苏州九龙医院 江苏苏州 215021
【摘 要】目的 分析探讨全自动血培养仪假阳性、假阴性报警原因及处理处理方法。方法 统计 BacT/Alert3D全自动血培养仪自2014年1月至2014年12月，共检测血培养标本3314瓶，其中仪器阳性报警497瓶，涂片找到细菌或转平板培养出细菌的真阳性瓶302瓶，真阳性率9.1%，收集未见到细菌的假阳性瓶53瓶（假阳性率1.6%），查找并分析原因；盲转350瓶阴性培养瓶，均无细菌生长。结果 本研究中51瓶假阳性瓶生长曲线都没有S型升高，皆因为非生长原因导致培养瓶OD值基数上升导致仪器报警引起假阳性，原因分别有：仪器外界温度较高；血培养瓶存放温度偏高；血液采集量过多；血液病、肿瘤患者标本，另有两例生长曲线有升高而未见细菌原因不明；本研究未发现假阴性结果。结论 规范血培养瓶的存放，避免过高或过低温度的影响，严格控制血液采集数量，避免血量过多，可以从检验前质量控制减少假阳性率的出现；出现仪器阳性报警时，及时观察标本生长曲线及载入时间可以排除一部分假阳性瓶，减少不必要的工作。
【关键词】全自动血培养仪；阳性报警；假阳性；生长曲线
血流感染（blood strain infections，BSI）属严重感染性疾病，为病死的主要原因之一，血流感染的死亡率约为35%［１］，一直以来受到临床医生/的高度重视，血液培养是一种准确可靠的诊断菌血症和败血症的手段之一。血培养方法的优劣直接关系到对血流感染的准确诊断和及时治疗。近年来，自动化血培养仪器的引进及普及，大大地缩短了阳性标本的报阳时间。使血培养在指导临床诊疗上的应用价值得到了进一步的发挥。血液培养标本是微生物室接收的最重要标本之一，但自动化仪器的局限性---一定比例的假阳性报警和假阴性也一直困扰着微生物室工作。因此如何提高血培养的准确性越来越受到微生物工作者的重视。
法国梅里埃公司出品的BacT/Alert3D全自动血培养仪（简称3D血培养仪）可用于血液及其他无菌体液的细菌培养和检测，具有污染少、阳性率高、操作简便、结果准确等优点，已在临床广泛应用[2]。3D血培养仪采用封闭非侵入自动监测方法，通过连续监NovelCO2，感应器PH值及颜色变化判断培养液中的细菌数量，采用加速度、起始值与速率3种方式判断是否为阳性标本，并提供细菌生长曲线，具有较高的灵敏度，但其他原因引起的PH值及颜色变化也能被仪器捕捉到并阳性报警。仪器捕捉到信号报警，标本涂片和转钟培养均未见到细菌称之为“假阳性”，其原因包括标本血细胞成份及数量的异常、血培养瓶载入仪器的时间及温度、仪器所处环境的温度、标本中所含微生物类型及数量等。标本瓶载入仪器经过5-7天培养后，仪器未报阳性而培养出微生物称为“假阴性”。
1.材料与标本
1.1.标本 2014年1月至2014年12月，共检测血培养标本3314瓶，其中仪器阳性报警497瓶，涂片找到细菌或转平板培养出细菌的真阳性瓶302瓶份，真阳性率9.1%；未见到细菌的假阳性标本53瓶，假阳性率1.6%。盲转了350例阴性血培养瓶常规需氧、厌氧培养，均无细菌生长。假阴性率为0.
1.2 仪器和试剂 梅里埃公司BacT/Alert3D全自动血培养仪；需氧血培养瓶、厌氧血培养瓶、儿童血培养瓶、哥伦比亚、麦康凯、巧克力平板、厌氧血平板均由郑州安图生物工程股份有限公司提供。细菌鉴定主要使用梅里埃公司VITEK2-Compact仪器及配套试条。
1.3 标准菌株 标准菌株：大肠埃希菌（ATCC25922）、金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、粪肠球菌（ATCC29212）、表皮葡萄球菌（ATCC12228）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）均购于中国工业微生物菌种保藏管理中心。
2.方法
2.1 样本采集 无菌方法成人采取8-10ml、儿童1-5ml静脉血直接注入血培养瓶，1小时内送至微生物室，微生物室接到标本后登记产生条形码直接载入3D血培养仪培养。
2.2 样本处理 第一步仪器发出阳性报警后，所有报警阳性瓶查看生长曲线及载入时间，然后无菌抽取标本涂片染色镜检并转种哥伦比亚、巧克力平板置35℃二氧化碳环境孵育；麦康凯置35℃普通孵育；如是厌氧瓶报警，转厌氧血平板置厌氧袋孵育。第二步观察微生物生长情况并鉴定。第三步取3～6ml培养液置无菌试管内，150×g离心5min后，收集上清，再经1525×g离心15min，取沉淀，用无菌盐水洗涤离心2次，收集菌细胞，再涂片革兰氏染色以确定细菌类型，并与直接涂片比较。培养5天后报阴性结果盲转哥伦比亚、巧克力、麦康凯平板置35℃孵育48小时。
2.3 统计分析 涂片染色或平板培养均未见到细菌为假阳性报警标本。联系临床询问送检情况、查找病历、分析并统计原因。阴性瓶盲转未见细菌生长者为真阴性结果。
3 结果
1.当血培养仪阳性报警时，首先查看阳性培养瓶的载入时间及生长曲线并记录。大部分真阳性瓶与假阳性瓶的生长曲线有明显的不同。真阳性瓶的生长曲线呈S型升高；假阳性瓶曲线无升高，且基数值较高，常在4000左右，且载入时间通常小于4小时。见图1.
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本研究中53瓶假阳性瓶生长曲线都没有S型升高。皆因为非生长原因导致培养瓶OD值基数上升导致仪器报警引起假阳性。另有两例生长曲线有升高而未见细菌原因不明。
2.涂片未见或平板培养未生长细菌培养瓶，打电话询问临床采血时间、送检过程、查看病人病例记录并统计。
本研究中假阳性报警原因主要有：25例标本可能因为仪器外界温度偏高；10例因为血培养瓶存放温度超过28℃；8例因为抽血量过多；8例因为肿瘤、血液病患者血细胞数量超常，血细胞本身的新陈代谢产生大量的C02导致培养瓶OD值基数增高；2例其它原因不明，可能是L型等其他常规不能培养细菌导致。结果见表1.
4 讨论
血流感染是严重的感染性疾病受到临床的高度重视，明确标本的病原体类型，减少抗菌药物的误用和滥用，将会大大改善患者的预后，降低患者的死亡率，减少医疗费用。而微生物室也一直在呼吁临床重视血培养等无菌标本的送检，那么如何严格控制血培养的影响因素，排除或降低假阳性、假阴性率则是微生物工作者的必备技能，认真观察、分析每一个异常因素，严格遵守各项操作、了解各种影响因素，血培养仪的假阳性率是可以在检验前质量控制中控制在允许范围之内。
全自动血培养仪为达到高灵敏度而导致一定的假阳性，假阳性的出现是不可避免的。但假阳性又是可以预防的。全面了解仪器性能、正确分析、及时处理阳性血培养瓶，及时、准确地发出微生物检验报告关系到临床的早期诊断和抗菌药物的正确使用。这就要求微生物室工作人员必须具备丰富的经验及知识。严格控制各个环节的影响因素可使假阳性下降至最低频率。
查找文献，分析归纳血培养仪假阳性、假阴性原因的研究很多，全自动血培养仪的假阳性率一般在1.5%左右，引起血培养仪“假阳性”报警的原因归纳有：
1．血培养瓶存放温度过高，超过28℃。
2．血培养仪外界温度过高。
3．苛养菌（如嗜血杆菌、厌氧菌）普通血平板无法生长，造成“假阳性” 因此阳性报警标本宜再同时接种血平板、巧克力平板，厌氧瓶报警阳性需接种厌氧血平板置厌氧环境孵育。
4．L型细菌在普通平板亦无法生长可导致假阳性。
5．血液病患者或肿瘤病人血细胞数量超常，血细胞本身的新陈代谢也会产生大量的C02，产生假阳性报警。
5．抽血量过高大于12ml、有些炎性疾病白细胞增高．也会出现假阳性。
7．传种平板的温度、平板的质量下降，也会造成细菌转种成功率降低，造成假阳性[3]。
本研究对我们实验室３Ｄ血培养仪使用中血培养假阳性报警原因作了具体分析。记录并统计３Ｄ血培养仪阳性报警所有标本，对假阳性标本查找病历、标本送检情况并统计分析原因。引起本实验室血培养假阳性报警的主要原因有：仪器外界温度偏高；血培养瓶存放温度过高；肿瘤或者血液病患者血细胞数量超常；其它。
本次研究未发现假阴性结果，可能有常规条件下不能生长的苛养性细菌的漏检。
正确及时处理３Ｄ血培养仪阳性报警标本，严格控制各个影响因素排除假阳性使假阳性率下降至最低频率，从而准确及时确定病原菌，为临床及早诊断菌血症，抗菌药物的合理使用提供有力的帮助。减少因为假阳性导致的误诊和抗菌药物的滥用，因此正确区分真阳性及假阳性，及时发出准确报告是微生物室工作人员必备的技能。本文所研究的假阳性不包括污染菌生长引起的假阳性感染。仪器阳性报警后转种生长细菌都作为真阳性标本。
定期向临床宣教，规范血培养瓶的存放，避免过高或过低温度的影响，严格控制血液采集数量，避免血量过多，可以从检验前质量控制减少假阳性率的出现；出现仪器阳性报警时，及时观察标本生长曲线及载入时间可以排除一部分假阳性瓶，减少不必要的工作。总之，重视每个异常结果及时联系临床可以有效预防和控制假阳性率的发生，更好为临床提供病原学证据。
参考文献：
［1］赵忆文，朱召芹，蔡金凤等.上海某医院2011年1至5月住院病例2044份血及体液标本血培养结果分析 检验医学［J］2014（2）.
［2］黄春红.BacT/Alert3D型全自动血培养仪性能评价 国际检验医学杂志 ［J］.2012，33（19）：2421-2422.
［3］文怡，顾兵，陈友华.浅谈如何正确分析报告血培养阳性结果：[会议论文] 2007.
作者简介：
丁双双，女，（1970-），学士，副主任技师，主要研究方向：微生物检验及细菌耐药性.
论文作者:丁双双,鲁继光（通讯作者）
论文发表刊物:《航空军医》2015年16期
论文发表时间:2016/3/10
标签：阳性论文; 标本论文; 细菌论文; 生长论文; 阴性论文; 仪器论文; 微生物论文; 《航空军医》2015年16期论文;