仲崇玉
江苏宿迁市耳鼻喉研究所江苏宿迁223800
作者简介：仲崇玉（1957-），男，汉族，江苏宿迁市沭阳县人，本科学历，副主任医师，研究方向：拟将本药成为药典规范性、纯中药治疗中耳炎的抗菌药物，作者仲崇玉一直从事耳鼻喉科研究治疗专业30余年，宿迁市耳鼻喉研究所所长，任江苏省中医学会耳鼻喉专业委员会委员。【摘要】目的：将速效耳净灵配成1%、10%、30%三种浓度分别在120只豚鼠中耳局部应用7d后观察21d，作形态学和听觉检查。结果：用高浓度30%的豚鼠扫描电镜5耳（5/15），出现基底回外毛细胞部分融合变性，但无明显缺失，内毛细胞、指细胞、柱细胞形态学上无改变，停药后观察21d之豚鼠ＡＢＲ反应阈提高20分贝以上(8耳/16耳)。但用低浓度1、10%的豚鼠耳蜗铺片及扫描电镜无明显改变，ＡＢＲ反应阈亦无提高，结论：选用低浓度的速效耳净灵将成为高效基本无毒的纯中药抗生素滴耳液。
【关键词】速效耳净灵;耳毒性;耳蜗;毛细胞;Ｃorti氏器;ＡＢＲ反应阈
【中图分类号】R1358【文献标识码】B【文章编号】1674-8999(2013)08-0232-02
化脓性中耳炎是耳科常见病，多发病。它的主要致病菌有金黄色葡萄球菌、绿脓假单孢杆菌、肺炎球菌、链球菌等。中耳局部用药是主要治疗方法之一，尤其是慢性化脓性耳炎局部用药的效果远远超过全身用药。目前局部用药甚少，大多数抗生素滴耳液都具有耳毒性或潜在的中耳或内耳毒性，而有的抗生素抗菌能力已明显下降。因此寻找既有很强的广谱抗菌活性又对中耳、内耳没有毒性的，选择中耳局部用药是当务之急。
速效耳净灵是具有杀菌性的纯中药抗生素，对革兰氏阳性、阴性菌都有广谱高效抗菌活性，尤其对绿脓假单孢杆菌及溶血链球菌和金黄色葡萄球菌很强的抗菌作用，超过其它β—内酰胺类和氨基甙类抗生素。中耳局部使用速效耳净灵是否有耳毒性的纯中药制剂内尚未见报道，本次实验的目的是在豚鼠中耳局部应用不同浓度的速效耳净灵，观察中耳、内耳功能和形态学的改变。
1材料与方法
11药物选择：速效耳净灵为宿迁市耳鼻喉研究所制剂室生产提供，批号011020，每瓶含１g，含总生药量为0199g／mL。本项目是江苏省333工程研究成果。
12动物选择及分组:选用健康、纯白豚鼠120只雌雄兼用，耳廓反射灵敏，鼓膜及外耳道正常，体重为120～300g，分三批由南京医科大学实验动物中心提供，合格证号：苏动01145。将每批40只随机分２组，见表1。
表1动物分组情况表
用药浓度组别动物数用药天数停药后观察天数1%速效耳净灵
13给药方法:听泡开窗：每只豚鼠在腹腔内注氯氨酮50mg/kg在全麻无菌操作下行左耳后切暴露听泡，用高速手术电钻于听泡偏下钻孔，直径为4mm,从孔内可窥见鼓膜、鼓岬、园窗龛、听骨链等。在孔内滴入速效耳净灵3~5滴后插入直径为35mm的硅胶管，并固定在颞肌上，软组织依次缝合。
用法：1次/d，每次用注射针管交药液注入硅胶管内02~03ml，每次用药前后回吸观察管内是否有分泌物，滴药7d后拔管、观察。
14观察内容：①听觉反应阈：可将D组及F组有豚鼠在置管前和停药后观察21d后分别在全麻下作ABR测定。②生理反射和一般生态观察。③扫摘电镜检查和耳蜗铺片及光镜检查。④观察方法
每组动物在结束观察次日，在全麻下快速断头，取听泡的部分用05%硝酸银灌注或用Nachlas氏四唑盐法灌注硝基四氮唑兰琥珀酸钠溶液、温溶、福尔马林固定，并在解剖显微镜下取基底膜铺片，用相差显微镜观察。
部分豚鼠可用2%戊二醛灌注后浸入该溶液中置4℃冰箱内固定，次日在解剖显微镜下剥去骨性耳蜗壁，并保留蜗轴及基底膜制成扫描电镜标本，以右耳为每组豚鼠为对照组。
2结果
21一般情况:A、B、C、D组豚鼠在术后清醒是活动正常，无眼球震颤，耳廓反应正常，在观察过程中耳廓反射灵敏，术后第2d耳后硅胶管内有少量清水样物，到３~８d后渗出物消失。Ｅ、Ｆ组术后清醒时５只豚鼠不进食，呕吐现象，术后第2d ２只死亡，其余３只症状消失，术后第2d耳后硅胶管内有透明无色液体，有５只为粉红色液体，症状１４~２１d消失。Ｅ组４只豚鼠、Ｆ组３只豚鼠耳廓反射明显迟钝，实验过程中死亡及脱管未计划在内。具体标本完成情况见表２。
22Ｄ组、Ｆ组ＡＢＲ反应阈的变化情况:两组豚鼠在用药前ＡＢＲ反应阈的均值左耳为2408是士４.０bBSPL，右耳为2391±381dBSPL，双耳反应阈无统计差异（Ｐ＞０.０５）。右耳为用药耳，反应阈值见表３。右耳为对照耳，用药后听觉反应阈无明显变化。
表２标本完成情况
231扫描电镜观察：A、B、C、D组左18耳，右2耳扫描电镜观察，c o r t i氏器之内，外毛细胞大小相等排列整齐。纤毛规则排列，仅见D组左1耳（1耳/16耳）基底回近卵圆窗处第二列外毛细胞的静纤毛有转位现象，但该豚鼠之ABR反应阈用药前后无明显差异。
E、F组在扫描电镜观察，右3耳，左6耳corti氏器内，外毛细胞形状，排列正常，指细胞、柱状细胞亦正常。左4耳（E组2耳、F组2耳）基底回近卵圆窗处纤毛细胞稍有融合，无明显的缺失现象，病变只局限在基底回和第二回起始部，第3、4回基本正常，F组5例之ABR反应阈分别提高25和30分贝。
232耳蜗铺片：A、B、C、D组左16耳，右2耳作05%AgNO3染色，在相差显微镜下观察可见毛细胞境界清晰，纤毛排列整齐，柱细胞和指细胞（Deiterˊs细胞）镶嵌在毛细胞之间,用Nachlas氏四唑盐法染色，左18耳，右2耳，内，外毛细胞染成兰色，细胞内染色双甲替颗粒，大而弥漫均匀，其他细胞未染色，说明内、外毛细胞琥珀酸脱氢酶活性正常，反映出毛细胞有氧代谢正常［1］。
E、F组用05%AgNO3染色右2耳均属正常，但左耳中有2耳基底回外毛细胞近卵圆窗处有毛细胞稍有融合现象，无明显的缺失现象，内毛细胞、柱状细胞正常。左10耳中有1耳基底回近卵圆窗处外毛细胞第三列部分细胞变形双甲替颗粒减少而细小，其它内、外毛细胞均属正常，说明该处的琥珀酸脱氢酶的活性差，有氧代谢发生障碍，该豚鼠左耳ABR反应阈提高30分贝。
233解剖显微镜下观察：A、B、C、D组听泡骨质透明度较右侧差为乳白色，听骨链完整，活动度良好，鼓膜正常，E、F组听泡骨质透明度差为牙黄色，听骨链粘膜增厚，活动度正常，鼓膜增厚混浊，无穿孔无出血。
3讨论
本次实验证实局部使用速效耳净灵低浓度1%、10%无明显的耳毒性。听觉功能和内耳形态学上没有发生变化。D组1例扫描电镜发生底回外3有静毛细胞转位现象，可能是正常的变异［2］。使用高浓度30%时出现耳毒性，左耳局部滴用30%速效耳净灵8耳/16耳，ABR反应阈提高20分贝以上，4耳/12耳corti氏器底回外毛细胞纤毛部分融合，但无明显缺失现象，通过SDH染色底回近卵圆窗部分外毛细胞第三例变形，双甲替颗粒减少减小，说明该处有氧代谢发生障碍。因此可以说明中耳局部使用速效耳净灵低浓度无耳毒性，随着浓度梯度的增加耳毒性可逐渐增加。
速效耳净灵比其应用氨基糖苷类药物对内耳毒性低的多，即使高浓度30%局部应用后仅表现为5只/15只豚鼠出现基底回外毛细胞部分融合变性，但无明显的缺失现象，指细胞、柱细胞形态学上均无改变。而局部应用03%庆大霉素可出现耳毒性，仅使用14d，Deiter氏细胞指突出现增生，而取代了毛细胞的位置，局部应用4%庆大霉素就出现Cortis器各回内、外毛细胞严重损坏［3］。
速效耳净灵的抗菌谱与引起中耳感染的细菌是相吻合的，对金黄色葡萄球菌的MIC90为16mg/L,对绿脓假单孢杆菌mic90为4mg/L,肺炎球菌MIC90为006~012mg/L等［4］。1%、10%速效耳净灵局部滴耳，对诸菌具有很强的抗菌能力。因此低浓度的速效耳净灵有可能成为治疗化脓性中耳炎高效低毒的纯中药抗生素滴耳液。
参考文献
［1］翟所强,顾瑞,李兴启.豚鼠爆发后生理及耳蜗组织化学观察［J］.中华耳鼻喉科杂志,1987,22(3):210213
［2］顾之平.豚鼠耳蜗毛细胞静纤毛束变异［J］.中华耳鼻喉科杂志,1993,28(3):8283
［3］玉中耳局部应用庆大霉素与内耳毒性观察［J］.中华耳鼻喉科杂志,1990,25(1):5253
［4］戴自英.主编.临床抗菌药物学［M］.人民卫生出版社.
论文作者:仲崇玉
论文发表刊物:《中医学报》2013年8月第28卷供稿
论文发表时间:2014-3-21
标签：豚鼠论文; 速效论文; 毛细论文; 中耳论文; 局部论文; 毒性论文; 基底论文; 《中医学报》2013年8月第28卷供稿论文;