苗垚垚 中国人民解放军401医院 山东省 青岛市 266000
【摘要】目的 研究Claudin-7的低表达对SW480细胞生长和侵袭性的影响。方法 利用RNAi技术下调结肠癌细胞系中Claudin-7的表达， 划痕实验和Transwell实验评价RNAi前后SW480细胞生长和侵袭能力的变化 结果 划痕实验显示细胞转移运动能力明显增强，Transwell体外侵袭实验结果显示穿过细胞数明显增多(P<0.001)。结论 Claudin-7基因低表达可显著增强结肠癌细胞生长和侵袭性
结直肠癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，其发生侵袭和转移是复杂而有序的多阶段生物过程，受多个基因调控【1】。Claudin-7基因属于近年发现的一个新的膜蛋白Claudins家族的一员，利用RNAi技术高效、特异性地抑制基因表达，观察Claudin-7基因表达下调后对结肠癌细胞生长和侵袭性的影响。
材料和方法
一、材料
SW480结肠癌细胞株购自中国科学院上海细胞生物学研究所 ( ATCC号为CCL-228)，siRNA(h) SC-43048-v 慢病毒颗粒、Sc-33532 Rabbit anti-claudin-7均购置Santa Cruz，24孔Tranwell双层细胞培养板购置美国Corning， RP MI-1640培养液，胎牛血清均购自Life Technologies公司,脂质体LipofectamineTM2000购自Invitrogen公司
二、方法
1．细胞培养与病毒转染 SW480细胞常规培养，培养条件为37℃、5% CO2的孵箱湿润培养，利用慢病毒转染，以转染Claudin-7空载体及无关RNAi组细胞作为对照，即SW480RNAi、SW480control、SW480组。
2、侵袭实验 使用24孔Transwell板，取细胞对数生长期，取细胞悬液200μl加入24孔板Transwell小室。使用正置显微镜进行观察和拍照，采用3-5个视野进行细胞计数，并求平均值，进行统计分析。
3、划痕实验 将上述各组细胞分别以1×105个细胞接种于6孔板中，常规培养；用灭菌的1 ml Tip头在皿底划一直线，继续培养24 h，Giemsa染色，倒置显微镜下观察划痕处细胞生长情况。
三、统计处理 应用SPSS13.0统计分析软件行统计学处理，计量资料用 ±sd表示，多组间比较用单因素分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
结果
一、细胞侵袭实验的结果 实验结果表明降低Claudin-7表达后SW480RNAi、SW480control、SW480的穿孔细胞数分别为（89.7±15.2）、（34±5.8）、（39±3.2）、实验组与2个对照组经比较，穿过人工基膜的细胞数明显增多，差异有统计学意义（P＜0.01），而2个对照组之间，差异无统计学意义（P＞0.05） 二、划痕试验结果 RNAiClaudin-7组细胞划痕，经48 h培养逐渐愈合，划痕基本消失；而另外两对照组细胞划痕，经48 h培养仍未愈合，划痕依然明显，见图
讨论
Claudin- 7属于Claudins家族，Claudins是构成紧密连接的主要骨架蛋白，紧密连接维持细胞极性，阻止膜蛋白及液体的侧向扩散，维持细胞顶端和基底区的不同组分构成。另外还可能参与诸如细胞增殖、分化之类的调节【2】。紧密连接完整性的破坏可能是导致肿瘤细胞生长所需的营养因子及其他因子扩散的原因之一。
本实验发现结肠癌细胞基因表达下调后，侵袭实验穿孔细胞显著增多，单层细胞划痕后48小时生长迁移细胞数增多。结果表明claudin-7的表达水平下调可提高结肠癌SW480细胞的侵袭转移能力，由于癌细胞的运动性和侵袭能力与肿瘤的发展密切相关，因此Claudin-7在结肠癌的侵袭转移等进展过程中发挥重要作用。通过本实验我们推测Claudin-7表达下调在细胞间黏附性丢失，以及结肠癌细胞的凝聚力降低、分化变差及侵袭性增加的过程中发挥了重要作用，而Claudin-7高表达可能抑制结肠癌细胞的生长和侵袭能力，但确切机制值得探索，其对结肠癌肿瘤细胞生长和侵袭的影响还需进一步研究，可能会成为反映结、直肠癌发生、发展和预后的重要指标，并有望为开展新型有效的肿瘤治疗方法开辟新的途径。
参考文献
【1】Poeaima S,Rerkamnuaychokeb B,Jesdapatarakulc S, et al. Chromosome alternations in colorectal cancer in Thai patients. Cancer Genet Cytogenet,2005,160:152-159
【2】Mitic LL, Anderson JM. Molecular architecture of tight junctions[J]. Annu Rev Physiol, 1998; 60:121-42.
论文作者:房斌,张黎黎
论文发表刊物:《医师在线》2015年10月第21期供稿
论文发表时间:2016/1/27
标签：细胞论文; 划痕论文; 基因论文; 结肠癌论文; 细胞生长论文; 转染论文; 癌细胞论文; 《医师在线》2015年10月第21期供稿论文;