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【摘 要】目的 冰冻切片是一种在低温下使组织快速冷却，进行切片的一种方法，现在多应用于外科手术中快速病理诊断。影响制片质量的因素诸多，固定就是其中之一，为了在短时间内制作出一张高质量的冰冻切片，固定液的选择显得尤为重要。通过对4种固定液在冰冻切片中的染色效果进行对比分析，以筛选出对冰冻切片最适合的固定液，提高组织切片的染色效果。方法 选取四种使用频率较高的固定液，对63例乳腺组织标本冰冻切片组织进行固定，将固定后的冰冻切片进行HE染色，对染色结果进行对比分析。结果 使用甲醇固定液固定后，细胞形态显示一级、二级和三级的比例分别为92.1%、7.9%和0.0%，和其他三组两两比较，优势明显，差异有统计学意义（P＜0.05）；甲醇固定液固定后组织的染色效果优于其他三组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 甲醇固定液对冰冻组织切片固定后，对细胞形态的影响小，且染色后细胞形态基本正常无明显收缩，胞浆胞核对比显著，染色效果理想。
【关键词】固定液；冰冻切片；HE染色
冰冻组织切片染色对于临床病理学诊断有重要辅助价值[1]，选择不同的固定液对组织进行固定后，组织染色效果也不同程度的受到影响[2]。为了将不同固定液在冰冻组织切片中的染色效果进行对比分析，筛选理想的固定液，提高HE染色的效果，笔者选取了常用的四种固定液对63例乳腺组织标本的冰冻切片进行固定处理，固定后进行HE染色，具体报告如下：
1 资料和方法
1.1临床资料 收取63例乳腺组织标本，包括正常乳腺组织8例、导管原位癌11例、浸润性乳腺癌组织标本23例和乳腺肌瘤标本21例。
1.2固定液：AFA液（95%乙醇85ml、浓甲醛10ml、冰醋酸5ml）、95%乙醇、丙酮、甲醇（95%乙醇45ml、甲醇45ml、冰醋酸10ml）
1.3方法
1.3.1取材及切片大小为1.5m*1.5cm，厚2-3cm的新鲜乳腺组织，挤少许普通胶水放入冷冻组织托盘上，将胶水底层冷却变硬后，将组织块放在变硬的胶水上，再涂适量胶水覆盖在组织上30s，用冰冻锤使其快速冷却。
1.3.2固定及染色切片
所有组织标本进行包埋处理后，连续切片，分别制成四张4μm厚度的组织切片共63*4张，固定5分钟。固定液包括：①AFA液；②95%乙醇；③丙酮；④甲醇。固定后进行HE染色。
1.4 评估标准 染色后，63*4张组织切片于显微镜下观察，判断染色效果。具体包括观察细胞固定后的收缩情况及染色后组织的清晰情况，每项评估指标分三级，级数越低，则表示固定后的染色效果越佳[3]。其中细胞形态的判定为：细胞形态基本正常，没有出现明显的收缩为一级；细胞形态发生改变，明显收缩为二级；细胞出现严重的收缩为三级。组织清晰度的判定为：组织结构清晰，胞浆及胞核染色对比明显为一级；组织结构清晰度一般，胞浆和胞核对比不明显为二级；组织结构模糊，胞浆和胞核对比差为三级。
1.5 统计分析 对四组切片的统计数据进行比较，其差异采用卡方和T检验，当P＜0.05时，差异有统计学意义。
2 实验结果
2.1 四种固定方式对细胞形态的影响
见表1，63例组织分别使用四种固定液固定后行HE染色，镜下观察细胞收缩情况，发现细胞的形态发生了不同程度的改变，其中：使用甲醇固定后细胞形态显示一级、二级和三级的比例分别为92.1%、7.9%和0.0%，和其他三组两两比较，优势明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示相比于其他三种固定液，使用甲醇固定引起细胞的收缩程度最轻，细胞形态的变化程度最小，即对细胞形态变化的影响最小。
3 讨论
对病变组织进行冰冻切片染色，从而协助临床医生确定患者组织病变的性质，指导临床诊断和制定治疗方案都有重要的临床指导价值[4]。因此，对组织进行冰冻切片、固定、染色，每一步都十分重要。固定液固定组织会对组织切片造成不同程度的影响，进而会影响染色效果。目前，对于冰冻切片的固定液有许多种，选择有效的固定液对于提高染色效果意义重大[5]。因此为了筛选出较为理想的固定液对冰冻组织切片进行固定，减轻固定液对细胞形态的影响，提高染色效果，笔者进行了本次实验。
笔者选取了63例乳腺组织标本，将标本分别制成4张组织切片，使用四种不同的固定液进行固定处理，固定后进行HE染色，镜下观察细胞形态变化及组织的染色情况，对比四种固定液对染色效果的影响。镜下观察细胞收缩情况，发现细胞的形态发生了不同程度的改变，其中：使用甲醇固定后细胞形态显示一级、二级和三级的比例分别为92.1%、7.9%和0.0%，和其他三组两两比较，优势明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示相比于其他三种固定液，使用甲醇固定引起细胞的收缩程度最轻，细胞形态的变化程度最小，即对细胞形态变化的影响最小。进一步镜下观察四种固定液固定后组织的染色情况，结果显示：使用甲醇固定后细胞染色效果一级、二级和三级的比例分别为96.8%、3.2%和0.0%，和其他三组两两比较，优势明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示相比于其他三种固定液，使用甲醇固定后组织染色结构清晰度高，胞浆胞核的对比明显，染色效果最为理想。
综上所述，4种固定液中，甲醇固定液对于冰快速冻组织切片固定后染色效果最好，对细胞形态的影响小，且染色后组织轻度明显，胞浆胞核对比显著，染色效果理想。
参考文献：
[1]梁艳清.六种固定液对冰冻切片苏木素-伊红染色效果的比较[J].解剖学研究，2012，34（2）：159-60．
[2]张利朝，陈英华，赵永斌等.四种固定液对肾上腺组织冰冻切片固定效果的比较[J].中国临床解剖学杂志，2013，31（3）：357-359．
[3]胡锦林，王灿铭，郭振英.固定液对冷冻切片质量的影响[J].临床与实验病理学杂志，2015，31（6）：706-707．
[4]王伟力，许成英，朱国良.5种固定液对冷冻切片苏木精-伊红染色法染色质量影响研究[J].海峡药学，2013，25（8）：92-94.
[5]杨秀静，滕孝静.冰冻切片技术经验探讨[J].临床和实验医学杂，2014，23：2002-2004.
论文作者:王喜
论文发表刊物:《航空军医》2016年第21期
论文发表时间:2016/11/22
标签：切片论文; 组织论文; 冰冻论文; 细胞论文; 甲醇论文; 形态论文; 效果论文; 《航空军医》2016年第21期论文;