO含量，是否可以减轻胰腺再灌注损伤。 随着器官移植工作的广泛开展，器官保存的质量越来越受到重视，而保存中缺血再灌注损伤是影响器官移植质量的重要因素，因其机理十分复杂，现在尚未完全清楚，目前得到公认的是氧自由基毒性学说和钙离子超负荷学说。针对上述发病机制，为减轻缺血再灌注损伤，国内外学者都进行了大量研究，目前大多采用抗氧化剂治疗，但由于其机制多为生物制剂或化学制剂，存在不同程度的免疫反应或毒性作用。我国学者经过长期研究，从中药中筛选高效低毒的药物保护缺血再灌注损伤，己经取得可喜成绩，其中黄茂有较强的这种保护作用。但上述实验多是对心肌缺血再灌注损伤的研究，而在胰腺缺血再灌注损伤的研究较少，而且所作实验对中药某一单体或对某一中药单一机制研究较多，而对复方的研究或多种机制的综合性研究较少。其药效成分的提取程序复杂，成本高昂，浪费较大，不利实际应用，用药方法多是通过体内注射。本实验所用的中药制剂制作方法简单，容易获取，成本较低，便于实际应用，用药方法是直接使用于离体胰腺灌注、保存液中。在现有的器官保存液中添加适量中药成分已成为我国医学移植领域中的一种特色和优势。国内近年来研究发现许多种中药对器官保存中组织缺血再灌注损伤有较好的保护作用。本实验研究黄民提取液对犬胰腺低温灌注及保存中缺血再灌注损伤的影响。 实验方 法 健康成年杂种犬，雌雄兼用，体重门一15Kg。建立犬胰腺节段自体移植模型 实验的第一部分 将实验随机分为六组＊，正常对照组：n＝3，行麻醉后开腹，显露胰腺，取病理组织，并取脾静脉血行血胰岛素浓度检测。2．末热缺血组：n二5，切除带有脾动脉、脾静脉的左叶胰腺，UW液保存24h后行自体移植。3．30min组：n＝6，将节段胰腺热缺血 30 min，然后行自体移植。4．60ndn组：n二 6，移植物热缺血时间为 60 min。5．90min组：n＝6，移植物热缺血时间为 90 min。6．120min组：n ＝＝ 4，移植物热缺血时间为 120 dn。进行内分泌功能检测：术后第一周每日测定血糖一次，术后一周作静脉葡萄糖耐量试验JVG’IT太移植后一小时，取脾静脉血和外周血检测胰岛素水平。外分泌 ·2·功能检测：移植后一周胰液分泌量，移植后24h胰液淀粉酶测定。用高压液相方法（HPLC）检测移植胰腺组织ATP／DP人MP。比较各组移植物生存率。测量胰腺组织总含水量（’ITW人并进行病理检查，移植后lh检查结果并进行组织评分。 实验的第二部分 将实验动物随机分为 4组：二．L－Arg处理组：n＝6，胰腺切取后迅速用加有L－Ars闷00m牙ks）的EC液经脾动脉灌注、保存。2．L－NAME处理组：n＝6，用加有 L－NAME门）的 EC液灌注、保存。3．移植对照组：n＝6，用加有等体积的生理盐水的 EC液灌注、保存。4．正常对照组，n＝4，行麻醉后开腹，显露胰腺，取病理
参考文献：
[1]. 离体鼠工作心脏灌注模型中腺苷对缺血再灌注心脏能量底物代谢的影响[D]. 朱文忠. 第二军医大学. 2001
[2]. 新型心脏保护液对心肌保护作用的实验研究[D]. 薛辉. 清华大学. 2010
[3]. 开放MitK_（ATP）通道对缺血再灌注心肌保护作用研究[D]. 李寒. 第叁军医大学. 2005
[4]. 去甲肾上腺素在急性冬眠心肌中的释放和作用[D]. 付作林. 华中科技大学. 2006
[5]. 丹曲林对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[D]. 赵晓丽. 天津医科大学. 2011
[6]. 河豚毒素心脏停搏液用于离体大鼠心肌保护的实验研究[D]. 杨双强. 重庆医科大学. 2005
[7]. 含左西孟旦的心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用的实验研究[D]. 于明懂. 天津医科大学. 2011
[8]. 超极化心脏保存液对离体大鼠心脏低温保存的实验研究[D]. 鲁可权. 第二军医大学. 2003
[9]. 线粒体ATP敏感性钾通道与幼兔心脏保护的关系研究[D]. 魏珂. 重庆医科大学. 2003
[10]. 犬移植胰腺热缺血损伤的实验研究[D]. 原春辉. 中国医科大学. 2003
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