（1青岛大学基础医学院免疫学系 山东 青岛 266071） （2潍坊市人民医院内分泌科 山东 潍坊 261041）
【摘要】目的：分析探讨甲状腺球蛋白基因外显子33单核苷酸多态性（E33SNP）与Graves’病（GD）停药后复发的关系。方法：选取2015年9月—2016年12月在我院内分泌科就诊的108例GD患者的临床资料进行分析，依据ATD治疗停药后复发的不同时间进行分组：GD停药后1年内复发者38例为A组；GD停药后1～2年内复发者37例为B组；GD停药后2年内未复发者33例为C组。另以我院排除GD的健康体检者33例为对照组。所有受检对象均利用RT-PCR检测E33SNP基因型，比较各组间基因型频率、等位基因频率及停药后不同基因型GD患者甲状腺相关功能指标。结果：A组CC基因型患者构成比78.95％（30/38），显著高于B组和C组（P＜0.05），CT型患者构成比为10.53％（4/38），显著低于B组和C组；B组CC型患者构成比为56.76％（21/37），显著高于C组（P＜0.05）。各观察组CC基因型患者TRAb水平均显著高于组内其他基因型（P＜0.05）。结论：甲状腺球蛋白基因外显子33单核苷酸C/C型患者是GD停药后短期内复发的最高危人群，在抗甲状腺药物（ATD）治疗时应延长低剂量维持给药时间，降低复发率，改善患者预后水平。
【关键词】甲状腺球蛋白；单核苷酸多态性；Graves’病；复发
【中图分类号】R581.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）04-0110-02
Association of thyro-globulin gene exon 33 single nucleotide polymorphisms with recurrence of Graves disease after drug withdrawal
Lu Hongwen1, Huang Lingyu2, Wang Xuesong2, Zhang Bei1*.
1.Department of Immunology; Basic Medical College of Qiingdao University, Qingdao Shandong 266071.2 Endocrinology Dept, Weifang People's Hospital, Weifang, Shandong 261041,China.
【Abstract】Objective To analyze the relationship between the polymorphism of exon 33 of thyroglobulin gene and the relapse of Graves' disease after drug withdrawal. Methods A total of 108 patients with Graves' disease were enrolled in this study from September 2015 to December 2016. The clinical data were analyzed retrospectively. According to the recurrence of Graves disease after the withdrawal of different groups, will be discontinued within 1 year after the recurrence of Graves disease is set to A group, 1 to 2 years after the withdrawal of Graves disease recurrence set to B group, 2 years after the withdrawal of Graves The disease has not been relapsed as C group, and the other included in our hospital physical examination center to exclude Graves disease examination of a total of 33 cases as a control group. All subjects were genotyped. The genotype frequency, the frequency of allele and the thyroid function of different genotype Graves patients were compared and analyzed. Results The proportion of CC genotype in group A was 78.95% (30/38), which was significantly higher than that in group B and group C (P <0.05), and the ratio of CT type was 10.53% (4/38) The proportion of CC group was 56.76% (21/37) in group B, which was significantly higher than that in group C (P <0.05). The levels of TRAb in CC genotype were significantly higher than those in other genotypes (P <0.05). Conclusions For thyroglobulin gene exon 33 mononucleotide C / C patients are the highest risk relapse in the short term after the onset of Graves' disease, and prolonged low dose maintenance time for antithyroid drugs Reduce the recurrence rate, improve the prognosis of patients.
【Key words】Thyroglobulin; Single nucleotide polymorphism; Graves disease; Recurrence
GD是临床常见自身免疫性甲状腺疾病，促甲状腺激素受体抗体分泌水平异常增加所致甲状腺功能亢进是GD发病的最主要因素[1]。临床常采用ATD、手术、碘131等治疗方法，以ATD治疗为主，但停药后复发率较高。近来针对GD的研究集中在基因抗原方面[2-3]，研究显示甲状腺球蛋白（Tg）E33SNP与GD的发病密切相关，但较少涉及到Tg基因外显子多态性与GD停药后复发之间的关联性[4]。本研究对108例山东潍坊地区汉族GD患者进行临床资料回顾分析，探讨E33SNP与GD停药后复发的关系。
1.资料与方法
1.1 一般资料
选择2015年9月—2016年12月期间在潍坊市人民医院内分泌科就诊的GD患者108例为研究对象，均只接受ATD治疗18个月以上。根据GD患者停药后复发时间的不同分组：将停药后1年内GD复发者设为A组（38例，男性4例，女性34例，年龄20～60岁，平均40.2±10.1岁）；将停药后1～2年GD复发者为B组（37例，男性7例，女性30例，年龄为19～58岁，平均41.3±11.5岁）；将停药后2年内GD未复发者为C组（33例，男性6例，女性27例，年龄为21～62岁，平均40.8±12.9岁）；另选择我院体检中心健康查体者排除GD共33例作为对照组（男性9例，女性24例，年龄25～60岁，平均40.5±12.3岁）。
各组一般资料对比差异无显著性（P＞0.05）。
1.2 检测方法
1.2.1 E33SNP基因型检测 采集外周血2.0ml（EDTA抗凝），以血液基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，以超微量核酸蛋白定量仪检测其浓度，提取浓度A260/A280介于1.8，2.0范围，样本置于-20.0℃冷冻保存备测。利用RT-PCR技术检测样本E33SNP多态性并进行基因分型，引物由上海生工公司提供。PCR反应体系：模板1ul，上下游引物各1ul，2X HS TaqE mix 10 ul，20X EvaGreen 1ul，加ddH2O至20ul。PCR反应条件：94.0℃5.0min，94.0℃10.0s，65.0℃30.0s，72.0℃30.0s，循环反应35次，72.0℃ 10.0min。反应完成后以GeneScanning软件分析处理，产物进行琼脂糖凝胶电泳回收后外送进行基因测序，根据测序峰谱图对E33SN基因型进行判断。
1.2.2观察指标 比较各组受检对象基因型频率、等位基因频率以及停药后缓解期不同基因型GD患者甲状腺功能指标（TRAb、Tg、TSH、FT3、FT4，免疫化学发光法）进行分析。
1.2.3统计学分析 相关数据以统计学软件SPSS 19.0分析，以（x-±s）表示计量资料，经t检验；以率（％）表示计数资料，经χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
观察组内A组CC基因型患者构成比显著高于B组及C组，CT型患者构成比显著低于B组以及C组，C等位基因明显高于C组，T等位基因明显低于C组；B组CC型患者构成比显著高于C组。观察组和对照组的基因型频率、等位基因频率差异无显著性。见表1。
各观察组CC基因型患者TRAb水平均显著高于组内其他基因型。不同基因型患者FT3、FT4、TSH、Tg差异无显著性。见表2。
3.讨论
导致GD复发的因素有多种，除去遗传因素外，非遗传因素如应激、年龄、性别、吸烟、病程、甲状腺疾病家族史、碘盐的摄取等也对GD复发有重要影响，具体机制比较复杂。大多数的研究针对GD复发的非遗传性因素，较少涉及到遗传性因素对GD复发的影响[5-6]。以往研究表明GD的ATD使用需2年以上的长程治疗，疗程较短缓解率很低。疗程达到2年后也应认真评估后再考虑是否停药，否则复发的可能性大。
E33SNP是近年来Tg基因研究较多的多态性位点，有关报道中针对我国不同地区汉族人群Tg基因多态性与AITD的关系进行了分析，显示E33SNP与GD的发生具相关性[7-8]，但不同地区、不同种族的人群其E33SNP各基因型频率、等位基因频率及是否与GD发生相关具有一定的差异性。
本研究针对山东潍坊地区汉族人群不同时段复发GD患者E33SNP进行研究与分析，显示A组CC型患者构成比显著高于B组和C组，CT型患者构成比为显著低于B组和C组；B组CC型患者构成比显著高于C组。针对各观察组基因型GD患者甲状腺功能检测发现，CC基因型患者TRAb水平均显著高于组内其他基因型。提示甲状腺球蛋白E33SNP C/C型患者是GD停药后短期内复发的最高危人群，应考虑在ATD治疗时延长低剂量维持给药时间，以降低复发率，改善患者预后水平。
【参考文献】
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[8] WangLQ，WangTY，SunQL，etal.Correlationbetweenthyroglobulingenepolymorphismsandautoimmunethyroid disease[J]. Mol Med Rep，2015，12:4469-4475.
论文作者:卢洪文1,黄灵玉2,王雪松2,张蓓1（通讯作者）
论文发表刊物:《医药前沿》2018年2月第4期
论文发表时间:2018/3/9
标签：患者论文; 停药论文; 甲状腺论文; 基因型论文; 高于论文; 多态性论文; 球蛋白论文; 《医药前沿》2018年2月第4期论文;