[摘要]：目的：探讨艾滋病病毒（HIV）核酸检测用于HIV感染者／艾滋病（AIDS）病人诊断的可行性，为制定新的检测策略提供依据。方法：2016年1月-2017年12月经HIV抗体确证实验结果为不确定的样本共计48例，进行核酸检测，并与抗体随访检测结果进行比较。结果：48例中，有23例检出HIV核酸。其中成功随访19例，随访过程中18例HIV抗体阳转，1例带型有进展但不满足诊断标准。被访者WB条带在2周随访时均出现明显变化。核酸阴性的25例，13例成功随访，WB条带无进展或阴性。结论：有条件开展HIV核酸检测的地区，对HIV抗体不确定者宜采用核酸检测尽早诊断；无核酸检测条件的地区，对HIV抗体不确定人群的随访间隔宜缩短至２周。
[关键词]：艾滋病病毒感染者/艾滋病病人；蛋白免疫印迹试验；结果不确定；核酸诊断
Feasibility study of nucleic acid diagnosis when HIV antibody detection results are uncertain
[ Summary] Objective: To explore the feasibility of HIV nucleic acid detection for diagnosis of HIV/AIDS patients and provide evidence for the development of new detection strategies. Methods: 48 cases were confirmed by HIV antibody from January 2016 to December 2017. The results were compared with those of antibody follow-up. Results: HIV nucleic acid was detected in 23 out of 48 cases. Among them, 19 cases were successfully followed up. During the follow-up process, 18 cases of HIV antibody turned positive, and 1 case had progress but did not meet the diagnostic criteria. WB of the respondents showed significant changes in 2 weeks of follow-up. There were 25 cases with negative nucleic acid, 13 cases were successfully followed up, and WB had no progress or negative. Conclusion: In areas where HIV nucleic acid detection is possible, it is advisable to use nucleic acid detection as early as possible for those who are uncertain about HIV antibodies. In areas where there is no nucleic acid detection condition, the follow-up interval for the population with uncertain HIV antibodies should be shortened to 2 weeks.
[ Key words] :: People living with HIV/AIDS; Protein immune imprinting test; Uncertainty of outcome; Nucleic acid diagnosis
目前，蛋白印迹试验(Western blotting，WB)是国内艾滋病确证实验室主要的确证方法。抗体检测也一直作为HIV/AIDS诊断的“金标准”。根据确证试验结果，检测报告可分为3种:HIV-1抗体阳性、HIV-1抗体阴性、HIV-1抗体不确定。近年来，随着艾滋病检测咨询服务不断扩大，艾滋病筛查检测量的快速增加，HIV-1抗体不确定结果的数量也不断增加。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆据相关文献报道[1]，WB试验中出现“HIV抗体不确定”的结果约占确证试验检测数的10%～20%。根据《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》，HIV抗体不确定结果者，要求被检者1个月后随访复检，给被检者造成巨大的精神压力，更延误了HIV感染者的尽早诊断，造成部分晚期艾滋病患者不能及时获得抗病毒治疗而病情加重，同时增加传播风险。本研究将核酸检测引入WB不确定结果的研究，以期为HIV早期诊断策略提供新思路。
1材料与方法
1.1样本 2016年1月-2017年12月经HIV抗体确证实验结果为不确定的样本共计48例，经随访获得病毒载量和CD4+T淋巴细胞检测结果。采集并分离患者血清用于抗体复检和WB确证，随访采集的外周静脉血4 ml～5 ml，用乙二胺四乙酸二钾(EDTA－K 2)抗凝管收集，于24 h内检测CD4+T淋巴细胞绝对计数，抗凝血采集6h内常规离心分离血浆，－80℃保存用于病毒载量检测。所有患者的流行病学资料下载自全国艾滋病综合防治信息系统。
1.2方法 用全自动酶联免疫荧光系统(mini VI-DAS)和胶体硒法，对所有送检初筛阳性标本做初筛复检，复检结果阳性的标本用WB进行确认实验，对检测结果为不确定者进行随访检测，分析条带进展情况，并进行核酸检测。VIDAS检测试剂盒使用生物梅里埃公司(法国Biomerieux)生产的VIDAS HIV DUOUltra抗原抗体诊断试剂盒；胶体硒法使用Alere Medical公司的Determine HIV-1/2；确证实验采用新加坡GenelabsDiagnostics HIV-1及HIV-2检测试剂盒；核酸检测采用NucliSens EasyMAG核酸提取系统和NucliSens EasyQ检测系统。CD4+T淋巴细胞绝对计数采用美国贝克曼公司的COULTEＲEPICS XL型流式细胞仪进行。实验过程严格按照各试剂盒说明书进行操作。结果判断依据《全国艾滋病检测技术规范(2009年修订版)》执行。HIV抗体不确定判定标准为抗体WB实验出现HIV抗体特异性条带，但不足以判定阳性者。
2 结果
48例中，有23例检出HIV核酸。其中成功随访19例，随访过程中18例HIV抗体阳转，1例带型有进展但不满足诊断标准。被访者WB条带在2周随访时均出现明显变化。核酸阴性的25例，13例成功随访，WB条带无进展或阴性。
3讨论
目前国内艾滋病确证实验室在HIV/AIDS诊断时，主要还是以HIV抗体检测结果为判断依据，出现不确定的结果有方法学上的原因，也有被检测者自身的免疫状况的影响。HIV初次感染人体后要经历2个月～3个月的HIV感染急性期，部分患者体内尚未产生抗体或者产生抗体的水平很低，抗体检测无法得到明确的诊断结果[2]。而急性期患者体内可检测到很高的病毒载量，因此核酸检测完全可对窗口期感染者做出明确的诊断。在本研究中，成功随访的19例 ＷＢ结果不确定、核酸阳性者中，18例HIV抗体发生阳转，提示，ＷＢ结果不确定的样本可以直接通过核酸检测结果进行诊断，核酸阳性即可报告阳性。在临床实践中，HIV 核酸检测有定性和定量两类，前者用于 HIV 感染的辅助诊断，后者常用于监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效果。其定性检测通常根据扩增产物的电泳图像判定结果，阳性结果还要进行核酸序列测定来确定[3]：①HIV核酸检测阴性,只可报告本次实验结果阴性，不可排除HIV感染；②HIV核酸检测阳性,可以作为艾滋病病毒感染的辅助诊断指标，不单独用于艾滋病病毒感染的诊断；③在核酸定性检测结果报告时，操作人员应注明所使用的引物序列，以及所反应的条件。定量检测的主要方法包括：第一、通过生化仪器的读数报告结果，应标注该结果是在使用什么试验方法，以及所收集的样品量和样品种类；第二、当试验测定的结果明显低于最低检测限的状态下，应标注最低检测限的水平状态。目前由于HIV核酸检测的成本较高，在感染早期或疾病终末期作为 HIV/AIDS 的诊断依据方面的应用较少，今后通过增大样本量，积累相关案例，为核酸检测在 HIV-1感染诊断中的广泛应用提供更多参考。本研究认为，有条件开展HIV核酸检测的地区，对HIV抗体不确定者宜采用核酸检测尽早诊断；无核酸检测条件的地区，对HIV抗体不确定人群的随访间隔宜缩短至２周。
[参考文献]
[1]段星,冯霞,王继宝,等.HIV抗体检测结果不确定时应用核酸诊断的可行性研究[J].中国艾滋病性病,2014,20(11):815-817.
[2]刘昱慧,洪航,傅小红.核酸检测在 HIV 抗体不确定样本辅助诊断中的应用[J].中国卫生检验杂志,2016,26(18):2611-2613.
[3]刘春华,孙国清,薛秀娟,等.抗体检测与核酸检测在HIV诊断中的优势分析[J].中医临床研究,2014,6(15):114-116.
论文作者:闫桂敏
论文发表刊物:《中国研究型医院》2018年5卷5期
论文发表时间:2019/4/8
标签：核酸论文; 抗体论文; 不确定论文; 确证论文; 艾滋病论文; 条带论文; 阴性论文; 《中国研究型医院》2018年5卷5期论文;