（江苏豪森药业集团有限公司，江苏 连云港 222069）
【摘要】目的：建立盐酸氨柔比星有关物质的HPLC测定方法。方法：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶（Phenomenex Gemini C18 150×4.6mm 5μm），流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至3.0)—乙腈（80:20），流动相B为乙腈，流速为0.8ml/min，柱温为25℃，检测波长为220nm，进样量为10μl。结果 盐酸氨柔比星与各有关物质在本色谱条件下分离良好，各杂质最低检测量0.5ng～0.8ng。 结论：本测定方法准确可靠、专属性强、灵敏度高、重复性好，适用于盐酸氨柔比星有关物质的测定。
【关键词】盐酸氨柔比星；HPLC；有关物质；液相色谱；
中图分类号： 文献标识码： 文章编号：
Determination of related substances in Amrubicin Hydrochloride by HPLC
Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co., Ltd.，Jiangsu Lianyungang 222069
Abstract: Objective:To establish a method for the determination of related substances in amrubicin hydrochloride by HPLC.Methods：The method was performed with column Phenomenex Gemini C18 150×4.6mm 5μm,and the mobile phase A was consisted of 0.05 mol/L KH2PO4 (pH adjusted to 3.0 by phosphoric acid) and acetonitrile (80：20),the mobile phase B was acetonitrile. The flow rate was 0.8ml/min. The column temperature was 25℃.The detection wavelength was 220nm.Results:Amrubicin hydrochloride and the other related substances can be separated effectively.The limit detection of the impurities 0.5ng to 0.8ng. Conclusion:The method is accurate and reliable, has strong specificity, high sensitivity and good repeatability, and is suitable for the determination of related substances in amrubicin hydrochloride.
[ 中图分类号 ]R2[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165（2018）18-0432-02
引 言
肺癌是一种发病率和病死率增长较快的恶性肿瘤，严重威胁到人类的生命[1]。2002年，盐酸氨柔比星在日本注册上市，用于治疗晚期小细胞肺癌和非小细胞肺癌[2]。药物成品会因合成工艺、起始原料、中间体和药物降解而产生一些杂质，这些杂质会影响药物疗效，甚至产生不良反应，必须严格控制[3]。对盐酸氨柔比星的有机杂质研究，主要集中在以下几个部分：生产工艺中存在的潜在杂质、固有杂质、稳定性试验（包括影响因素试验、加速长期试验）和强降解试验中产生的杂质、制剂过程中产生的杂质[4]。HPLC高效液相色谱法在杂质的分离检测中应用最为广泛,HPLC法具有高选择性、高灵敏度等特点[5]。本文针对这些杂质建立了一个有效且准确可靠的HPLC分析方法，使这些杂质与氨柔比星逐一分离，达到控制杂质限度，保证药品质量安全的目的。
1仪器与试剂
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪，G1314F VWD与G1315D DAD检测器，Chemstation色谱工作站，Phenomenex公司色谱柱（Gemini C18 150×4.6mm 5μm；填料：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂）。
试药：盐酸氨柔比星及各已知杂质均由江苏豪森药业集团有限公司提供；磷酸（分析纯）来自TEDIA公司；磷酸二氢钾（分析纯）、氢氧化钠（分析纯）来自国药集团化学试剂有限公司；乙腈（色谱纯）来自MERCK公司、纯化水（公司自制）。
2试验过程与结果
2.1 色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶（Phenomenex Gemini C18 150×4.6mm 5μm或柱效类似的色谱柱）为填充剂；以0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液（取磷酸二氢钾6.8g，加水约900ml溶解后，用磷酸溶液调节pH值至3.0，再加水至1000ml）-乙腈（80：20）为流动相A，以乙腈为流动相B，流速为每分钟0.8ml/min；按表1进行梯度洗脱；检测波长为220nm；柱温为25℃。
2.2 溶液配制
稀释液：磷酸盐缓冲液（6.8g磷酸二氢钾，加水900ml，用磷酸调节pH至3.0，加水至1000ml）-乙腈（75:25）。取盐酸氨柔比星约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液溶解稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取1ml，置200ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取各杂质对照品适量，加稀释液溶解并制备杂质测试溶液。
2.3专属性试验
在2.1的色谱条件下，对起始原料、主要中间体和各已知杂质进行检测，盐酸氨柔比星与各杂质的分离度均符合要求，专属性良好，色谱图见图2。
根据表中试验结果，盐酸氨柔比星样品溶液在冷藏2～8℃条件下放置稳定性较好，8小时内基本稳定，总杂由0.18%增加到0.20%，基本无变化，因此，规定供试品溶液应临用现制或在2~8℃保存8小时内进样。
2.5 线性关系考察
以盐酸氨柔比星对照品配制一系列线性浓度溶液，盐酸氨柔比星在0.52~20.73μg/ml的范围内，线性相关系数为1.0000，线性方程为A=20.5140×C+1.0282，表明该方法线性关系良好。
2.6 检测限定量限测定
在2.1的色谱条件下，配制不同浓度的样品溶液，分别进样确定本品与各杂质的检测限和定量限，检测限以S/N=2～4计，定量限以S/N=8～12计，确定盐酸氨柔比星和各杂质的检测限和定量限，检测结果见下表。各杂质检测限和定量限值均处于较低水平，方法灵敏度较高。
2.7 重复性试验
取样品在2.1色谱条件下重复6次测定，杂质10102-0424平均值为0.10%，SD=0.01%；杂质10102-0510平均值为0.01%，SD=0；杂质10102-0426平均值为0.04%，SD=0.01%；最大未知单杂平均值为0.03%，SD=0；总杂质平均值为0.20%，SD=0.01%；其他已知杂质均未检出；因此说明本方法重复性很好。
2.8 耐用性试验
在2.1的色谱条件下，更换不同批次色谱柱，微调流动相A的pH及柱温，检测专属性溶液，考察方法的耐用性，通过本次试验发现，更换色谱柱、微调流动相A的pH及柱温流速等色谱条件均能满足有关物质检测要求，说明在色谱条件有微小变化时本方法的耐用性较好。
2.9 回收率试验
取样品在2.1色谱条件下检测，以各杂质测定浓度为基准100%，分别配制成50%、100%、150%的溶液各三份，测定回收率。结果见下表。由测试结果看出，各杂质回收率在96.5%～99.9%，RSD在0.82%～4.8%之间，说明该方法测定各杂质的准确度很好。
3.讨论
本文开发了一种准确可靠的HPLC方法，能对盐酸氨柔比星中的有关物质进行有效的控制，并且对工艺中的杂质进行了全面的分析控制。该方法专属性好；在临用现制或2～8℃保存8小时溶液稳定性较好；该能够检测本品可能存在的工艺杂质和降解杂质；该方法检测相关杂质的准确度很好；在一定浓度范围内线性良好；该方法的重复性、通用性和耐用性良好。综上所述，本方法适用于盐酸氨柔比星有关物质的测定。
参考文献
[1] 吴标，黄章洲，朱凯，等．培美曲塞治疗晚期复发非小细胞肺癌临床观察[J]．中国实用医药，2009，4（12）：25-26。
[2] 卢红阳，陈莉莉，蔡菊芳，等．氨柔比星治疗小细胞肺癌研究进展[J] ．中国肺癌杂志，2010，13（5）：544-549。
[3] 张哲峰.药物杂质研究中风险控制的几个关键问题[J]．现代药物与临床，2010，25（5）：327-333。
[4] 谢沐风.再谈仿制药研发中杂质研究思路之我见[J]．中国医药工业杂质，2015，46（5）：538-546。
[5] 戚立凯，狄斌.药物杂质研究方法最新进展[J]．中国药科大学学报，2015，46（3）：257-263。
论文作者:掌效舟,张翠,孙井龙,游军辉,李赛
论文发表刊物: 《医师在线》2018年9月18期
论文发表时间:2019/3/17
标签：杂质论文; 色谱论文; 盐酸论文; 溶液论文; 方法论文; 磷酸论文; 条件下论文; 《医师在线》2018年9月18期论文;