瘦素在大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用论文_何淑敏1,宋立坤2,郑金艳3,孙茂明1,赵鹏飞1

1.桓台县人民医院呼吸内科;2.神经外科 3.内分泌科 山东淄博 256400

摘要:目的:探讨瘦素(OB)对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的影响。方法:体外培养大鼠ASMCs,RT-PCR法测ASMCs瘦素受体(OB-R)的表达。不同浓度OB(0、20、40、60、80及100ng/ml)干预培养大鼠ASMCs不同时间(1、12、24、48及72h)后,CCK-8法测增殖情况。结果:20-100ng/mlOB作用ASMCs于1、12、24、48及72h后,各组OD值较对照组显著升高,P<0.05。OB对ASMCs增殖的诱导作用与浓度、时间呈正相关,P<0.01。结论:OB促进体外培养的大鼠ASMCs增殖。

关键词:瘦素;气道平滑肌细胞;增殖

哮喘主要由气道重塑造成,上皮细胞化生、ASMCs增生和肥大。抑制ASMCs增殖可作为治疗哮喘的靶点。本研究观察OB对大鼠ASMCs增殖的影响。

1资料与方法

1.1研究对象 170gSD大鼠1只/徐州医学院实验中心;DMEM培养基/Gibico;胎牛血清/四季青;胰蛋白酶/Sigma;OB/Alexis;兔抗大鼠OB-R的抗体/博士德;CCK-8试剂盒/凯基;TRNzol总RNA提取试剂盒、RT-PCR试剂盒/天根。

1.2方法

1.2.1大鼠ASMCs的培养 麻醉大鼠,无菌下纵剖大鼠气管,剥离外膜内膜,剪lmm×1mm×1mm块,贴培养瓶底面,加200mL/L胎牛血清的高糖培养基培养、换液、传代,选4-6代细胞。

1.2.2细胞鉴定 将消毒玻片置六孔培养板孔内,细胞入孔,加2mL高糖培养基。细胞融合50-60%时取出玻片,固定,100mL/L山羊血清封闭非特异性抗原,抗SMC-α-actin室温孵育2h,荧光标记二抗,4℃孵育细胞过液,封片后在荧光显微镜下检测。

1.2.3OB-R的mRNA测定 收集未经OB干预的ASMCs,TRNzol法提取细胞总RNA,紫外分光光度法测RNA浓度。用RT-PCR。

1.2.4ASMCs增殖的CCK-8测定 取第5代ASMCs,2.5g/L胰酶消化,计数,细胞活性大于95%。将ASMCs按1×104细胞/孔种于96孔板培养24h,换无血清培养液培养24h,再换10mL/L胎牛血清培养液。细胞随机分6组:对照组及20、40、60、80、100μg/L的OB处理组,每组6复孔,培养1、12、24、48、72h,每孔加10μLCCK-8培养2h,波长450nm测各孔OD值。

1.3统计学方法 用SPSS 17.0分析数据,计量资料±s,用单因素方差、Pearson分析、q检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

20-100ng/mlOB作用ASMCs于1、12、24、48及72h后,各组OD值较对照组显著升高,P<0.05。OB对ASMCs增殖的诱导作用与浓度、时间呈正相关,P<0.01,表1。

3讨论

ASMCs异常改变是气道重塑的关键环节。重度哮喘患者气道平滑肌增殖50-80%。Taylor[1]等对哮喘患者据BMI分组,发现肥胖与哮喘严重性呈正相关。哮喘与肥胖患者数量同步上升,肥胖患者OB水平增高[2]。Bohlen等发现增加OB浓度50或100ng/ml可显著下调短型OB-R亚型,抑制血管平滑肌细胞增殖。Huang[3]等发现OB诱导大鼠动脉平滑肌细胞增殖致动脉内膜增厚和血管重塑。本研究发现,随OB浓度增加、时间延长,ASMCs增殖数增多,OB促进体外培养的大鼠ASMCs增殖。抑制ASMCs增殖可作为治疗肥胖相关哮喘的新目标。

参考文献:

[1]Taylor B,Mannino D,Brown C,et al.Body mass index and asthma severity in the national asthma survey.Thorax,2008,63:14-20.

[2]Saraiva SA,Silva AL,Xisto DG,et al.Impact of obesity on airway and lung parenchyma remodeling in experimental chronic allergic asthma.Respir Physiol Neurobiol,2011,28:208-229.

[3]Huang F,Xiong X,Wang H,et al.Leptin-induced vascular smooth muscle cell proliferation via regulating cell cycle,activating ERK1/2 and NF-kB.Acta Biochim Biophys Sin,2010,42:325-331.

论文作者:何淑敏1,宋立坤2,郑金艳3,孙茂明1,赵鹏飞1

论文发表刊物:《健康世界》2016年第13期

论文发表时间:2016/8/13

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瘦素在大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用论文_何淑敏1,宋立坤2,郑金艳3,孙茂明1,赵鹏飞1
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