脂多糖对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响论文_高占民1李凤玉2万立2曹藏柱2魏淑霞2纪少军2曹怀宇2

高占民1李凤玉2万立2曹藏柱2魏淑霞2纪少军2曹怀宇2

尚培中2张河2王耀志3马继红4石冬2秦玉泉2

(1赤城县妇幼保健院河北张家口075000；

2解放军第二五一医院河北张家口075000；

3张家口市口腔医院河北张家口075000；

4张家口市下花园煤矿医院河北张家口075000)

基金项目：国家自然科学基金资助项目（30371467）

作者简介：高占民（1970-），男，河北张家口人，医学学士，主要从事感染与创面修复。【摘要】目的:研究脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响，以阐明LPS在皮肤创伤愈合中的可能作用。方法:体外培养正常人皮肤成纤维细胞，通过3H-脯氨酸掺入法观察不同浓度的LPS 0、0005、001、005、01、05和10μg/ml对成纤维细胞胶原合成的影响。结果:LPS刺激浓度在0005μg/ml时，成纤维细胞胶原蛋白合成能力增加，且与剂量浓度呈正相关；当LPS浓度为05μg/ml时，对成纤维细胞胶原合成促进作用开始减弱；当浓度达到10μg/ml时则呈现抑制效应。结论:在一定浓度范围内LPS促进成纤维细胞胶原合成，这些结果表明LPS在皮肤创伤愈合可能具有重要作用。

【关键词】脂多糖;胶原;成纤维细胞;创面愈合

【中图分类号】Q516； R335【文献标识码】A【文章编号】1003-5028(2013)05-0052-02

烧伤创面修复过程较复杂，从最初的炎症反应，到后期的细胞增殖、创面收缩和胶原代谢等构成创面修复的整个环节。作为创面修复的主要细胞，成纤维细胞在创面修复过程中起着至关重要的作用［1］，其生物学行为的变化参与创面修复的整个过程。研究证实，细菌内毒素（lipopolysaccharide,LPS）可以刺激人皮肤成纤维细胞增殖［2］。本实验研究LPS对人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响。

1材料与方法

11标本来源:取20例整形患者的皮肤做标本，男11例，女9例；年龄2～56岁，平均（20±15）岁。

12主要试剂及仪器:Dulbecco改良的培养基；LPS E.coli055:B5；小牛血清；3H-脯氨酸；酶联免疫标记仪。

13成纤维细胞培养:采用组织块法进行原代培养［3］。

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14LPS作用浓度:用4%基础培养基稀释LPS，依次稀释至0、0005、001、005、01、05和10μg/ml ［2］。

15成纤维细胞胶原合成的检测:以含10%FCS的DMEM培养基将处于对数生长期的成纤维细胞的制成1×104/ml的悬液，接种于96孔平底培养板中，每孔200μl，细胞贴壁后，更换预先配置的LPS工作液。第2天将3H-脯氨酸掺入（掺入量05μCi/孔）稳态、融合的单层培养成纤维细胞中［4］，第3天采用胃蛋白酶消化法检测培养液中胶原量。

16统计学处理:采用SPSS 130统计程序包进行单因素方差分析。P＜005表示差异具有显著性意义。

2结果

LPS浓度在0005μg/ml至01μg/ml时，随着LPS刺激浓度的增高，成纤维细胞胶原合成量也逐渐增加；当LPS浓度为05μg/ml时，成纤维细胞胶原合成能力降低，当LPS浓度达到1μg/ml时，成纤维细胞胶原合成明显受抑制，并明显低于正常皮肤成纤维细胞胶原合成。

3讨论

成纤维细胞做为创面修复的主要细胞，其增殖能力和胶原蛋白合成状况决定着创面修复的结局。成纤维细胞通过分泌胶原蛋白等细胞外基质和增殖而影响创面修复进程。临床工作中发现，烧伤创面感染愈重创面修复愈慢，既往研究证实，细菌LPS影响正常人皮肤成纤维细胞的增殖［2］。且创面修复的进程与成纤维细胞增殖和胶原合成密切相关，这是整个创面修复界专家一致认同的观点。但临床上尚未就创面修复的影响因素做出定论。因此，研究LPS对成纤维细胞胶原合成的影响，对阐明LPS对创伤愈合的影响具有重要意义，进而对影响创面愈合的因素也做一阐述。

本实验研究显示，在一定浓度范围内LPS对成纤维细胞胶原合成呈刺激作用，而超过一定浓度则呈现抑制作用。LPS作用后成纤维细胞的生物学行为发生改变，进而影响胶原蛋白合成和分解代谢，从而影响创面修复的进程和结局，这一点也与临床创面处理过程中的表现相一致，但具体机制尚不清楚，尚需进行深入研究。

参考文献

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［2］杨红明,付小兵,柴家科,等.脂多糖对皮肤纤维母细胞和表皮细胞的影响［J］.解放军医学杂志,2000,25:428-429

［3］Babu M,Diegelmann R,Oliver N.Fibronectin is overproduced by keloid fibroblasts during abnormal wound healing ［J］.Mol Cell Biol,1989,9:1642-1650

［4］董波,陈肖华,张浩,等.一种改进的用于测定细胞周期的细胞制备方法［J］.军事医学科学院院刊,2002,26:124-129

［5］李从青,姚洁,刘长明,等.内毒素对妊娠期糖尿病患者外周血单核细胞TLR-4 mRNA及NFκ-B mRNA表达的影响［J］.安徽医科大学学报,2011,11:50-53

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论文作者:高占民1李凤玉2万立2曹藏柱2魏淑霞2纪少军2曹怀宇2

论文发表刊物:《河南中医》2013年4月第1期供稿

论文发表时间:2014-3-18

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