摘要：为了保证饲料粗蛋白测定结果准确性，从测定实验仪器、测定过程与方法以及关键环节三个方面展开讨论，了解到样品称取、样液消化、消化液蒸馏、滴定这四个环节需要注意的问题，旨在提高测定规范性。
关键词：饲料粗蛋白；测定；营养指标；国标法
饲料检测过程中，粗蛋白是其中非常关键的一项指标，用以检测饲料中的营养指标，以期能够获得最高的经济利润。但是，作为养殖户，有时会因为饲料营养不足而导致减收的现象，所以，饲料粗蛋白测定便成为一项非常重要的工作，通过获得的测定数值了解饲料中的粗蛋白情况。饲料粗蛋白测定比较常用的方法包括国标法、凯氏定氮法与双氧水法等，其中国标法在实际应用时，受到操作方法与设备等因素的影响，测定样本在诸多环节中会形成误差。所以，下面围绕饲料粗蛋白测定中应注意的重要环节展开分析。
1测定实验仪器
饲料粗蛋白测定实验过程中，需要用到如下仪器设备：（1）实验室用样品粉碎机，飞利浦搅拌机，HR2168；（2）分样筛，孔径0.45mm，40目；（3）分析天平，感量0.0001g；（4）石墨消解仪，HanonSH220F；（5）滴定管，酸式10mL；（6）消化管，250mL；（7）定氮仪，HanonK1100F；（8）辅助仪器：容量瓶1000mL，100mL各2个、大肚移液管10mL等。
2样品配置过程与方法
（1）配置盐酸标准溶液（0.1000mol/L），移取9mL，浓盐酸（盐酸浓度36%~38%）使用超纯水稀释并定容至1000mL容量瓶中,摇匀；（2）配置浓度为40%的氢氧化钠溶液1000mL，选择400g分析纯氢氧化钠用超纯水溶解并稀释至1000mL；（3）配置0.05mol/L硫酸铵标准溶液1000mL（做定标用），称取已经干燥处理过的硫酸铵6.6065g,使用蒸馏水将其溶解稀释至1000mL，并且摇匀备用。溶液内氮的含量是1.4mg/mL；（4）配置浓度为2%的硼酸溶液2000mL，使用40g分析纯硼酸用无氨蒸馏水溶解并稀释至2000mL；（5）配置混合指示剂:准确称量0.1g甲基红+0.5g溴甲酚绿，用无水乙醇定容至100ml,指示剂和硼酸溶液按照1:100的比例混合，(6)干燥处理：将基准物质无水碳酸钠放入干燥皿中摊平，再将干燥皿放入干燥炉内，温度调节到270℃，干燥处理1h，温度降低至室温之后，盖上盖子放入干燥皿冷却处理，并备用：硫酸铵干燥处理，与无水碳酸钠的处理方法相同，放入到干燥皿中，摊平的厚度以0.5cm为准，将盖子放置于瓶口处，随后在温度为103℃的干燥箱内干燥处理1h，随后冷却至室温备用（减少水分对酸滴定的影响）。
3饲料粗蛋白测定中应注意的关键环节
3.1样品称取环节
称样必须要保证准确性和精确度，其中需要关注一些细节。取样时样品要与样品勺紧贴，轻放到无氮滤纸上，以免出现样品洒落的现象，最后连同滤纸一起消化。样品用量国标是以0.5~1.0g为准，如果使用定氮仪建议调整至0.2~0.5g[1]。精确度为0.0001.
3.2样液消化环节
（1）催化剂选择。消化样品之前，要在其中掺加无水硫酸铜+无水硫酸钠混合做催化剂，使消化温度得到提升。催化剂通常要以样品特性为根据，普通的样品消化最好以无水硫酸铜为催化剂，再采用强热源。如果样品比较容易发泡，建议在消化之前在其中掺加一些氧化剂。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆氧化剂用量方面，如果其中无水硫酸钠用量过多，会对消化温度造成影响。所以消化期间要合理控制其用量。
（2）硫酸。量取硫酸用量时，一般要充分结合样品取样量，实验中通常量取10~12mL，将其加到样品中一起消化。如果样品的含盐量较高，可以适当增加硫酸用量，避免样品加热之后挥发，降低检测结果准确性。
（3）样品消解。将称量的样品、催化剂以及约10mL浓硫酸一起放进石墨消解仪进行消解，期间控制好消解的温度和时间。
3.3消化液蒸馏环节
（1）空蒸与蒸馏。正式实施空蒸之前检验人员要将冷凝水打开，使用空消化管进行蒸馏操作，时间为10min，将管路清洗干净，确保蒸馏器可以正常运行，期间也要详细检验蒸馏的各个环节，准确称取硫酸铵0.2g代替试样，根据蒸馏样液流程测定硫酸铵的含氮量，测定结果在21.19%±0.20%左右。
（2）样液蒸馏。空蒸环节完成之后，将排废液阀开启，连接装有样液蒸馏管，以免出现回吸的问题[2]。在管内气压的作用下，样液进入到废液管中，影响样品检测结果。所以蒸馏的过程中务必要将排废液阀关闭，避免氨气在废液管中溢出。
3.4滴定环节
（1）标准滴定液0.1000mol/LHCL标定是测定结果的直接影响因素，所以滴定液标定要以国标为基准。一方面要保证基准物质（无水碳酸钠）称量的精准性并加入50ml超纯水稀释，滴定前要使无水碳酸钠完全溶解，再加入2滴的混合指示剂，摇匀，酸式滴定管滴定前要记得排气泡，边滴定边摇匀，期间最大程度的避免滴定误差，另一方面实验中使用的平行样在加热前的颜色要相同，加热之后控制盐酸消耗[3]。另外，滴定读数也需要保证精准性，期间要避免出现读数不准确与误读等现象。（建议双人做正、复标，算出相对平均偏差值为滴定值，以减少实验误差）。
3.5定标
实验操作期间做定标必不可少。用大肚移液管量取1omL0.05mol/L硫酸铵标准溶液到5~6个消化管蒸馏，计算数值，分别减一个最大值与最小值，取平均值再乘以定氮仪的修正系数即定标系数。
此外，实验用到的溶液均为超纯水配制,试剂为分析纯，容器提前使用纯水清洗超过三次，实验所需溶液必须装在带塞的试剂瓶中，完成溶液配制之后将其盛入至试剂瓶内,并且要在试剂瓶上贴上标签等信息，注意溶液的保质期，以免发生溶液变质的现象。
结束语
综上所述，饲料粗蛋白测定实验中，操作人员必须要了解各个环节需要注意的问题，避免出现操作方面的问题，从而导致测定误差，影响饲料粗蛋白测定结果。今后组织相关测定工作，需要严格按照国标要求，保证测定结果准确性，获得高质量饲料产品。
参考文献
[1]王彪,崔文艳,何朋杰等.解淀粉芽孢杆菌ASR-12粗蛋白对多种植物病菌的抑制作用[J].安徽农业大学学报,2019,46(05):865-869.
[2]杨长庚,苏富强,文华等.不同蛋白源饲料对克氏原螯虾生长及胰岛素生长因子受体基因表达的影响[J].淡水渔业,2019,49(05):86-92.
[3]袁艳茹.全自动蛋白测定系统在饲料粗蛋白检测中的应用[J].乡村科技,2018(01):88-89.
论文作者:黄伊颖
论文发表刊物:《基层建设》2019年第29期
论文发表时间:2020/3/11
标签：样品论文; 饲料论文; 蛋白论文; 溶液论文; 干燥论文; 硫酸铵论文; 滴定论文; 《基层建设》2019年第29期论文;