【摘要】 目的:采用扩增阻滞突变系统(ARMS)法检测肺腺癌患者的EGFR基因突变情况,探讨该基因突变的临床意义。方法:收集我院病理科的148例肺腺癌患者标本作为研究对象,包括82例肺活检标本、24例手术切除标本以及42例胸腔积液细胞块标本。采用ARMS法检测所选标本的EGFR基因突变情况,分析该基因突变与肺腺癌患者的临床资料的相关性。结果:本文所选148例肺腺癌患者标本,共检测出EGFR基因突变60例(40.5%);在性别、吸烟史上,EGFR基因突变情况存在差异(P<0.05);在年龄及肿瘤家族史上,EGFR基因突变情况不存在差异(P>0.05)。提示EGFR基因突变与患者的性别及吸烟是存在相关关系。结论:ARMS法可有效应用于肺腺癌临床病理石蜡标本中 EGFR 基因突变检测,吸烟是EGFR突变的重要影响因子。
【关键词】 ARMS法;肺腺癌;EGFR
【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2019)04-0103-01
一直以来,寻找早期筛查肺癌的方法是学者目前的热门研究问题。表皮生长因子(EGFR)是一种受体型酪氨酸激酶,在细胞的生长、生殖以及分化过程中发挥着重要的调节作用。经过诸多研究发现EGFR在多种肿瘤中会存在突变表达,对肿瘤的生长、侵袭以及转移发挥调节作用。尤其是在肺腺癌中具有较高的突变率[2]。临床实践研究中,分析肺腺癌患者的EGFR基因突变对于患者的靶向治疗疗效具有全面性评价,评价EGFR基因突变检测,对于选择合适的患者进行靶向治疗十分必要。本文则探讨采用ARMS法检测肺腺癌患者的EGFR基因突变并分析。
1.临床资料
收集我院病理科的148例肺腺癌患者标本作为研究对象,包括82例肺活检标本、24例手术切除标本以及42例胸腔积液细胞块标本。所选患者中男性86例,女性62例,年龄在34-78岁之间,所选患者均未进行放化疗及其他抗癌治疗。
2.研究方法
2.1 标本采集与 DNA 提取
根据经验切取不同类型的肿瘤标本,制作石蜡标本,采用厦门艾德公司的石蜡包埋组织样品 DNA 提取试剂盒,进行DNA提取。调整DNA质量浓度至2ng/μl。
2.2 EGFR检测
检测EGFR基因突变,具体为19del,L858R以及T790M突变。
采用ARMS法检测EGFR基因突变,仪器为ABI 7500荧光 PCR仪,试剂盒购自厦门艾德生物公司的人类 EGFR 基因突变检测试剂盒。具体实验操作按照试剂盒说明书进行:取上述DNA标本23.5μl,加入1.5μlTaq酶,进行混匀后取出5μl加入8联管。然后进行程序扩增,95℃ 5min,95℃ 25s,64℃ 20s,72℃ 20s,15个循环;93℃ 25s,60℃ 35s,72℃ 20s,31 个循环。60℃时收集荧光信号。
2.3 统计学分析
采用SPSS19.0统计学软件进行数据分析,计数资料进行卡方检验,结果均以P<0.05为差异有统计学意义。
3.结果
3.1 EGFR基因在肺腺癌标本中的突变
本文所选148例肺腺癌患者标本,共检测出EGFR基因突变60例(40.5%)。具体基因突变类型,包括19del突变23例(15.5%),L858R突变34例(23.0%),19del和L858R双突变2例(1.35%)。本文未检测到T790M突变。
3.2 EGFR 基因突变与肺腺癌临床病理特征的关系
根据是否存在EGFR基因突变,进行分组为EGFR基因突变阳性组和阴性组,比较不同临床资料患者间的差异,结果提示在性别、吸烟史上,EGFR基因突变情况存在差异(P<0.05);在年龄及肿瘤家族史上,EGFR基因突变情况不存在差异(P>0.05)。提示EGFR基因突变与患者的性别及吸烟是存在显著关系。
表1 EGFR基因突变与肺腺癌患者相关因素分析 [n(%)]
4.讨论
在NCCN指南推荐中,对于晚期肺腺癌患者的一线治疗可根据是否存在EGFR等驱动基因事件进行指导,其中EGFR基因突变的类型不同,其靶向治疗效果亦存在一定的差异。因此,临床上准确检测肺腺癌患者的EGFR基因突变,对于指导患者的个体化靶向治疗具有重要意义。EGFR基因突变,与诸多因素有关,如患者因素、检测方法以及标本因素等。
本文在总结既往诸多文献基础上,采用以荧光定量PCR技术为基础的ARMS法,根据不同位点设计的特异性探针,特异性识别并扩增 EGFR 突变序列,尽量减少非肿瘤组织的干扰。通过ARMS检测法,最大限度地缩短扩增产物的目标长度,避免DNA提取出现片段化。结合RT-PCR平台在扩增时采用了一个闭管操作,简单,不需要产物的后处理,较大避免了扩增产物的污染,使得结果更为准确。
本文研究结果提示所选148例肺腺癌患者标本,共检测出EGFR基因突变60例(40.5%),检出率较高,与宿杰·阿克苏相关报道一致[1]。进一步研究EGFR基因突变的临床资料,提示不同性别、吸烟史患者其EGFR基因突变发生率存在差异,女性、不吸烟患者EGFT突变率更高为53.2%、50.5%,提示吸烟会影响患者的EGFR基因突变。而肿瘤家族史以及患者年龄方面因素,不会影响患者的EGFR发生突变。因此,临床上对于女性、不吸烟的肺腺癌患者建议进行 EGFR基因突变检测,进一步指导临床治疗。
【参考文献】
[1]贺锐,李建民,王跃华,等.EGFR基因突变与肺腺癌新分类及临床病理特征的关系[J].临床与实验病理学杂志,2013,29(12):1323-1328.
[2]赵艳秋,刘杰,柳瑞青,等.肺腺癌组织学亚型与EGFR突变及临床特征的关系[N].西安交通大学学报(医学版),2014,35(1):94-98.
[3]宿杰·阿克苏,侯英勇,刘亚岚,等.PCR直接测序法与ARMS检测非小细胞肺癌EGFR基因突变[J].临床与实验病理学杂志,2014,30(3):328-31.
论文作者:吴海乔
论文发表刊物:《医药前沿》2019年4期
论文发表时间:2019/4/18
标签:腺癌论文; 基因突变论文; 患者论文; 标本论文; 突变论文; 肿瘤论文; 差异论文; 《医药前沿》2019年4期论文;