李舜[1]2007年在《共轭亚油酸对前体脂肪细胞增殖和分化的影响》文中提出共轭亚油酸(conjugated Linoleic Acid,CLA)是一种新型功能性油脂,具有特殊的生理功能人们对CLA进行了大量的研究,发现它具有抗癌活性,降低动脉粥样硬化,调节免疫,促进动物生长,抑制机体脂肪沉积,营养重分配作用以及影响骨骼形成等多种生物学活性。目前的研究主要集中在脂肪细胞增殖与分化过程中调控生脂过程的具体分子事件和细胞事件。我国对脂肪细胞的研究刚刚起步,大部分是关于不同种属的脂肪细胞形态学的研究。本文对共轭亚油酸来源结构和生理功能、脂肪细胞来源、研究脂肪细胞分化的体外系统、脂肪细胞分化过程、分化过程中细胞形态、瘦素、脂联素的变化以及影响脂肪细胞增殖与分化的因素作一综述。本试验通过前体脂肪细胞原代培养,采用细胞生物学基本方法,观察了大鼠和艾维因鸡前体脂肪细胞分化过程中的形态变化。通过添加不同浓度的CLA到前体脂肪细胞中,应用油红O染色OD值测定,细胞染色,Leptin、adiponectin的检测等多种方法,探讨CLA对脂肪细胞增殖和分化的影响。实验结果如下:1.适合本试验室前体脂肪细胞合适接种密度为:大鼠4×10~4和鸡8×10~4.2.油红O染色表明,CLA处理组比对照组细胞数量明显减少,CLA处理组前体脂肪细胞呈梭形或不规则的多边形,细胞内脂滴较小,数目较多,细胞体积小。对照组细胞大体呈圆形,胞内脂滴较大,数量较少,胞核处于细胞边缘。3.大鼠前体脂肪细胞的倍增时间为65.5h,前体脂肪细胞接种后潜伏期约为48h左右,培养6d后前体脂肪细胞增加了3倍。前体脂肪细胞接种后的第3-9d是前体脂肪细胞的指数增殖期,第9d后前体脂肪细胞的生长进入平台期。艾维因鸡前体脂肪细胞接种后潜伏期约为48h左右,培养6d后前体脂肪细胞增加了3倍。4.实验表明不同浓度的共扼亚油酸能显着降低大鼠前体脂肪细胞的数目,而不同浓度的共扼亚油酸在降低大鼠和艾维因鸡前体脂肪细胞的数目上也有显着差异。说明CLA抑制大鼠和艾维因鸡体脂肪细胞的增殖与分化。5.而本实验中CLA处理大鼠和艾维因鸡后脂肪细胞leptin、adiponectin的分泌没有显着变化。CLA对脂肪细胞分泌功能的影响及其作用机制有待进一步研究。
李艳杰[2]2003年在《肿瘤坏死因子-α对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响》文中研究指明本试验选取生长发育正常、健康状况良好的20日龄雄性SD大鼠作为研究对象，无菌取其腹股沟部、附睾部、肾脏周围脂肪组织，结合本实验室具体情况，采用胶原酶消化法进行原代培养，并添加不同浓度的肿瘤坏死因子(TNF-α)处理，通过细胞形态学动态观察、细胞计数、常规染色、MTT比色以及油红O染色提取法等方法，探讨了TNF-α在脂肪细胞增殖与分化中的作用，旨在为畜禽体脂沉积调控和人类肥胖症研究提供实验依据。 通过试验，摸索出了适合本实验室的大鼠前体脂肪细胞离体培养条件。比较了组织块法和消化法两种培养方法的优缺点，消化法比组织块法更适合用于大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的研究，消化法细胞提纯程度高，更易贴壁，生长迅速，获得的脂肪细胞数多，且所含脂滴多，此法的不足之处是需要大量Ⅰ型胶原酶，实验费用高。而组织块法培养需要时间长，各细胞成分混杂。消化法的适宜接种密度为4×10~4、5×10~4、6×10~4个细胞/cm~2，其中最适密度为5×10~4个细胞/cm~2。 通过生长曲线绘制、倍增时间测定和MTT比色研究了TNF-α对原代培养的大鼠前体脂肪细胞增殖的影响。结果表明：TNF-α显著抑制大鼠前体脂肪细胞的增殖，其中以10ng/ml TNF-α的处理组对细胞增殖的抑制作用最显著。添加5ng/ml、8 ng/ml、10 ng/ml TNF-α的处理组倍增时间分别为：78.78±5.243、90.172±5.181、106.627±5.254小时，不加TNF-α的对照组倍增时间为：65.877±2.998小时，各处理组与对照组相比，倍增时间明显延长，经SPSS统计表明差异极显着。MTT比色结果表明：在培养的第2天，各处理与对照组相比差异不显着(P＞0.05)。在培养的第4、6、8、10天，各处理组与对照组差异均极显着(P＜0.01)。说明在处理的初期，TNF-α对前体脂肪细胞增殖的影响不大。 通过HE染色、Giemsa染色、油红O染色以及油红O染色提取法研究TNF-α对原代培养的大鼠前体脂肪细胞分化的影响。结果表明，TNF-α通过抑制前体脂肪细胞脂滴的增多和融合，从而抑制分化。其中以10ng/ml TNF-α的处理组对细胞分化的抑制作用最显著。
李影[3]2003年在《CLA、LA、PA对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响》文中研究表明本实验以15-20日龄长势均匀、健康状况良好的SD(Sprague-Dawley)一级雄性大鼠为实验动物，取附睾、腹股沟以及肾脏周围脂肪组织为实验材料，以酶消化法进行大鼠前体脂肪细胞原代培养，摸索了适合本实验室的大鼠前体脂肪细胞培养条件，在此基础上，研究了共轭亚油酸(CLA)、亚油酸(LA)和棕榈酸(PA)对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响。 经过多次实验，确定本实验室大鼠前体脂肪细胞的最佳培养条件是：温度为37℃，湿度为95％，CO_2浓度为5％，PH值为7.0～7.2，离心力为1000r/min，培养基为M_(199)培养基，胎牛血清浓度为10％，合适细胞接种密度为4×10~4、5×10~4个/cm~2，染色结果表明：油红O染色是鉴定脂肪细胞的特异方法，Gimsa和HE染色可根据不同区域染色程度、着色差别判断细胞核的位置及脂滴大小、多少，观察大鼠前体脂肪细胞分化过程中的形态变化，进而确定脂肪细胞的分化阶段。 利用细胞计数，细胞形态观察和油红O染色OD值测定等方法研究了CLA对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响。CLA可减少脂肪细胞数目。0.05，0.10，0.15mmol/LCLA均具有降低脂肪细胞数目的作用，但低浓度的CLA的作用要在较长时间内才能表现出来(0.05mmol/L CLA降低脂肪细胞的作用在处理8天才有明显效果)0.10，0.15mmol/L CLA作用效果较好。CLA可抑制脂肪细胞充脂。0.10，0.15mmol/L CLA可显着抑制脂肪细胞充脂，0.05mmol/L CLA抑制充脂作用不显着。 通过MTT比色、油红O染色OD值测定等研究手段探讨了CLA、LA、CLA+LA对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响。在CLA中同时加入LA后，CLA的作用效果有所削弱，但两种脂肪酸的共同作用效果是抑制分化；LA的浓度(0.05，0.15mmol/L)对CLA的作用效果影响不显着(P＞0.05)；低浓度的(0.05mmol/L)LA可抑制脂肪细胞增殖与分化(P＜0.01)，高浓度(0.15mmol/L)的LA对脂肪细胞增殖与分化无显着影响(P＞0.05)。 采用细胞计数、细胞生长曲线、细胞倍增时间、细胞充脂率等方法研究了PA对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响。结果表明PA可增加前体脂肪细胞的数目、增大增殖幅度、缩短倍增时间，说明PA能够促进大鼠前体脂肪细胞的增殖；PA可以增大细胞体积、提高充脂率，说明PA能够促进大鼠前体脂肪细胞分化。0.10mmol/L PA促增殖与分化作用不显着(P＞0.05)，0.20，0.30mmol/L PA可显着促进大鼠前体脂肪细胞的增殖与分化(P＜0.01)，0.20mmol/L PA与0.30mmol/L PA比较，这两种浓度之间不存在显着差异(P＞0.05)。
孙超[4]2001年在《ECM组分和cAMP对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的调控》文中认为本文以生长发育正常、健康状况良好的20日龄雄性SD大鼠为实验动物，采用脂肪细胞离体培养技术系统地研究了ECM组分中的Ⅳ型胶原和层粘连蛋白(LN)、环腺苷酸(cAMP)以及胰岛素(INS)、肾上腺素对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的调控，并比较了ECM组分中的Ⅳ型胶原和LN对大鼠脂肪细胞中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型叁种胶原基因在转录水平上表达效果的影响。 经过反复试验，寻找到适合本实验室的大鼠前体脂肪细胞培养条件。用消化培养法时大鼠前体脂肪细胞数目增加快、生长旺盛，而组织块培养法细胞数目很少、生长一般；比较了四种底物对大鼠前体脂肪细胞培养的影响，发现细胞长势由好到差依次是加鼠尾胶原、不加底物、加盖玻片和加塑料膜：用HE染色、红油0染色和免疫组化染色等叁种染色技术观察到大鼠前体脂肪细胞可转化成典型的成熟脂肪细胞：胞质中有许多数目不同、大小不等的脂滴，胞核在细胞边缘；并检测了大鼠前体脂肪细胞中不同培养时间下蛋白质、DNA、葡萄糖、甘油叁酯等生化指标的含量，发现大鼠前体脂肪细胞在培养6d以前4种生化指标含量逐渐递增，而培养6d以后4种生化指标含量逐渐降低。 利用MTT比色、流式细胞仪分析、GPDH活性测定、透射电镜分析、斑点杂交等实验技术系统研究了ECM组分中的Ⅳ型胶原和LN对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的调控。结果表明：Ⅳ型胶原和LN均有利于大鼠前体脂肪细胞的增殖，100ul／ml Ⅳ型胶原促增殖作用比50、150、200ul／ml叁种浓度的明显，10ul／ml LN促增殖作用比5、20、40ul／ml叁种浓度的作用显着；两种ECM组分均可降低脂肪细胞中G1期的细胞比例，升高PrI期的细胞比例，经检验，100ul／ml Ⅳ型胶原处理的脂肪细胞中各细胞周期细胞比例与对照、50、150ul／ml叁种处理相比差异显着(P＜0.05)，10ul／ml LN对各细胞周期细胞比例的影响与对照、5、20ul／ml叁种处理相比差异显着(P＜0.05)，根据脂肪细胞中G2/G1期DNA含量的比值接近2，证明脂肪细胞分裂按二倍体进行；Ⅳ型胶原和LN对大鼠前体脂肪细胞中的蛋白质、DNA、葡萄糖、甘油叁酯的含量有明显促进作用，其中100ul／ml的Ⅳ型胶原可使4种生化指标含量与对照、50、150ul／ml处理相比差异极显着(P＜0.01)，10ul／mlLN对4种生化指标的影响与对照、5、20ul／ml处理相比差异极显着(P＜0.01)：用LN和Ⅳ型胶原处理大鼠前体脂肪细胞后，其GPDH活性均极显着地高于对照组(P＜0.01)，说明LN和Ⅳ型胶原均能促进前体脂肪细胞的分化，其中10ul／ml LN和100ul／ml Ⅳ型胶原处理的前体脂肪细胞中GPDH活性极显着地高于相应的其它处理组(P＜0.01)；不同浓度的Ⅳ型胶原和LN对大鼠前体脂肪细胞形态及其超微结构的影响不同，其中100ul／mlⅣ型胶原和10ul／ml LN对其形态及其超微结构的改善最有利；并且Ⅳ型胶原和LN均可不同程度地增加Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型叁种胶原cDNA探针与脂肪细胞中总RNA的阳性杂交信号，其中LN的作用效果比Ⅳ型胶原更强。 采用细胞计数、MTT比色、流式细胞仪分析、GPDH活性检测、透射电镜分析等技术探讨了直接用cAMP对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的调控。结果显示：不同浓度的cAMP溶液均可显着地增加前体脂肪细胞数目（P＜0．05或P＜0．01）、缩短细胞倍增时间，其中10’PM的CAMP使前体脂肪细胞数目的增加幅度最大、对减小细胞倍增时间最有利；CAMP处理的前体脂肪细胞生长曲线与对照组相比左移，而且培养6d以前细胞数目递增，此后细胞数目递减；它可使G；期细胞比例明显地低于对照组，Prl期细胞比例明显高于对照组，表明cAMP可促进大鼠前体脂肪细胞增殖；CAMP处理的大鼠前体脂肪细胞中蛋白质、DNA、葡萄糖、甘油叁酯含量明显高于对照，证明CAllP可提高前体脂肪细胞中 4种生化指标含量，其中 10’PM的 CAMP提高 4种生化指标含量的效果最好；CAMP溶液可使脂肪细胞中 GpDH活性极显着地高于对照组（p＜0．01），而且川加的 CAMp效果最佳；此外，cMIP溶液对大鼠前体脂肪细胞的形态及超微结构具有明显影响，其中 10血的 CAMP对其影晌最有利。 通过Mh比色、流式细胞仪分析、GPDH活性检测等技术研究了LS和肾上腺素对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的调控。结果表明：INS可促进大鼠前体脂肪细胞的增殖，而肾上腺素则抑制前体脂肪细胞的增殖，其中 25uU／。IINS（生理浓度）处理的前体脂肪细胞增殖效果好于 0．IU；’mlINS（药理浓度），10y肾上腺素（药理浓度）抑制前体脂肪细胞增殖的效果高于川M肾上腺素 （生理浓度）；INS可降低G；期细胞比例，提高卜 期（细胞增殖指数）的细胞比例，肾上腺素提高G；期细胞比例，降低 Prl期细胞比例，其中 25uU／ml INS促进增殖的效果最好，10一、肾上腺素抑制增殖的程度最强；INS可使前体脂肪细胞中的 GPDH活性极显着地高于对照组（PCO，01）；肾上腺素处理的前体脂肪细胞中GPDH活性极显着地低于对照组（P＜0．01），其中25uU／ml INS升高细胞中 GPDH活性的幅度最大（约 4倍），10－初肾上腺素降低细胞中 GPDH活性的幅度最大（约 3倍）。
向钊[5]2003年在《IGF-Ⅰ和EGF对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响》文中研究说明本文采用原代培养的大鼠前体脂肪细胞，通过胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和表皮生长因子(EGF)进行处理，研究上述两种因子对大鼠前体脂肪细胞增殖和分化的影响。 选择健康的20日龄SD雄性大鼠，无菌条件下取腹股沟、附睾和肾脏周围的脂肪组织，消化获得前体脂肪细胞进行原代培养。培养基选用10％胎牛血清(FBS)的M_(199)培养基，培养条件为5％CO_2、37℃、饱和湿度。 研究中采用细胞计数、细胞生长曲线绘制、细胞倍增时间测定、MTT比色的方法研究细胞的增殖情况；用油红O染色、HE染色和Giemsa染色进行形态学观察，用油红O染色提取法和充脂细胞率测定研究前体脂肪细胞的分化，并测定了不同培养时期大鼠前体脂肪细胞中蛋白质的含量。 研究在本实验条件下(不使用胰岛素，10％FBS)，探寻IGF-I与EGF对大鼠前体脂肪细胞增殖的最佳作用浓度。80ng／mL IGF-I和50ng／mL EGF对大鼠前体脂肪细胞的促进增殖作用最为显着，细胞倍增时间由对照组的67.49小时分别降低到44.24小时和48小时，为促进大鼠前体脂肪细胞增殖的最佳浓度。IGF-I与EGF在对大鼠前体脂肪细胞增殖促进中，表现出明显的协同作用，并且这种协同受到生长因子浓度和前体脂肪细胞的培养时间的影响。 IGF-I具有促进大鼠前体脂肪细胞分化作用，0～10d添加80ng／mL IGF-I使油红O染色提取法结果OD值上升，充脂细胞率上升。EGF对大鼠前体脂肪细胞分化具有抑制作用，0～10d添加50ng／mL EGF可以降低油红O染色提取法结果OD值和充脂细胞率。0～7d添加80ng／mL IGF-I，7～10d添加50ng／mL EGF组具有明显的促进分化作用；0～3d添加80ng／mL IGF-I，3～10d添加50ng／mL EGF组具有显着的抑制分化作用，说明3-7天是IGF-I和EGF对大鼠前体脂肪细胞分化产生作用的关键时期。IGF-I与EGF在对大鼠前体脂肪细胞分化的作用中，两者之间没有明显的协同或拮抗作用。 80ng／mL IGF-I可以提高培养6d前体脂肪细胞的蛋白含量，50ng／mL EGF对6d细胞蛋白含量无显着影响。实验首次发现在前体脂肪细胞培养过程中，细胞比重会随前体脂肪细胞培养时间的推移而逐渐地下降，甚至会出现部分细胞无法离心沉淀的情况。80ng／mL IGF-I具有促进前体脂肪细胞比重下降的作用，50ng／mL EGF对其无显着影响。
杨永青, 杨公社[6]2007年在《大黄素对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响》文中指出目的:研究大黄素(emodin,EMO)对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响。方法:分离培养大鼠前体脂肪细胞,按照EMO添加剂量不同,把培养板中接种细胞的培养孔随机分为0,5,10,20,40,80,160μmol.L-1处理组;采用MTT比色法和流式细胞术测定EMO对大鼠前体脂肪细胞增殖的影响;采用油红O染色提取法,检测脂肪细胞内甘油叁酯积聚量的变化;采用形态学观察,检测前体脂肪细胞分化的形态学变化。结果:20~160μmol.L-1的EMO对大鼠前体脂肪细胞的增殖与分化呈剂量和时间依赖性地抑制作用,并可在一定程度上诱发前体脂肪细胞凋亡。结论:EMO具有潜在的减肥降脂作用。
卢荣华[7]2006年在《黄芩素和黄芩苷在猪前体脂肪细胞增殖与分化中的作用》文中研究表明本研究以猪为实验动物,采用脂肪细胞离体培养技术,分离培养猪前体脂肪细胞。比较了不同年龄段猪前体脂肪细胞增殖与分化的差异;在此基础上,应用形态学观察、油红O染色提取、MTT比色、分光光度计、RT-PCR等方法,检测了中药成分黄芩素和黄芩苷对前体脂肪细胞增殖、分化的影响,并初步探讨了其作用机制。研究内容及结果如下:1、研究不同年龄段猪前体脂肪细胞增殖与分化的差异。实验以妊娠90天胎猪、1～3日龄仔猪和120日龄猪为对象,分离猪前体脂肪细胞,通过形态学观察、细胞贴壁计数、MTT比色、油红O染色提取法,比较各组细胞形态以及增殖与分化的差异。结果表明,供体年龄影响猪前体脂肪细胞增殖、分化特性;妊娠90天胎猪及1～3日龄仔猪,是猪前体脂肪细胞来源的适宜材料。2、研究黄芩素和黄芩苷对猪前体脂肪细胞增殖的影响。采用MTT比色法检测了在不同浓度黄芩素和黄芩苷作用下,对猪前体脂肪细胞增殖能力的影响。结果表明,高浓度黄芩素和黄芩苷(160～640μmol/L)呈剂量依赖性抑制猪前体脂肪细胞的增殖(P<0.05)。低浓度的黄芩素(40μmol/L)对猪前体脂肪细胞增殖效应不明显(P>0.05),而低浓度的黄芩苷(20μmol/L)对猪前体脂肪细胞增殖有促进作用(P<0.05),随浓度升高促进作用减弱。3、研究黄芩素和黄芩苷对猪前体脂肪细胞分化的影响。采用油红O染色提取法、形态学观察法,检测脂肪细胞内甘油叁酯积聚量的变化以及前体脂肪细胞充脂率、充脂程度及形态变化。结果表明,黄芩素和黄芩苷(40～320μmol/L)以剂量依赖性方式抑制猪前体脂肪细胞的分化,且黄芩苷的抑制作用稍强于黄芩素。4、研究黄芩素和黄芩苷对前体脂肪细胞分化相关基因转录及FAS酶活性的影响。采用半定量RT-PCR技术分析40μmol/L、160μmol/L两种浓度的黄芩素和黄芩苷对脂肪细胞分化特异转录因子PPARγ2、C/EBPα、生脂酶基因FAS及生长因子IGF-1等基因mRNA表达的影响;分光光度计法检测黄芩素对生脂酶FAS活性的影响。结果显示,黄芩苷可下调PPAR-γ2、FAS及IGF-1 mRNA的表达,但对脂肪细胞另一特异转录因子C/EBPαmRNA表达差异不显着(P>0.05),提示其抑制脂肪细胞分化可能与下调PPARγ2、FAS、IGF-1等基因mRNA表达有关,而与C/EBPα无关;而黄芩素除具有上述作用外,还可抑制FAS酶的活性。以上研究为黄芩素和黄芩苷调控体脂沉积提供了理论依据,并从细胞和分子水平,对其调控体脂作用机制、预防和治疗肥胖症、高血压、高血脂等相关疾病提供重要参考。
郭红芳[8]2009年在《EGF对牛前脂肪细胞增殖和分化的影响》文中进行了进一步梳理表皮生长因子(Epidemal growth factor,EGF)是一类重要的生长因子,通过与细胞膜上的受体结合而发挥作用。它主要通过与其受体结合而使结合区域结合发生构型变化,从而改变细胞的骨架结构,使细胞分化、分裂和增殖。多项研究均表明EGF可以促进前体脂肪细胞的增殖。但是EGF对前体脂肪细胞分化的影响,各家众说纷纭。并且还未见EGF对于牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响。我国对于脂肪细胞的研究刚刚起步,大部分是关于不同种属的脂肪细胞形态学的研究。对于牛前体脂肪细胞体外培养模式及其培养过程中影响因素都少见报道。本文对于表皮生长因子的结构、生理功能、脂肪细胞来源、脂肪细胞分化的体外系统、脂肪细胞分化增殖的过程及影响因素作一综述。本实验通过建立牛前体脂肪细胞原代培养,采用细胞生物学基本方法,观察了牛前脂肪细胞增殖分化过程中的形态变化,以及采用RT-PCR方法检测了不同培养基培养过程中脂肪细胞分化标志基因的表达量的变化。通过添加不同浓度(10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL)的EGF到前脂肪细胞培养基中,用MTT比色法、油红O提取比色法和RT-PCR法检测了不同浓度的EGF对脂肪细胞增殖及分化的影响。获得的研究主要结果如下:1.建立了本实验室成熟的牛前脂肪细胞培养体系。用I型胶原酶,将剪碎的脂肪组织块在37℃水浴恒温振荡器中消化50 min( 120次/ min),即可得到脂肪细胞。组织块法与胶原酶消化法相比也可得到脂肪细胞,且剪的越碎,培养的成功率越高,操作简便;但细胞生长缓慢、细胞数量少。胶原酶法可得到大量的前体脂肪细胞。并且在培养过程中,用分化培养基培养与完全培养基培养通过油红O提取比色法及分化标志基因表达量的变化的比较,证明分化培养基可促进脂肪细胞分化。2、通过MTT比色法检测发现,10 ng/mL～200 ng/mL浓度的EGF均可促进牛前脂肪细胞的增殖,且10 ng/mL的EGF与各组相比均能显着促进牛脂肪细胞的增殖。3、牛前脂肪细胞在分化诱导培养两天后,无血清培养基中添加10 ng/mL～200 ng/mL不同浓度的EGF处理均可促进脂肪细胞分化,测定脂肪细胞分化标志基因LPL、PPARγ和A-FABP mRNA的相对表达量发现各浓度均能能促进脂肪细胞分化。并且200 ng/mL与各处理组相比均可在第8 d显着促进脂肪细胞分化。
段彦龙[9]2001年在《大鼠前体脂肪细胞的增殖与分化研究》文中提出摘 要 本文应用细胞培养技术，以大鼠为试验动物，在有血清条件下研究了大鼠脂肪组织前体脂肪细胞的增殖与分化。 实验分别以无血清、l％、10％、20％胎牛血清培养大鼠的前体脂肪细胞；20 日龄、40日龄、60日龄大鼠的前体脂肪细胞以 10％胎牛血清培养；前体脂肪细胞分别用M199、nyMll640、DMEM：H二F 门：l）叁种培养基培养。细胞计数法测得前体脂肪细胞 16小时培养后的贴附率。l％、10％、20％胎牛血清培养组前体脂肪细胞的贴附率均高于无血清培养组的贴附率（P＜0刀1），10％、20％胎牛血清培养组前体脂肪细胞的贴附率均高于1％胎牛血清培养组的贴附率（P＜0刀1），10％胎牛血清培养组前体脂肪细胞的贴附率与20％胎牛血清培养组前体脂肪细胞的贴附率相比差异不显着。结果显示胎牛血清对于大鼠前体脂肪细胞的贴附率有促进作用，随着胎牛血清浓度增大，前体脂肪细胞的贴附率随之增高，但 20％胎牛血清与 10％胎牛血清对前体脂肪细胞贴附率的影响差异不显着；不同培养基培养，前体脂肪细胞的贴附率差异不显着，证明这叁种培养基对大鼠前体脂肪细胞的贴附率没有影响。20日龄、40日龄、60日龄大鼠前体脂肪细胞各组之间的贴附率差异显着（P＜0刀5），说明大鼠日龄影响其前体脂肪细胞的贴附率，日龄越小前体脂肪细胞的贴附率越高。 实验以1％、5％、10％胎牛血清培养前体脂肪细胞，测定前体脂肪细胞的增殖结果。5％、10％胎牛血清组细胞数高于1％胎牛血清组细胞数（P＜0刀1）。10％胎牛血清组细胞数高于5％胎牛血清组细胞数（P＜0刀5）。实验证实胎牛血清对于前体脂肪细胞的增殖有促进作用，并且在 10％胎牛血清范围内，前体脂肪细胞的增殖能力随着胎牛血清浓度的增加而增强；实验用细胞计数法测定了大鼠前体脂肪细胞的生长曲线，描述了本实验条件下前体脂肪细胞的生长规律。前体脂肪细胞的增殖符合正常细胞的增殖规律，即经历潜伏期、指数生长期并有进入平台期趋势。前体脂肪细胞在接种后40小时内开始增殖，前体脂肪细胞的倍增时间为62．6小时，5天培养期前体脂肪细胞增加了3倍。 在有血清培养条件下，实验比较了消化法与组织块法、原代培养与传代培养前体脂肪细胞的形态变化，表明消化法研究前体脂肪细胞分化优于组织块法。原代培养的前体脂肪细胞形态变化与传代培养的前体脂肪细胞形态变化相似，但原代培养的细胞成分相对于传代培养较混杂；传代的前体脂肪细胞贴附率明显高于原代前体脂肪细胞贴附率。实验发现大鼠前体脂肪细胞的形态变化不依赖于细胞密度。实验观察了原代<WP=5>消化法前体脂肪细胞的形态变化规律，测定出其充脂细胞的比例为26．7％。
李影[10]2006年在《猪脂肪细胞生物学特性及胰岛素和胆固醇在其生脂过程中的调控作用》文中认为肥胖已成为威胁人类健康的流行病,应用啮齿类为实验动物、围绕肥胖的发生、发展及其相关疾病的研究一直是人类医学研究的一个热点。猪作为生脂能力最强的动物,不仅解剖及生理学特点与人相似,其生脂的许多方面与啮齿类动物不同而与人有着诸多相似之处。目前,猪作为研究肥胖及相关疾病的动物模型已日益引起医学工作者的关注。另一方面,人类肥胖问题对畜牧业提出了更高的要求,培育低脂高瘦肉率的畜禽已经成为畜牧业发展的主攻方向。基于以上原因,以猪为实验动物研究脂肪生成及调控具有特殊意义。体脂沉积是脂肪细胞增殖、分化及肥大共同作用的结果,固醇调控元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element binding protein,SREBP-1c)与其它转录因子组成网络共同调控这一过程。脂肪细胞原代培养体系为研究脂肪细胞分化及调控提供了一个可操作模型。迄今为止,国内尚未建立成熟的猪脂肪细胞培养体系。本实验以猪脂肪细胞为细胞模型,对原代猪前体脂肪细胞的培养方法、培养体系及其生物学特性进行研究,并就猪前体脂肪细胞在冷冻过程中所应用的保护剂及其浓度进行探索,在此基础上为探讨脂肪形成过程中的细胞事件及SREBP-1c在此过程中的作用,以调控SREBP-1c表达的因子-胰岛素及胆固醇为诱因,研究了猪脂肪细胞增殖、分化及肥大过程中细胞数目、形态、生脂酶活性、甘油叁酯( triglyceride,TG)沉积量的变化,进一步以相对定量RT-PCR方法分析了转录因子SREBP-1c及其下游基因乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(stearoyl-CoA desturase SCD)mRNA的表达水平,获得如下结论:1.建立了猪前体脂肪细胞培养的优化体系,并对其生物学特性进行测定。胶原酶消化法与组织块贴壁法均可培养出猪前体脂肪细胞;组织块法培养的原代细胞中分化为成熟的细胞较少,分化阶段不一致;消化法可获得大量纯度均一、增殖和分化旺盛的前体脂肪细胞。在用消化法培养的过程中,200目筛网孔径,800 g离心力离心5 min比150、600目筛网孔径80、300 g离心力离心10 min更为合适。结果提示:猪脂肪细胞原代培养宜用胶原酶消化法,其适宜的筛网孔径为200目,离心力为800 g,离心时间为5 min。此方法获得的猪脂肪细胞生物学特性为:前体脂肪细胞的增殖主要在细胞培养的2~6天,其分化出现在培养的第3天,在细胞培养后期尤为明显,在第10天基本完成终末分化,表现为细胞体积增大,GPDH酶活性增加,细胞形态从扁平宽梭形或不
参考文献：
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