（常州儿童医院检验科 江苏 常州 213003）
【摘要】目的：探讨荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用价值。方法：随机选取来我院进行治疗的80名患者，采用荧光定量PCR技术在临床微生物检测技术进行检测，观察临床微生物的情况。结果：荧光定量PCR技术在临床微生物检测技术的精确度高，特异性好、效果好。结论：荧光定量PCR技术在临床微生物检测中敏感度好，精准度高。
【关键词】荧光定量PCR技术；临床微生物检测；敏感度
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）15-0162-02
荧光定量PCR技术是最近几年发展起来的一种核酸临床微生物检测技术，荧光定量PCR技术已经是目前国内外在临床医学的检测上运用的较多的定量PCR技术，采用的是始点定量和荧光检测系统实时监测的荧光强度来进行相关的检测，荧光定量PCR技术的优点是灵敏度高、特异性强、快速准确定量等。荧光定量PCR技术不仅仅能够在基因定量检测中得以运用，还能准确定量疾病中的相关基因的问题，目前已经应用于人类和动物疾病的快速检测、定量分析、早期诊断、基因分型等方面。主要通过绝对定量和相对定量2种方式实现定量检测，虽然都有各自的优缺点，但是检测方法的使用需要根据具体情况选择合适的定量方式，然后才能得到更准确的检测结果[1]。应用提高荧光定量PCR技术，在测试的指标上需要从特异性和灵敏度多方面分析，主要是特异性探针及引物的设计，选择合适的Mg2+浓度、引物和探针浓度、循环数等。现在荧光定量PCR技术在病毒、细菌、真菌和寄生虫4个临床微生物检测方面也取得了巨大的应用价值。我院以治疗的80名患者为研究对象，采用荧光定量PCR技术对其标本进行微生物的检测，取得了很好的治疗效果，现详细报告如下：
1.资料与方法
1.1 一般资料
以2014年6月-2015年6月来我院门诊或者是住院的患者80例为研究对象，男47例，女33例，年龄在19～73岁，平均年龄为（40.5±4.2）岁；泌尿系感染有11例，细菌性食物中毒的患者有7例，上呼吸道感染的患者有30例，流行性感冒的患者有26例，慢性阻塞性肺病有6例；80份患者的标本中，粪便有52份，脓液有28份。
1.2 一般方法
80例患者的标本都采用荧光定量PCR技术进行检测，将1.5ml样本增菌液滴入1.5ml的灭菌Epp管中，均匀震荡，用高速离心机离心2分钟的时间。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆清洗后再剩余的残渣中加入适量的DNA提取液，然后在离心机上离心5分钟，进行PCR的反应，利用PCR检测仪进行扩增检验，配制适量的反应融合液。在机器上设置循环参数、阴性对照、阳性梯度模板，严格的按照检测仪和检测说明书的操作来进行对结果的判定，微生物菌分离后，再进行测试性的特异性的检测。在检测阳性后，进行稀释（10配梯度），按照严格的测试程序扩增PCR的敏感性的分析。
2.结果
在检测的52份粪便中，检测出沙门氏菌有16例，阳性率为30.8%。肠出血大肠杆菌有2例，阳性率为3.8%，溶血性杆菌9例，阳性率为17.3%；在脓液液标本的28份中，金黄色的葡萄杆菌有3例，阳性率为10.7%。选取沙门氏菌、肠出血大肠杆菌、溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌阳性的各5株，检测他们的特异性，结构特异性达到了100%，没有检测出假阴性和假阳性。沙门氏菌、肠出血大肠杆菌、溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌进行10倍系列系数的检测，来验证PCR的敏感程度，结果出现了核酸样本为最低核酸检测的程度。
3.讨论
3.1荧光定量PCR技术在病毒检测中的应用
在病毒的检测过程中，目前采用比较广泛的荧光定量PCR技术能够准确的检测出多种复杂的病毒。在对B型肝炎的检测中以不同的混合型的样本为研究的对象，对混合型基因进行检测，结果就是全部的混合型的样本都被检测出来了，所以可以证明荧光定量PCR技术具有高精度的检测功能。对于少了手足口病的患者进行诊断治疗时，采用传统的ESISA法和荧光定量PCR技术相结合的诊断治疗对样本进行详细的检验[2]。荧光定量PCR技术在检测的过程中速度十分的快速，能够在短时间内对手足口病进行确诊，大大的提高了临床治疗手足口病的效率，对于临床实践的发展有着重要的作用。
3.2 荧光定量PCR技术在细菌检测中的相关应用
随着荧光定量PCR技术不断地成熟，在医学的诊断中得到了大量的应用，立足于TaqMan荧光定量PCR技术形成了一种检测结合的分支杆菌，采用这两种结合的方法能够将敏感度提高到90%以上，甚至是更高，特异性高达100%。比采用传统的检测方法的治疗的效果要好，治疗的效率更高。荧光定量PCR技术的沙门氏菌的ompf基因，能够检测出所有的病理，具有高敏感度和高特异性，检测的时间短，检测结果出现的快[3]。
3.3 荧光定量PCR技术在真菌检测中的相关应用
荧光定量PCR技术在真菌检测重的应用也是比较的多，根据曲霉菌的序列设计和疑似此病状的相应的荧光定量PCR技术的检测，总结出检测的特异性，结果特异度达到了100%，检测十分的精准。
3.4 荧光定量PCR技术在人类寄生虫检测中的应用
在检测中采用荧光定量PCR技术当中的内部质控，对52份粪便中的微孢子进行相应的检测，对人类治病的鞭毛虫A型和B型进行荧光定量的检测，为临床的流行病的检测提供了依据。在对于羊水样本中的刚地弓形中进行检测时，运用RE的特异性和敏感性进行治疗检测。
4.结论
荧光定量PCR技术在现代医学中的应用涉及到的领域越来越多，FDA和CFDA已经被认为是荧光定量PCR技术的一部分，随着荧光定量PCR技术自身的不断的完善和完备，在临床上应用荧光定量PCR技术检测微生物已经成为了主流趋势，采用荧光定量PCR技术检测微生物能够提高检测的精准性和特异性，提高临床诊断治疗的效率，为临床治疗提供了更为科学更为高效的检测方法，值得在临床有广泛的采用荧光定量PCR技术用于检测微生物。
【参考文献】
[1]王宇，靳伟东，兰凯，刘天尧.荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用[J].中国卫生标准管理，2015，30:151-152.
[2]朱军伟，杭锋，王钦博，宋馨，侯建平.实时荧光定量PCR技术在乳品微生物学中的应用研究进展[J].安徽农业科学，2014，15:4764-4766+4771.
[3]李敏，綦国红.实时荧光定量PCR技术在食源性致病菌检测中的应用[J].中国食物与营养，2014，08:13-17.
论文作者:江海平
论文发表刊物:《医药前沿》2017年5月第15期
论文发表时间:2017/5/27
标签：定量论文; 荧光论文; 技术论文; 微生物论文; 特异性论文; 阳性论文; 患者论文; 《医药前沿》2017年5月第15期论文;