张建业 温天文（通讯作者） 贾元超 陈庆峰（南京为绿生物科技有限公司 江苏 南京 ２１００３２）
【中图分类号】Ｒ９６９．４【文献标识码】Ａ【文章编号】１６７２－３７８３（２０１５）０７－０３９９－０１【摘要】目的建立乙酰半胱氨酸口服溶液有关物质控制方法。方法运用ＨＰＬＣ法测定乙酰半胱氨酸口服溶液中有关物质，色谱柱：Ｃ１８（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）柱［流动相：甲醇：硫酸铵缓冲溶液（０．２５％硫酸铵＋０．２６％辛烷磺酸钠＋０．３４％磷酸二氢钾。ｐＨ＝１．８）为９：１。检测波长：２０５ｎｍ。结果建立的有关物质测定方法，其浓度０．１～２ｍｇ／ｍｌ内，浓度与峰面积呈良好线性关系，各条件下降解产物峰与主成分峰及辅料峰分离良好。结论本法科学、合理，适用于本品有关物质质量控制。
【关键词】乙酰半胱氨酸；口服溶液；有关物质；ＨＰＬＣ法乙酰半胱氨酸，英文名为ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ（ＮＡＣ），是一种疗效好、安全性高的治疗呼吸道感染的祛痰药。由于乙酰半胱氨酸易氧化，尤其在水溶液中不稳定，易产生Ｌ．胱氨酸、Ｌ．半胱氨酸、Ｎ．乙酰半胱氨酸、Ｎ，Ｎ．二乙酰胱氨酸等有关物质。因此，本文建立了ＮＡＣ口服溶液有关物质的质量控制方法，并对该方法进行了验证。１仪器与材料１．１仪器ＬＣ．１０ＡＴｖｐ（ＶＰ）液相色谱仪（ＳＨＩＭＡＤＺＵ）、ｐＨＳ．３ＣＷｐＨ计（上海理达仪器厂）、电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。１．２试药ＮＡＣ对照品（中国药检所）、ＮＡＣ原料药（武汉远大弘元药业有限公司）、辛烷磺酸钠（天津市化学试剂研究所）、ＮＡＣ口服溶液（自制）等。２方法与结果２．１有关物质方法学建立２．１．１色谱条件及系统适用性试验色谱柱：Ｃ１８（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）柱；流动相：甲醇：硫酸铵缓冲溶液（０．２５％硫酸铵＋０．２６％辛烷磺酸钠＋０．３４％磷酸二氢钾；ｐＨ＝１．８）为９：１；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；柱温：３０℃；检测波长：２０５ｎｍ；进样量：２０μｌ。精密稳定ＮＡＣ对照品适量，配制成约５００μｇ／ｍｌ溶液，ＮＡＣ主峰相对保留时间约５．５ｍｉｎ，见图１；取Ｎ，Ｎ．．二乙酰胱氨酸、半胱氨酸、Ｎ，Ｓ．二乙酰半胱氨酸、Ｎ．乙酰胱氨酸对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释成５００μｇ／ｍｌ溶液，主峰与已知各杂质峰达到有效分离，结果见图２。
图１ＮＡＣ对照品ＨＰＬＣ图图２各杂质ＨＰＬＣ图（１．Ｌ．胱氨酸，２．Ｌ．半胱氨酸，３．Ｎ．乙酰半胱氨酸，４．Ｎ，Ｎ．二乙酰胱氨酸） ２．１．２检测波长选择取ＮＡＣ对照品适量，精密称定，加流动相溶解制成１０ｍｇ／ｍｌ的溶液，照分光光度法，在４００～ ２００ｎｍ波长内扫描，结果本品在２０５ｎｍ波长处仅有末端吸收。２．１．３标准曲线的建立 精密称取ＮＡＣ对照品０．０５ｇ于２５ｍｌ容量瓶中，用去离子水溶解定容，配制成浓度２ｍｇ／ｍｌＮＡＣ对照品溶液为母液。依次取０．５ｍｌ、１ｍｌ、２．５ｍｌ、５ｍｌ、１０ｍｌ母液于５个１０ｍｌ容量瓶，去离子水定容，分别制成０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ对照品溶液，备用。
在上述色谱条件下，进样２０μｌ，记录色谱图。以ＮＡＣ的浓度为横坐标（Ｃ），峰面积为纵坐标（Ａ）求得线性回归方程为：Ａ＝．５０７１４．３３＋７．２１×１０６×Ｃ，ｒ＝０．９９９５。由结果可见， ＮＡＣ浓度在０．１～２ｍｇ／ｍｌ范围内，两者浓度与峰面积呈良好线性关系。２．１．４精密度试验 精密称取ＮＡＣ对照品０．０２５ｇ于２５ｍｌ容量瓶中，用去离子水溶解定容，配制成浓度１ｍｇ／ｍｌＮＡＣ对照品溶液为母液。依次移取２．５ｍｌ、５ｍｌ、１０ｍｌ母液于３个１０ｍｌ容量瓶中，去离子水定容，分别配制成０．２５ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ的对照品溶液，进样记录色谱图，结果含量ＲＳＤ为０．９２２％，精密度良好。２．１．５回收率试验 分别精密称取三份ＮＡＣ原料药，依次为０．０１５８ｇ、０．０２０１ｇ、０．０２４４ｇ，置于１０ｍｌ容量瓶，然后按处方量加入其他辅料，用去离子水溶解定容，进样２０μｌ，结果平均回收率为９９．４３％，ＲＳＤ＝０．８１１％。２．１．６检测限 取ＮＡＣ对照品约２５ｍｇ，加流动相稀释逐级稀释对照品溶液，调节仪器灵敏度至信噪比为１０：１时，计算结果最小检出量为０．２２ｎｇ。２．２专属性试验２．２．１干扰试验 分别取流动相为空白溶剂、混合后的辅料适量，加流动相制成一定浓度的溶液（按处方比例配制），按上述同一色谱条件下分别进样，记录色谱图，结果空白溶剂、各辅料峰与对照品主峰分离良好，不干扰主峰检测
２．２．２酸、碱破坏试验 取ＮＡＣ原料适量２份，精密称定，分别加４ｍｏｌ／ｍｌ的盐酸溶液１ｍｌ，４ｍｏｌ／ｍｌ的氢氧化钠溶液１ｍ，室温放置１２ｈ，分别中和后，以流动相稀释制成１ｍｇ／ｍｌ溶液，按上述同一色谱条件下进样，记录色谱图，结果酸、碱条件下各杂质峰与对照品主峰分离良好。２．２．３高温破坏试验 取ＮＡＣ原料适量，于１０５℃加热２ｈ，放置至室温，精密称定，加流动相溶解并稀释制成１ｍｇ／ｍｌ的溶液，进样，记录色谱图，结果各杂质峰与对照品主峰分离良好。２．２．４氧化破坏试验取ＮＡＣ原料适量，精密称定，加３０％双氧水１ｍｌ，室温放置６ｈ，以流动相稀释制成１ｍｇ／ｍｌ的溶液，进样，记录色谱图，结果各杂质峰与对照品主峰分离良好。２．２．５光照破坏试验取ＮＡＣ原料适量，于紫外光下光照２ｄ，精密称定，加流动相溶解并稀释制成１ｍｇ／ｍｌ溶液，进样，记录色谱图，结果各杂质峰与对照品主峰分离良好。
２．２．６样品测定采用自身对照法，取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成５００μｇ／ｍｌ溶液，作为供试品溶液；另精密量取该溶液，以流动相为溶剂制成５μｇ／ｍｌ溶液，作为对照溶液，进样，记录色谱图至ＮＡＣ主峰保留时间３倍，计算。经三批自制样品检测，结果单个有关物质均小于０．１％，总杂质均小于０．２０％。３讨论本文采用了自身对照法检测乙酰半胱氨口服溶液有关物质，而未采用杂质对照品法，是考虑到本品理论可能产生上述提到的四种杂质，但其产生量极少，有的还不在制剂中产生，为了降低成本，以及考虑自身对照法足够满足有关物质质量控制，因此，采用自身对照法。如果对制剂有更严格要求，或者制剂处方工艺导致样品不够稳定，且明确已知杂质，可以考虑杂质对照法。
项目编号：南京市２０１３创基０２６参考文献［１］方红英，王福根，庄让笑，等．制备环境对Ｎ．乙酰半胱氨酸木糖醇注射液有关物质的影响［Ｊ］中国药业，２０１０（０２）：３７．３８．［２］ＴａｌａｓａｚＡＨ，ＫｈａｌｉｌｉＨ，ＦａｈｉｍｉＦ，ＭｏｊｔａｂａＳ．ＰｏｔｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｏｆＮ．ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅｉｎｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｏｒｄｅｒｓ［Ｊ］．Ｔｈｅｒａｐｙ，２０１１，８（３）：２３７．２４５．［３］方硕，魏荣卿，刘晓宁，等．高聚物型色谱柱分离乙酰半胱氨酸及其有关物质［Ｊ］．分析试验室，２０１０（０１）：２５．２８．［４］包倩倩，温天文，等．乙酰半胱氨酸口服溶液的制备及其质量控制［Ｊ］．医药导报，２０１２（０２）：２３２．２３３．
论文作者:张建业 温天文（通讯作者） 贾元超 陈庆峰
论文发表刊物:《健康必读》2015年第7期供稿
论文发表时间:2015/8/17
标签：溶液论文; 半胱氨酸论文; 乙酰论文; 色谱论文; 精密论文; 杂质论文; 主峰论文; 《健康必读》2015年第7期供稿论文;