黄文江[1]2002年在《甜樱桃矮化砧木离体叶片再生及抗菌肽MB39基因转化植株的获得》文中提出樱桃是一种极具市场潜力的水果。樱桃根癌病，细菌性流胶病等细菌病害是世界樱桃产区广泛发生的病害，感染细菌性病害严重的造成树体死亡，因此选育抗病品种来解决樱桃因细菌感染而造成的问题具有重要的经济意义。本研究的目标就是研究建立樱桃离体叶片不定芽再生体系，并利用天然的植物转基因系统——根癌农杆菌，以甜樱桃矮化砧木Gisela6叶片为外植体，把抗菌肽MB39基因转入樱桃砧木，获得抗根癌病的植株，培育新的抗病品种。 试验研究了基本培养基、激素配比、蔗糖浓度、外植体成熟度及切割方式以及培养基添加物等影响樱桃离体叶片不定芽再生的因素，优化了再生条件，建立起了高效、稳定的离体叶片再生体系。结果表明，WPM的基本培养基在诱导樱桃离体叶片再生方面明显优于MS、B_5、N_6。合适的激素配比及浓度是提高离体组织再生不定芽频率的关键。IBA比NAA有更强的诱导樱桃叶片再生的活性；外植体的基因型显着影响不定芽再生，Gisela5和Gisela6的再生频率较高，可达70％以上，马哈利樱桃，中国樱桃和甜樱桃离体叶片也可再生但再生频率较低；分化培养基中添加AgNO3和CH，能够促进不定芽的再生；黑暗诱导处理也影响再生，接种后，黑暗15d，再生频率最高。在WPM+BA7mg／L+IBA0.3mg／L+AgNO3 4.5mg／L+CH300ppm和WPM+BA5mg／L+IBA0.5mg／L+AgNO3 4.5mg／L+CH300ppm培养基上，Gi-sela5，Gisela6的再生频率最高，分别为76.8％和100％。 在建立的再生体系基础上，利用Gisela6作试材，研究了樱桃转化过程中抗生素、预培养和共培养等因素对转化效率的影响，建立了高效的遗传转化系统。取新展开的幼嫩叶片接种于诱导培养基上预培养1d，用携带目的基因的农杆菌EHA105浸染30min，然后放置到添加20μM AS的诱导培养基上共培养3d，脱菌后，移入筛选培养基(WPM+BA5mS／L+IBA0.5mZ／L+AgNO3 4.5mg／L+CH300ppm+Carb250mR／L+Cef250mg／L+Kan50mg／L)。获得抗性植株进行生根和叶片Kan抗性检测。对上述所得抗性植株进行PCR检测，结果表明，MB39基因已整合到植株的基因组中。
徐世彦, 武凯翔, 吴延军[2]2018年在《樱桃组织培养及遗传转化研究进展》文中指出樱桃果实甜美,营养丰富,深受消费者喜爱,是极具市场潜力的水果之一。但是由于其易裂果、不耐贮藏且抗性较弱,使樱桃产业的发展受到了极大影响,因此加快樱桃优良品种的选育十分重要。采用传统育种方式在一定程度上所需周期较长、工作量大,且杂交胚败育率较高,严重阻碍了樱桃育种工作的进程。而通过植物组织培养与遗传转化可以克服樱桃传统育种的局限性,加速育种工作的进程。笔者分析了樱桃茎尖、茎段和叶等器官培养以及胚培养的影响因素,如基因型、外植体类型、培养条件和激素组合等;综述了有关樱桃标记基因和目的基因的遗传转化,包括转化方法、转化材料、所用基因类型、转化植株的鉴定方法、转化结果以及转化率等,并对生物技术在樱桃研究中存在的问题及今后在樱桃中的应用前景进行了讨论。
徐凌飞[3]2005年在《梨离体再生和遗传转化的研究》文中研究表明本研究以砀山酥梨(P.bretschnrideri Rehd.)、八月红梨(P.communis L.X P.bretschnrideri Rehd.)等多个栽培品种为试验材料,通过对影响叶片、叶柄和节间茎段离体再生不定芽以及根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的遗传转化的若干因素的研究,建立起不同外植体水平的梨再生体系以及遗传转化体系。利用几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶双价基因进行了遗传转化,分子生物学分析证明,几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶双价基因已经整合到转化植株基因组中,获得了八月红梨和砀山酥梨2个品种的转基因植株。 主要研究结果如下: 1.试验从砀山酥、八月红等5个梨品种叶片诱导出不定芽,其中砀山酥、八月红、早酥梨等品种叶片再生不定芽为首次获得,建立起八月红、水晶和砀山酥梨等品种叶片高效再生体系。 试验系统地研究了影响梨叶片再生不定芽的多种因子的效应,建立起叶片高效再生体系。在最佳条件下,八月红、水晶和砀山酥梨的再生频率分别100%、77.8%和83.3%,平均再生芽数分别为5.78、3.17和1.58。 不同品种叶片再生效率不同,基因型是影响叶片再生能力的关键因子,八月红梨叶片再生能力高于其它品种。基本培养基类型对叶片再生有重要影响,NN69培养基适宜于梨叶片再生。采用试管苗顶部幼嫩叶片为外植体,叶片接种时叶片远轴面向下接触培养基,培养基附加40g·L~(-1)蔗糖,培养基pH值为5.6,接种后暗培养20d等可显着地提高叶片再生频率。植物激素种类组成和浓度配比是影响梨叶片离体再生的最关键因子之一,不同梨品种叶片高频率再生需要不同的激素种类组合和浓度配比。TDZ适宜八月红和水晶梨叶片再生,6-BA适宜砀山酥梨和红茄梨叶片再生,ZT和KT不适宜梨叶片再生。生长素种类对梨叶片再生不定芽有显着影响。IBA适宜于八月红梨叶片再生,IAA适宜于水晶梨叶片再生。培养基附加0.5mg·L~(-1) AgNO_3 可显着地提高八月红梨叶片再生频率。 基木培养基类型和6-BA浓度是影响砀山酥梨叶片再生芽增殖的主要因素,适宜的增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+IBA 0.2 mg·L~(-1)。 利用正交试验设计研究了基本培养基、吲哚丁酸、茶乙酸、蔗糖、暗培养时间等5个因素对砀山酥、八月红梨叶片再生苗生根的影响。结果表明,砀同酥梨叶片再生苗生根的适宜组合为1/4MS+0.5 mg·L~(-1) IBA+ sucrose 20 g·L~(-1),暗培养5d。八月红梨叶片再生苗生根的适宜组合为1/4MS+0.3 mg·L~(-1) IBA+ sucrose 30 g·L~(-1),暗培养7d。 2.梨叶柄再生困难,试验首次从八月红和水晶梨叶柄诱导出不定芽。 植物激素对梨叶柄再生有重要影响。细胞分裂素TDZ适宜于叶柄再生,ZT对叶柄再生没有作用,TDZ与生长素IBA、IAA和NAA的不同组合,可明显影响叶柄再生效率。培养基附加AgNO_3
参考文献：
[1]. 甜樱桃矮化砧木离体叶片再生及抗菌肽MB39基因转化植株的获得[D]. 黄文江. 西北农林科技大学. 2002
[2]. 樱桃组织培养及遗传转化研究进展[J]. 徐世彦, 武凯翔, 吴延军. 果树学报. 2018
[3]. 梨离体再生和遗传转化的研究[D]. 徐凌飞. 西北农林科技大学. 2005