肖炳燚[1]2001年在《人源性单克隆抗体确定的卵巢癌抗原表位的分析》文中研究表明自1975年Kohler和Milstein创立淋巴细胞杂交瘤技术以来，应用单克隆抗体相继发现了多种卵巢癌肿瘤标志。本室于1999年构建的永生化卵巢癌细胞DNA转染体细胞AT_4所分泌的人源性抗卵巢癌单克隆抗体（HMcAb）AT_4确定了一种新的肿瘤标志——人卵巢癌细胞膜表面抗原CAT_4。 本课题以辛酸/硫酸铵法纯化得到的HMcAb AT_4为探针，对正丁醇法提取的人卵巢癌细胞膜表面可溶性抗原粗提物（OV-CBE）进行了Dot blotting、SDS-PAGE、Western blotting分析，旨在了解CAT_4表位的生化性质。 辛酸/硫酸铵沉淀法可纯化转染体细胞AT_4培养上清中的HMcAb AT_4，经SDS-PAGE分析，主要呈现两条区带，分子量分别为54.3kD和25.6kD。 正丁醇法提取的人卵巢癌细胞膜表面可溶性抗原粗提物（OV-CBE）经Dotblotting检测，发现其中含有能被单克隆抗体AT_4识别的CAT_4；生化鉴定结果显示，CAT_4是一种蛋白质，而非糖蛋白、糖脂；SDS和还原剂β-巯基乙醇处理单克隆抗体确定的CAT_4后，会丧失其表位原有的抗原反应性；Western blotting结果表明，HMcAb AT_4识别的CAT_4表面表位是构象依赖性的肽。SDS-PAGE实验显示，OV-CBE含有13条区带，分子量各为91.8kD、88.1kD、78.0kD、76.5kD、74.9kD、69.1kD、59.9kD、56.4kD、53.1kD、44.2kD、36.8kD、32.0kD、26.1kD。 本研究结果提示，人卵巢癌细胞表面可表达一种低分子量的含构象决定簇的肿瘤抗原分子。
邬淑云, 温淦升, 徐方云, 刘秋如, 龚文华[2]1998年在《体外免疫建立分泌卵巢癌反应性单克隆IgG人-鼠杂交瘤》文中进行了进一步梳理用正丁醇提取的人卵巢癌细胞ａｏ１０／１７抗原，置于含免疫反应剂的无血清培基中免疫人脾细胞。经融合、筛选和克隆化，建立了９株分泌人源性单克隆ＩｇＧ抗体（ＨｍＡｂ）的人－鼠杂交瘤细胞系ＡＦ１～ＡＦ９。酶标抗体竞争抑制试验表明，其中ＨｍＡｂＡＦ５和ＡＦ８能识别卵巢癌抗原分子上的不同表位；杂交瘤细胞系所分泌的ＨｍＡｂ的效价高，所识别的抗原表达于卵巢癌细胞的表面
石君帆[3]2004年在《人源性噬菌体抗体库与rhG-CSF基因工程ScFv抗体的研究》文中研究表明一、抗rhG-CSF噬菌体抗体库的构建和鉴定 目的 构建抗rhG-CSF噬菌体抗体文库，以探索制备rhG-CSF病诊疗用单克隆抗体的新方法。方法用文库构建试剂盒，以健康人外周血淋巴细胞为材料，建立噬菌体抗体文库，并对其进行鉴定。结果 构建完成了一滴度为6.42×10~(10)cfu／ml的噬菌体抗体库。结论 rhG-CSF噬菌体抗体库的建立为对文库进行进一步的筛选、表达奠定了基础。 二、抗rhG-CSF噬菌体抗体库的筛选和阳性克隆的鉴定 目的 研制rhG—CSF的单链抗体。 方法 用rhG-CSF抗原包板，对己构建的抗rhG-CSF噬菌体抗体库进行3轮富集，然后用ELISA法从富集的次级抗体库中筛选阳性克隆，最后借助ELISA、SDS-PAGE和Western印迹等方法，根据克隆表达产物与其它4种抗原反应的情况，进行特异性鉴定。 结果 从随机挑取的80个克隆中筛选到阳性克隆6个，经交叉筛选和鉴定最终获得特异性抗rh6-CSF阳性克隆2个。 结论 用固相富集和ELISA筛选法可以从抗体库中有效地筛选到抗rhG-CSF的阳性克隆，获得的抗体克隆可用于抗rhG-CSF单链抗体的制备。 叁、抗rhG-CSF噬菌体抗体基因结构分析 目的 对获得的抗rhG-CSF的抗体克隆进行基因分析。方法 将2株阳性克隆抗体基因进行测序，并用NCBI和Ig Blast Antibody of Immunoglobulin sequences中的软件，对DNA序列和由其推导的氨基酸序列进行分析，并对其二级结构进行了模拟。结果 G9和G32阳性克隆抗体基因的长度分别为708bp和732bp，轻链和重链可变区基因与人免疫球蛋白基因有高度的同源性。推导的氨基酸序列具有典型的抗体轻、重链可变区特征。对2株克隆抗体基因二级结构进行模拟，结果显示以β-折迭和转角为主的平行肽链形成片层样结构，均符合抗体的基本构型。结论 G9、G32阳性克隆外源基因均属于人免疫球蛋白可变区基因。
参考文献：
[1]. 人源性单克隆抗体确定的卵巢癌抗原表位的分析[D]. 肖炳燚. 江西医学院. 2001
[2]. 体外免疫建立分泌卵巢癌反应性单克隆IgG人-鼠杂交瘤[J]. 邬淑云, 温淦升, 徐方云, 刘秋如, 龚文华. 细胞与分子免疫学杂志. 1998
[3]. 人源性噬菌体抗体库与rhG-CSF基因工程ScFv抗体的研究[D]. 石君帆. 浙江大学. 2004
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