（1金华职业技术学院医学院 浙江 金华 321000）（2浙江大学医学院附属第二医院 浙江 杭州 310052）
【摘要】 目的：建立快速测定血浆样品中苯妥英钠和丙戊酸钠的UPLC-MS/MS方法。方法：采用三重串联四级杆液质联用仪，以C18色谱柱分离，甲醇-醋酸铵为流动相，多反应监测模式进行检测。供试样品以甲醇沉淀蛋白后直接分析的方法。结果：苯妥英钠和丙戊酸钠在0.2μg?mL-1～2μg?mL-1浓度范围内均具有良好的线性关系，其日内、日间精密度均小于10%，方法回收率大于80%。结论：本方法样品前处理方法简便，检测方法专属性强，适用于苯妥英钠和丙戊酸钠的血药浓度监测。
【关键词】 UPLC-MS/MS；苯妥英钠；丙戊酸钠
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）24-0377-01
癫痫是临床常见的慢性中枢神经系统性疾病[1]，常用抗癫痫药物有苯巴比妥、苯妥英钠和丙戊酸钠等，且多为肝药酶诱导剂，多种抗癫痫药物联用则存在药物血药浓度增加或降低，从而带来多种不良反应[2-3]。本研究拟用超高效液相色谱串联四级杆质谱（UPLC-MS/MS）分析技术，建立快速检测人血浆中苯妥英钠和丙戊酸钠浓度的方法，为该类药物的个体化给药方案的制定、临床药物中毒判断等提供帮助。
1.材料与方法
1.1 仪器与试剂
所用仪器Agilient 6460三重串联四级杆液质联用仪；对照品：苯妥英钠（100210-201002）、丙戊酸钠（100963-201302），纯度：99.8%，均由中国食品药品检定所提供。
1.2 色谱条件
色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18（2.1×50mm，1.8μm），流动相为10mM醋酸铵和乙腈梯度洗脱，流速0.3ml/min，柱温40℃，进样量2μl。
1.3 质谱条件
电喷雾离子源，离子源温度120℃，用多反应监测（MRM）模式。苯妥英钠和丙戊酸钠Frag分别为70，16V，CE分别为12，18V，检测的离子对分别为m/z251.2→251.2，m/z143→143，负离子扫描分析。
1.4 标准溶液配制方法
配制药物对照品的混合储备液，在200μl空白血浆中，精密加入10μl对照品混合溶液，配制得对照液标准浓度范围见表1。标准溶液范围为0.2μg?mL-1～20μg?mL-1。
1.5 血浆样品处理方法
量取血浆样品200μL，置于1.5mL塑料离心管中，涡旋混合30s，加入甲醇800μL，涡旋混合60s，4℃、1×104 rpm离心30min，取上清液，进样2μL。
2.方法学考察
2.1 专属性
取6个不同来源的人空白血浆样品，混合均匀后取200μL，加入甲醇500μL，按血浆样品处理并进样分析。另配制苯妥英钠和丙戊酸钠质控血浆样品，得到空白血浆添加对照品色谱图，结果待测物峰形良好，分离效果佳，血浆内源性物质对待测物无干扰，保留时间分别为3.363和3.730min。
2.2 标准曲线与最低检出限
分别称取苯妥英钠和丙戊酸钠对照品适量，各加入甲醇，制成10.0mg?mL-1储备液。精密量取适当的标准储备液，制成系列混合对照品溶液。在200μL空白血浆中加入10μL混合对照品溶液，制成系列的质控血浆样品。按“1.5”项操作，以待测物质量浓度(X)为横坐标，待测物峰面积(Y)为纵坐标，其加权(1/X)线性回归后，得回归方程分别为：Y=2222.87X-49.88（R2=0.9984）；Y=121.17X-11.10（R2=0.9993）。
2.3 精密度和提取回收率
取空白人血浆，配制3个低、中、高质量浓度的质控样品，按血浆样处理方法进行处理。每质量浓度5份同日测定，连续测定3d。当日的随行标准曲线计算样品的测定质量浓度，与配制的质量浓度对照，得方法回收率。将质控样品的峰面积计算RSD，考察方法的日内、日间精密度，数值均＜15%，回收率均＞80%，结果见表1。
【参考文献】
[1]杨莉，齐晓涟.抗癫痫药物治疗临床药师指导手册.人民卫生出版社，2011：114-148.
[2]戴博，张华峰，宋青，等.高效液相色谱-质谱联用法同时测定苯巴比妥、丙戊酸钠、苯妥英钠和卡马西平的血药浓度[J].中国临床药理学杂志，2011，27（3）：213-215，222.
[3]胡岚岚.HPLC-MS/MS法测定人血浆中左乙拉西坦浓度及其药代动力学研究[J].药物分析杂志，2016，36（4）：655-661.
基金项目：浙江省教育厅项目（项目编号FG2015011）
论文作者:麻佳蕾1,许东航2,陈菲（通讯作者）1,吴筱丹2
论文发表刊物:《医药前沿》2018年8月第24期
论文发表时间:2018/9/5
标签：血浆论文; 戊酸论文; 浓度论文; 样品论文; 方法论文; 色谱论文; 甲醇论文; 《医药前沿》2018年8月第24期论文;