【基金项目】台州市黄岩区科研立项（2013059-2）
【摘要】目的：探讨用VITEK 2 Compat鉴定仪和VITEK MS质谱仪直接对血培养阳性标本细菌鉴定的可行性。方法：对临床血培养阳性标本分离的259株细菌用VITEK 2 Compact鉴定仪和VITEK MS质谱仪进行直接鉴定，同时用API板条用传统法鉴定的结果作为标准结果,将两种直接鉴定结果与标准结果进行比对。结果：对259株菌进行鉴定，用API板条传统法、VITEK 2 Compact鉴定仪直接法及VITEK MS质谱直接法鉴定时间分别为38.5±6.3h、8.1±2.4h、1.2±0.6h，革兰氏阴性杆菌和革兰氏阳性球菌用VITEK 2 Compact鉴定仪直接鉴定符合率分别为94.3%（134/142）、89.7%（105/117），鉴定仪直接鉴定总符合率为92.2%（239/259）；用VITEK MS质谱仪直接鉴定符合率分别为79.5%（113/142）、70.9%（83/117），质谱仪直接鉴定总符合率为75.6%（196/259）。结论：对血培养阳性标本进行离心处理，用VITEK MS质谱仪进行鉴定作为临床初级报告，用VITEK 2 Compact鉴定仪进行直接鉴定和药敏作为正式报告，两种方法互为补充，相互促进，为临床及时、合理和有效的抗菌素治疗提供可靠依据。
【关键词】血培养；VITEK 2 Compat鉴定仪；VITEK MS质谱仪；直接法
血培养阳性后及时将细菌鉴定结果提供临床是成功治疗血流感染的关健，细菌鉴定方法有多种，鉴定时间也不尽相同。为了探讨血培养阳性标本不同快速细菌鉴定方法的准确性，作者收集台州市第一人民医院2014年6月到2015年4月间Bact/Alert 3D血培养仪检测到阳性标本，采用不同转速离心，去除红细胞、活性碳等杂质，并用生理盐水洗涤菌悬液，调节一定菌悬液浓度，直接上VITEK 2 Compact微生物鉴定仪和VITEK MS微生物质谱仪进行细菌鉴定，共鉴定出细菌259株，同时用API板条传统法鉴定进行准确性评估，实验取得了较好的效果，现报道如下：
1 材料与方法
1.1 菌株来源
本实验收集的259株细菌来源于台州市第一人民医院2014年6月到2015年4月间临床送检的血培养阳性标本，经染色为单一菌感染，其中革兰氏阴性杆菌142株，革兰氏阳性球菌117株，包括临床常见需氧菌以及部分苛养菌。多重细菌、专性厌氧菌和真菌感染因结果不可靠或菌株有限不作为本次研究范畴。
1.2 质控菌株
大肠埃希氏菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853，金黄色葡萄球菌ATCC29213，金黄色葡萄球菌ATCC25923，肺炎克雷伯菌ATCC700603均购自杭州怡丹生物技术有限公司。
1.3 仪器及材料
Bact/Alert 3D血培养仪及配套FA、SN、PF血培养瓶、VITEK 2 Compact 微生物鉴定仪及配套GP鉴定卡、GN鉴定卡、NH鉴定卡，VITEK MS微生物质谱仪及配套裂解试剂VITEK MS-FA、基质液VITEK MS-CHCA，API板条及配套试剂，以上均为法国梅里埃公司产品，购自杭州怡丹生物技术有限公司；血平板、巧克力平板购自杭州威晟生物公司。培养箱为日本三洋二氧化碳孵箱（型号：MCO-175），上海一恒隔水式恒温培养箱（型号：GHP-9050N）
1.4 方法
1.4.1 Bact/Alert 3D阳性处理 将血培养标本放入Bact/Alert 3D血培养仪，系统自动孵育和检测，当系统
阳性报警时进行移种血平板和巧克力平板进行传统法培养，置5% CO2，35℃培养箱培养18h～24h，待其生长菌落，如果第二天生长出两种或两种以上的细菌，将不作本研究的范畴。同时对阳性培养液进行如下操作：抽取培养瓶内5～7 ml培养液于无菌试管内进行两次不同转速离心，即150 r/min离心5 min后，收集上清，再经1525 r/min离心15 min，沉淀用0.9%无菌盐水洗涤离心2次。离心收集菌细胞，作为直接鉴定的待测菌。
1.4.2 VITEK 2 Compact鉴定仪直接鉴定 将以上处理好的待测菌用VITEK 2 Compact鉴定仪根据不同的细菌选择GP、GN、NH等鉴定卡按照仪器操作规程上机进行鉴定， 6～10小时后仪器检测结束后记录检测结果。
1.4.3 VITEK MS质谱仪直接鉴定 吸取以上处理的待测菌1μl涂布在质谱条上的检测孔中，室温下干燥，加入0.5μl VITEK MS-FA裂解试剂,待干燥后再加入1μl基质液VITEK MS-CHCA,干燥后上机检测，15-30分钟后读取检测结果。
1.4.4 API板条鉴定 取移种血平板或巧克力平板培养18-24后的纯菌落，按API说明书进行鉴定，并以此结果作为鉴定标准结果。
2 结果
2.1 鉴定时间的对比
血培养阳性报警后，用API板条进行传统法鉴定，同时对血培养阳性标本处理后收集的菌悬液用VITEK 2 Compact鉴定仪和VITEK MS质谱仪直接鉴定，259株细菌用三种方法鉴定时间为38.5±6.3h、8.1±2.4h、1.2±0.6h 。
2.1 鉴定结果的对比
以API鉴定结果作为鉴定标准结果，VITEK 2 Compact鉴定仪、VITEK MS质谱仪直接鉴定结果与其对比，259株细菌中革兰氏阴性杆菌和革兰氏阳性球菌用VITEK 2 Compact鉴定仪直接鉴定符合率分别为94.4%（134/142）、89.7%（105/117），鉴定仪直接鉴定总符合率为92.3%（239/259）；用VITEK MS质谱仪直接鉴定符合率分别为80.3%（114/142）、70.9%（83/117），质谱仪直接鉴定总符合率为76.1%（197/259），见表1。
表1 VITEK 2 Compact鉴定仪及VITEK MS质谱仪直接鉴定与API板条传统法鉴定结果对比
注:鉴定不符包括未鉴定出和鉴定错误的
3 讨论
血培养是诊断血流感染的“金标准”，传统血培养阳性标本的细菌鉴定耗时长，患者得不到及时、有效的冶疗。国内有学者[1]直接对血培养阳性标本进行鉴定，其方法能在血培养阳性报警后8～12小时得到检验报告；也有国外学者[2] 利用分离胶或皂苷裂解等方法直接提取阳性血培养瓶中的细菌，再联合质谱仪进行快速鉴定, 0.5～2小时等到检验结果，比传统方法减少23-46小时。本研究对这两种方法进行了对比，直接用VITEK MS质谱法鉴定时间优势明显。
血培养阳性标本用VITEK 2 Compact鉴定仪或VITEK MS质谱仪直接进行鉴定会因培养瓶中的红细胞、活性碳及其它物质干扰影响鉴定结果的准确性，因此要对血培养阳性标本进行处理。如果处理方法不一样，其提取的菌悬液纯度也不一样，本研究利用细菌与其它物质的沉降率不同，用不同的离心速度收集菌悬液，不使用化学物质，不破菌细菌本身的结构，符合细菌生化反应和质谱鉴定要求。对259株细菌进行鉴定，革兰氏阴性杆菌及革兰氏阳性球菌用VITEK 2 Compact鉴定仪直接鉴定符合率分别为94.4%（134/142）、89.7%（105/117），鉴定仪总符合率为92.3%（239/259），高于Quesada等学者[3]对革兰氏阴性菌直接鉴定符合率的82%～90%，也可能原因是本研究采用离心、洗涤菌细胞等方法，减少了标本中的干扰，模拟了传统检测方法，提高了细菌鉴定符合率。用VITEK MS质谱仪直接鉴定革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌符合率分别为80.3%（114/142）、70.9%（83/117），质谱仪总符合率为76.1%（197/259），与Meex等 [4]直接用质谱鉴定革兰氏阴性菌符合率的90%，革兰氏阳性菌符合率的52%有差别，可能原因是VITEK MS质谱仪检测的是细菌的蛋白质 ,虽然经过离心,血培养标本中大部分红细胞、白细胞和其他有形成分被离心去除，但菌体富集物仍然含有少量杂质成分，有可能影响细菌的纯度，导致直接鉴定试验产生误差,可通过增加额外的洗涤步骤提纯细菌，进一步提高直接鉴定试验的符合率。本研究用VITEK MS质谱仪对血培养阳性标本中的临床常见细菌进行鉴定,鉴定到属水平在85.7%～100%，与Schieffer等[5]研究结果相近。用VITEK MS质谱仪对肺炎链球菌、草绿色链球菌等链球菌鉴定符合率不尽人意，可能与这些细菌间的质谱峰差异太小，质谱仪无法分辨有关。
从以上研究可以看出，对血培养阳性标本进行离心处理，用VITEK MS质谱仪进行鉴定, 具有快速、简便的优点，并且有较高的属水平符合率，作为临床初级报告，可以满足对常见病原菌快速诊断的需求；用VITEK 2 Compact鉴定仪对处理好的标本进行直接鉴定和药敏，鉴定的细菌、药敏及耐药表型作为正式报告，可以对初步报告进行纠正和评估，两种方法互为补充，相互促进，有很好的及时、有效指引作用，为临床及时、合理和有效的抗菌素治疗提供可靠依据。
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论文作者:段达荣,蔡莎莎,张虹
论文发表刊物:《中医杂志》2016年12月
论文发表时间:2017/6/1
标签：鉴定论文; 质谱仪论文; 阳性论文; 细菌论文; 标本论文; 方法论文; 分别为论文; 《中医杂志》2016年12月论文;