蔡鹏威 徐如梅 吴文冰 陈雯
（福建省立医院检验科 福建福州 350001）
【摘要】目的:探讨外周血CD4+T细胞亚群表达变化在子痫前期患者发病中的作用。方法：选取在福建省立医院进行产前检查的子痫前期患者25例及正常晚孕妇女27例，育龄期健康未孕妇女20例。利用流式细胞术检测3组研究对象外周血中Th1、Th2、Th17和CD4+CD25highCD127low调节性T细胞比例，比较其在子痫前期与正常妊娠时的变化。结果:⑴正常妊娠组与正常未孕组相比，Th2和Treg细胞的表达明显升高（P＜0.05）；⑵子痫前期组与正常未孕组相比，Th1、Th2、Th17和调节性T细胞的表达明显升高（P＜0.05）⑶子痫前期组与正常妊娠组相比，Th1和Th17的表达明显升高（P＜0.05）。结论：正常妊娠可能依赖于Th1、Th2、Th17及Treg这4种细胞间的平衡，妊娠的成功倾向于Th2和Treg细胞的保护性免疫状态，而Th1、Th17细胞过度表达则可能导致子痫前期的发生。
【关键词】CD4+T细胞亚群 子痫前期 免疫平衡失调
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）01-0109-02
子痫前期是妊娠期常见的并发症，在我国的发病率约为9.4%，该病严重危害母婴健康，其发病原因尚不清楚，可能涉及母体、胎盘和胎儿等多种因素，包括有滋养细胞侵袭异常、免疫调节功能异常、内皮细胞损伤、遗传因素和营养因素。本研究通过流式细胞术检测外周血CD4+T细胞亚群表达，了解子痫前期患者免疫调节功能变化的异常。
1 对象与方法
1.1 研究对象
收集2012年4月到2013年2月在福建省立医院进行产前检查的子痫前期患者25例为子痫前期组，年龄25～34岁；同期分娩的正常晚期妊娠患者27例为正常妊娠组，年龄23～33岁；同时选取育龄期健康未孕妇女20例为正常未孕组，年龄23～34岁。3组研究对象均为中国汉族人群，既往均无心、肝、肾等主要脏器功能损伤，无糖尿病、慢性高血压及自身免疫性疾病史，无感染及近期用药史。两组孕妇均为单胎妊娠，均未临产且无胎膜早破等合并症。
1.2 检测仪器及试剂
单克隆抗体IFN-γ APC、IL-4 PE、Mouse IgG2a APC、Mouse IgG1 PE、CD8 FITC、CD3 PerCP、IL-17 PE、CD4 PerCP、CD25 FITC、CD127-PE购于美国BD公司，FACS Calibur流式细胞仪为美国BD公司生产。
1.3 样本采集及处理
研究对象采集标本前均未服用影响免疫功能的药物，取肘正中静脉血4ml并用肝素钠抗凝在8h内用流式细胞仪检测。
1.4 流式细胞仪分析
1.4.1 外周血中Th1、Th2和Th17细胞的百分比检测 等量的肝素钠抗凝全血和RPMI 1640混匀后，加入刺激剂，37℃5%CO2培养箱中孵育5h，通过破膜剂处理后，分别按 CD3/ CD8/IFN-γ/IL-4 、CD3/CD8/IL-17进行多色荧光抗体标记，CD3/ CD8/Mouse IgG2a/Mouse IgG1作为阴性对照，在散点图上用CD3-CD8设门，CD3+CD8-确定出CD4+T淋巴细胞的分布位置，计算出Th1、Th2和Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比，每份标本分析 10,000个细胞。
1.4.2 外周血中Treg细胞的数量的百分比检测
取充分混匀的100μl抗凝全血，CD4/ CD25/CD127进行多色荧光抗体标记，CD4/ Mouse IgG2a/Mouse IgG1作为阴性对照，在散点图上用CD4 -SS设门确定出CD4+T淋巴细胞的分布位置，计算出CD4+CD25highCD127low调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比，每份标本分析10,000个细胞。
1.5 统计学方法
实验数据均以x-±s表示，采用SPSS13.0软件进行统计分析，使用t检验进行数据统计。以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
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从表1可见，正常妊娠组与对照组比较，Th2细胞和Treg细胞比例显著升高（P<0.05），Th1/Th2比值下降；子痫前期组与与对照组比较，Th1、Th2、Th17和Treg细胞比例均显著升高（P<0.05），Th1/Th2比值和Th17/Treg比值升高；子痫前期组与正常妊娠组比较，Th1和Th17比例均显著升高（P<0.05），Th1/Th2比值和Th17/Treg比值升高。
3 讨论
妊娠是一种半同种异体移植现象，母体免疫系统对其表现出免疫营养和免疫防护而非免疫攻击，一旦这种母胎免疫耐受遭到破坏，可导致病理妊娠。以往的研究表明Th1/Th2的平衡在母胎免疫耐受中发挥重要的作用，但是，随着CD4+T细胞家族的新成员Th17细胞与介导免疫耐受的调节性T细胞(regulatory T cell，Treg)的发现，及其在炎症和自身免疫反应中发挥关键作用[1,2]，相关的研究备受关注，妊娠期免疫调节的研究重点由传统 Th1/Th2免疫调节模式转向Th17/Treg、Th1/Th2共同调节模式。
本实验结果显示，在正常妊娠情况下，机体主动性的上调了Th2和调节性T细胞的表达，Th1/Th2比值下降，Th2细胞具有分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10的功能，后者能刺激B细胞增殖、成熟和促进抗体生成，介导以抗体中和作用及免疫理作用为主的免疫保护作用，在孕妇体内产生的针对胎儿父源性HLA的封闭抗体，减少母体对胎儿的免疫排斥反应；调节性T细胞是一个具有免疫应答负调节功能的Th细胞亚群，在保持机体的自身耐受性方面发挥着具有决定性的免疫抑制作用，CD127是Treg细胞的特异性标志，低表达CD127外周血CD4+CD25+T细胞大多是Foxp3+T细胞，并且与Foxp3的表达呈负相关关系。研究证实，人类早孕期，胎儿抗原特异性Treg细胞选择性地迁移到蜕膜，在蜕膜组织中大量堆积，人绒毛外滋养细胞表达的HLA-C可引发异基因T细胞免疫反应，而蜕膜中的Treg细胞可抑制这种免疫攻击[3]。此外，妊娠期外周血Treg细胞的绝对数增大，占外周Th细胞的8.9%，比非妊娠女性高2倍[4]，这些结果证实了Treg的免疫抑制效应在母胎免疫耐受中的体现。妊娠时上调Treg细胞表达水平，有助于降低母体对胎儿的免疫反应性，是妊娠成功的保障。
子痫前期病人Th1、Th2、Th17和调节性T细胞与对照组比较均显著增加，并且与正常妊娠组比较，Th1和Th17升高显著，Th17/Treg比值升高与Santner-Nanan[5]等研究一致的，提示在子痫前期患者体内Th1升高的幅度大于Th2，发生Th1／Th2漂移而偏向于Th1优势型，Th1细胞通过分泌IL-2、IFN-γ等细胞因子介导产生细胞毒作用等免疫损伤，Th1升高可促进细胞介导的免疫应答，活化单核-巨噬细胞及NK细胞等对滋养层细胞攻击增强，导致胎盘血管病变，胎盘缺血，而引起子痫前期的病理改变。Th17细胞是由原始T细胞前体分化而来，具有独立发育、分化调节机制，并特异性地产生白细胞介素(interleukin，IL ) 17效应因子，在自身免疫性疾病、感染性疾病以及移植排斥反应中发挥重要的调节作用。IL-17在其发挥生物学效应过程中与IL-23的促进分泌作用密切相关，Thl7分化并不一定需要IL-23，但IL-23对维持Thl7的存活至关重要[6]，Thl型细胞因子IL-12与IL-23具有相同的亚基成分，即p40，Th1细胞的升高可能是子痫前期病人维持高水平Th17的原因之一，近年来，随着IFN-γIL-17双阳性细胞的发现，以及这种细胞在自身免疫病中的重大功能，预示着Th1和Th17也许有更紧密的关系。
综上所述，正常妊娠可能依赖于Th1、Th2、Th17及Treg这4种细胞间的平衡，妊娠的成功倾向于Th2和Treg细胞的保护性免疫状态，而Th1、Th17细胞过度表达则可能导致子痫前期的发生。
参考文献
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论文作者:蔡鹏威,徐如梅,吴文冰,陈雯
论文发表刊物:《医药前沿》2014年第1期供稿
论文发表时间:2014-4-3
标签：细胞论文; 免疫论文; 比值论文; 作用论文; 免疫调节论文; 抗体论文; 患者论文; 《医药前沿》2014年第1期供稿论文;