周克琴[1]2001年在《籽用南瓜疫病苗期抗性鉴定方法及抗病材料筛选的研究》文中研究表明南瓜疫病是由Phytophthora capisici引起的一种土传病害，是籽用南瓜生产上威胁最大的病害之一。本论文主要研究疫霉菌以游动孢子在南瓜苗期接种的方法（接种浓度、接种方法、苗龄、保湿时间），确立南瓜疫病苗期抗性鉴定方法。 1.接种浓度共设8个水平，通过接种浓度与发病情况的关系图表，明确比较适宜的接种浓度范围是1250～7500孢子数/ml，5000孢子数/ml为最适宜浓度。 2.对4个不同苗龄进行接种比较，发现2叶期是接种的最佳苗龄。 3.设3种接种方法，其中灌根法最实用。而注射法发病快而且程度重，根部切伤灌根法对植株造成伤害，影响正常生长。 4.保湿时间对发病的影响很大，时间短，不能充分表现症状；时间过长，影响幼苗的正常生长；接种后保湿48小时最适宜。72小时后，发病充分，症状稳定，可以开始调查病情。 5.采用正交设计L_9（3~4），分析发现保湿时间是影响接种效果的主要因子，决定发病程度。 6.利用以上研究结果对29份南瓜试材进行抗病性鉴定，筛选出抗南瓜疫病材料6份。 7.对抗性不同的南瓜材料进行酶活性分析，发现健康植株中，POD，PPO活性差异都不明显。其抗病性与POD和PPO活性呈正相关。病菌入侵后POD活性在感病材料中增长幅度大于在抗病材料中的增长幅度；PPO活性在抗病材料中的增长幅度大于在感病材料中的增长幅度。
周克琴, 崔崇士, 屈淑平[2]2003年在《籽用南瓜疫病苗期抗性鉴定方法的研究》文中认为通过单因素试验,研究了接种浓度、接种方法、苗龄、保湿时间对南瓜疫病接种效果的影响,并采用多因素L_9(3~4)正交试验设计,筛选出南瓜苗期最佳抗性鉴定方法,即植株在3片真叶期用注射法接种,接种浓度为1250个孢子/mL,接种后保湿48h效果最好。用此方法对29份试验材料进行抗性鉴定,筛选出抗性材料1份,中抗材料6份,感病材料16份,高感材料6份。这些品种的抗性鉴定结果与田间表现的抗病性调查结果基本一致。
王永琦[3]2010年在《西瓜疫病抗性苗期鉴定方法及抗病机理研究》文中进行了进一步梳理西瓜疫病(watermelon phytophthora blight)为真菌中鞭毛菌亚门(Mastigomycotina)、霜霉目(Peronosporales)、疫霉属(Phytophthora)的疫霉菌。辣椒疫霉菌(Phytophthora capsic Leon)是引起西瓜疫病的主要疫菌,其在西瓜疫病的病原中所占的比例最大,除了侵染瓜类,还能严重侵染各种茄果类蔬菜。其发病周期短,流行速度快,防治难度大,给西瓜生产造成很大的经济损失。本研究以对西瓜疫病具有不同抗性的西瓜品种为试材,在西瓜苗期用游动孢子悬浮液接种,在接种浓度、方法、苗龄、接种后确定适宜的病情调查期等方面,确定一套准确而实用的西瓜疫病苗期人工接种抗性鉴定、筛选的方法和程序,并进行病情分级,确定抗性分级标准,同时,利用筛选出不同抗性的西瓜品种,研究接种后保护酶活性和内源激素变化,探讨其抗性机理。获得主要结果:1.接种浓度设有3个梯度。通过对接种浓度与发病情况的数据分析,明确比较适宜的接种浓度是1×106个孢子/ml。2.采用3种接种方法,注射法、喷雾法和灌根法,研究不同接种方法的优劣和实用性。结果表明,灌根法比较接近大田条件,也最实用;注射法发病快而且程度重;喷雾法发病时间长,且不易均匀喷洒。3.采用灌根法对3个不同苗龄进行接种比较,发现两片真叶期是接种的最佳苗龄期。4.通过接种天数与发病情况观察结果分析,得出在第12～15d这个时期内,病情指数比较稳定,是进行病害程度调查适宜时期。5.利用以上研究结果对27份西瓜材料进行抗病性鉴定,筛选出抗病材料11份、中抗材料6份、感病材料9份、高感材料1份。6.对抗性不同的西瓜材料进行酶活性分析,发现在健康植株中(接种前),除抗病品种PAL活性高于感病品种外,PPO和POD活性在抗、感品种中差异不明显;接种病菌后抗、感品种PPO、POD和PAL活性都显着提高,抗病品种PPO、POD和PAL活性始终高于感病品种。因此,不同抗性西瓜品种对疫病的抗性与PPO、POD和PAL活性存在一定的正相关。7.对抗病品种09-1-1、中抗品种148和感病品种GS-37体内内源激素进行接种前后的比较分析,发现接种后抗病品种体内的ZR、IAA和GA3含量高于感病品种,而JA、ABA含量则是感病品种明显高于抗病品种。因此,在不同抗性西瓜品种对疫病的抗性方面内源激素也起了重要作用。
马丽艳[4]2003年在《南瓜疫病菌（Phytophthora capsici Leon.）毒素致病机理及抗源筛选研究》文中认为本文对南瓜疫病菌P.capsici毒素的提取、毒性鉴定、组分分析及其对南瓜叶片超微结构、膜透性的破坏和抗性酶、叶绿素及丙二醛含量及生化指标的动态变化进行了系统的分析和研究，并对本课题组50份南瓜材料进行抗性鉴定，结果如下： 选出适合P.capsici产毒的液体培养基为Plich's培养液。用蒽酮比色法和牛血清白蛋白法测定了毒素中蛋白和糖的含量，结果表明P.capsici毒素中蛋白质含量为80.6％，糖含量占19.4％。 幼苗浸渍法和离体叶片法对毒素进行生物活性测定，结果表明：用毒素处理南瓜幼苗产生了用病原菌接种使所引发的症状。这说明P.capsici毒素在对南瓜的致病过程中可能起着比较重要的作用。 抗性不同品种对P.capsici感病性及其毒素敏感性的分析表明：适宜浓度毒素处理南瓜幼苗使两者明显相关。这说明可以用P.capsici毒素对南瓜进行抗性材料的筛选。 P.capsici毒素处理后，随着其浓度的增加和处理时间的延长，细胞质壁分离严重，质膜断裂；叶绿体膨胀严重，膜消失，基粒片层紊乱；线粒体膜、脊被破坏；核膜不均一。 接种适宜浓度毒素后：南瓜幼苗叶片中POD活性都明显升高，感病品种处理前期POD活性变化较大，后期变化小，而抗病品种处理前期POD活性增幅小，后期显着增加；感病品种叶片中PAL活性都比对照(蒸馏水)高，但有比对照低的时候，抗病品种在整个病程的叶片中PAL活性变化率比感病品种大，且在处理后36～48小时处有一个峰值。这种变化趋势正反映出苯丙氨酸解氨酶在抗病过程中担当防御酶的作用；叶片中MDA含量高于对照(蒸馏水)，感病品种叶片中MDA含量高于抗病品种；南瓜叶片中叶绿素含量在整个病程中均比对照(蒸馏水)低，感病品种叶绿素含量变化明显比抗病品种大，说明毒素对叶绿素含量有一定的影响，抗病品种对毒素的伤害有一定的耐力；抗性不同南瓜品种叶片电解质外渗在整个病程中都比对照显着增加，而对照叶片电导率只是缓慢增加。感病品种叶片电导率变化明显比抗病品种大，说明感病品种的叶片膜透性受到了很大的伤害，而抗病品种对毒素有一定的忍耐性； 适宜浓度毒素处理抗感不同南瓜品种根冠细胞的死亡率与病原菌鉴定的南瓜幼苗的发病情况呈现正相关性。 抗源筛选结果：抗病材料6份，耐病材料8份
韩旭[5]2008年在《疫霉菌诱导的南瓜SSH文库构建及表达序列标签分析》文中研究说明南瓜是葫芦科南瓜属一年生经济作物,其经济价值和药用价值均十分显着。随着对外贸易的发展和南瓜籽及南瓜系列产品的开发,南瓜种植面积不断扩大,为农民带来了巨大的经济效益。在有的年份和地块由于南瓜疫病的流行,籽用南瓜的产区受疫病危害,引起的死秧、烂瓜现象严重,重症年份部分地区甚至绝产,因此,疫病已成为南瓜生产的限制因子,生产上迫切需要解决疫病危害的问题。然而,只有深入研究南瓜的抗病机制以及南瓜与病原菌的互作关系,才能从根本上解决这个问题。本研究运用抑制差减杂交(SSH)技术构建cDNA文库,应用EST技术并结合生物信息学技术,通过对南瓜抗疫病相关基因的表达分析,从基因水平来研究南瓜抗病机制。为今后的南瓜抗疫病遗传育种奠定理论基础。本试验构建了一个南瓜接种疫霉菌后6,12,24,36,48,72小时的混合SSHcDNA文库,通过反向Northern杂交、质粒双酶切、菌液PCR进行初步筛选后,对其中60个阳性克隆进行单向测序获得55个质量较好的EST序列。与GenBank数据库进行BLASTx和BLASTn比较分析,共有52条EST具有蛋白编码功能,占全部分析EST的94.5%,3条EST找不到任何同源序列,推测可能是一类新的基因,或变异度较高的cDNA非编码区。与52条EST同源的推测蛋白质序列来自黄瓜、西瓜、拟南芥、水稻、甘蓝型油菜、甘蓝、马铃薯、葡萄、玉米、烟草、高粱、甜菜、菜豆等多个物种。通过对获得的EST序列进行分析,推测钙调蛋白激酶、茉莉酸等信号传导系统可能参与了南瓜抗疫病防卫反应过程中的信号传导,但各信号传导间的相互作用机制还不清楚。抗病相关转录因子包括锌指蛋白、MYC转录因子、G-box结合蛋白,它们可能在南瓜抗病防卫反应基因的表达调控中起到重要作用。在本研究中,有两条EST与马铃薯和拟南芥的抗病基因类似物有部分同源性,应该是参与南瓜抗疫病反应的重要基因。另外在所获得的EST中存在部分非生物胁迫诱导蛋白如热休克蛋白、盐诱导蛋白等。说明生物机体对外界的胁迫反应,存在某种协同机制。在获得的EST中还包括一些RNA加工、蛋白翻译与加工、光合作用、能量代谢基因,说明这些基础功能基因也与南瓜抗病机制相关。
参考文献：
[1]. 籽用南瓜疫病苗期抗性鉴定方法及抗病材料筛选的研究[D]. 周克琴. 东北农业大学. 2001
[2]. 籽用南瓜疫病苗期抗性鉴定方法的研究[J]. 周克琴, 崔崇士, 屈淑平. 吉林农业大学学报. 2003
[3]. 西瓜疫病抗性苗期鉴定方法及抗病机理研究[D]. 王永琦. 西北农林科技大学. 2010
[4]. 南瓜疫病菌（Phytophthora capsici Leon.）毒素致病机理及抗源筛选研究[D]. 马丽艳. 东北农业大学. 2003
[5]. 疫霉菌诱导的南瓜SSH文库构建及表达序列标签分析[D]. 韩旭. 东北农业大学. 2008