樊都 吴勇 （都江堰市人民医院 四川都江堰 611830）
【摘要】目的 探讨CD11b在慢性阻塞性肺疾病患者中的表达改变与免疫功能改变关系。方法 研究纳入都江堰市人民医院COPD患者10例（年龄60.12±7.10），非COPD患者10例（61.12±7.11）作为对照组。利用外周血2ml，进行羟基淀粉分离白细胞，孵育中性粒细胞CD抗原的抗体。用流式细胞仪（Flow Cytometry）检测样品。测得抗原标记的目标细胞数和抗原表达强度。统计资料通过SPSS 17 软件包完成。对COPD与非COPD进行方差分析。结果 COPD患者成熟粒细胞表面抗原CD11b表达强度与非COPD患者比较中达到了统计学意义（P=0.012）。结论 本研究发现COPD患者CD11b表达较非COPD患者CD11b表达强度高，提示与COPD患者免疫功能改变有关。
【关键词】 慢性阻塞性肺疾病 中性粒细胞 抗原表达
【中图分类号】R563 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）33-0082-02
The changed CD11b expression of the chronic obstructive pulmonary disease
Fan Du Wu Yong
【Abstract】 OBJECTIVE: To explore the ralationship of CD11b exprssion and the immunologic function in the chronic obstructive pulmonary disease.METHODS: The 10 COPD patients(age 60.12±7.10)and10 non-COPD patients (age 61.12±7.11) from the medical ward of Dujiangyan republic hospital,.The leukocytes were separated with hydroxyl starch form 2ml peripheral venous blood. The CD 11b antigen of granulopoesis were incubated with fluorescence-labeled CD antibodies. Samples were detected by flow cytometry. All statistical data were completed by SPSS 17 package. Using variance analysis, COPD patients, non-COPD patients were compared between groups.RESULTS: There has a notable statistical significance of the expressive fluorescence intensity of CD11b antigen bewteen COPD group and control group(P=0.012).Conclusion：The expressive fluorescence intensity of CD11b antigen of COPD patients was higher；It suggests that the COPD patients have changed in immune function.
【Key Words】 Chronic obstructive pulmonary disease neutrophile granulocyte antigen exprssion
中性粒细胞在机体感染的防御中起到很重要的作用。中性粒细胞在血液的非特异性细胞免疫系统中起着十分重要的作用，它处于机体抵御微生物病原体，特别是在化脓性细菌入侵的第一线，当炎症发生时，它们被趋化性物质吸引到炎症部位，并吞噬水解病原菌。CD11b在髓系和NK细胞中表达，尤其在成熟中性粒细胞中表达较高，其作为中性粒细胞粘附功能，主要表达在成熟的中性粒细胞[1,2]。本研究希望通对COPD患者外周血中性粒细胞粘附功能（CD11b的表达）进行，探讨其与中性粒细胞功能降低在慢性阻塞性肺疾病患者中的重要意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象的来源
研究对象源于都江堰市人民医院普通内科，从2012年11月至2013年8月住院的COPD患者共10例，其中男6例，女4例，年龄50岁?80岁，平均62岁。健康对照组10例，男6例，女4例，年龄范围52岁?78岁，平均年龄61岁。
1.1.1 纳入标准：COPD组必须符合中华医学会2007年慢性阻塞性肺疾病诊治指南修订版的诊断标准，处于稳定期的病人。
1.1.2 排除标准：1)先天性或后天性免疫系统疾病、终末期疾病、造血系统疾病、支气管哮喘、支气管扩张、肝肾疾病。2) 3个月内未接受任何免疫抑制剂、免疫调节剂或其它影响免疫功能及造血的药物。
1.2 实验材料
1.2.1 试剂：
1）羟基淀粉（德国费森尤斯）
2）流式荧光抗体：Becton Dickinson (BD) Bio-sciences/Pharmingen： CD11b-PE，7-AAD
1.2.2 主要仪器设备：
台式高速离心机（美国Beckman）
台式低速离心机（德国Sigma）
旋涡混匀器（江苏海门其林医用仪器厂）
流式细胞仪（Becton Dickinson）
1.3 外周血白细胞分离及抗原标记
1.3.1 从外周静脉抽取2ml静脉血，放入EDTA抗凝剂的抗凝管中；分离白细胞：取羟基淀粉与外周全血1:1于10ml离心管中颠倒混匀，常温下静置1h；弃上清液，转入离心管中，于高速离心机1800×r转速，离心5min；倒掉上清液，加入0.4%EDTA的PBS缓冲液1:1与管中分离细胞混合均匀，试管中加入2mlNH4cl裂解液，裂解红细胞10min；低速离心机3500×r转速，离心3min；再次弃上清液，置入4℃冰箱中备用。将CD11b-PE标记分离细胞。
1.3.2 流式检测前的准备：检测流式细胞仪液流，等待液流达到稳定颗粒状时方可用于检测；用0.4%EDTA-PBS将孵育后的样本放入高速离心机1800×r转速，离心5min，然后转入流式管中，振荡摇晃使混合均匀，放置在阴凉避光处准备上样。
1.4 数据处理
（1）实验获得数据后，使用FCS Express Version 3分析软件对数据进行分析整理；SPSS 17 database对数据进行统计学分析。
（2）采用SPSS 17 database 对CD11b-PE平均荧光强度数据资料进行处理。
1.5 统计学分析
数据以均数±标准差表示，采用SPSS17.0统计软件包进行分析。对照组、COPD组采用方差分析，P值<0.05为有统计学意义。
2 结果
成熟中性粒细胞检测结果
1 成熟中性粒细胞流式图（图1）。
图1流式细胞术二维图；其中（A）圈定的中性粒细胞群，（B）圈定的7-AAD阴性细胞，（C）CD34-细胞，（D）CD11b阳性细胞。
2 成熟中性粒细胞CD11b荧光表达强度流式直方图（图2）
CD11b-PE荧光表达强度值在COPD组表达量为1051.81±526.09与对照组荧光强度616.01±323.21，值比较p=0.012有统计学差异。
3 讨论
1.中性粒细胞的分化成熟过程与年龄的关系
老年人真菌和细菌感染后死亡率急剧上升[1]，这与老年人的免疫功能密切相关。基因缺陷和接受化疗后的中性粒细胞减少症患者感染细菌和真菌的机会大大增加[2]。说明了中性粒细胞在感染免疫中的重要作用。
慢性阻塞性肺疾病主要表现为不完全可逆性的气流受限，引起气流受限的原因是不同程度的气道狭窄，平滑肌肥大和呼吸性支气管纤维化，气肿的肺失去弹性回缩力[3]。Barosi [4]等人发现COPD稳定期病人与正常肺功能的对照组比较外周循环中性粒细胞产生更多的呼吸爆发反应，表达更多的粘附分子，其中包括CD11b。磷酸化的CD11b能引起NADPH氧化酶的激活，激活之后的NADPH氧化酶与CD11b交联导致中性粒细胞的呼吸爆发作用[5,6]。我们的研究发现CD11b的表达在COPD患者（1051.81±526.09）与老年对照组（616.01±323.21）之间有统计学差异，这与Noguera等发现是一致的。Rebuck等的发现新生儿、孕妇和老年人的CD11b表达水平要高于一般人水平[7]。随着年龄增加肺功能下降，其中最大的病理生理变化就是肺的弹性回缩能力，胸壁的顺应性和呼吸肌力量都不同程度的降低，这些变化伴随着肺间质中肺泡的扩大。老年人肺功能残气量的增加，导致呼吸负担加重，呼吸肌疲劳，增加了感染的机会[8]。COPD 患者与健康人和吸烟非COPD者相比中性粒细胞的呼吸爆发作用增强了。CD11b的表达也相应增高。长期吸烟的而肺功能正常的人呼吸爆发作用也增强了。说明了在COPD患者中中性粒细胞对促炎因子的反应性增强了，这样能募集更多的中性粒细胞到患者肺部[9]。其他的研究证实COPD患者的呼吸爆发作用增强，但是CD11b的表达是正常的[10]。Niwa等的研究得到了相反结果[11]。他们通过研究发现60岁-70岁的老年人的中性粒细胞趋化功能和呼吸爆发功能与青年人相比都降低，但是80岁以上老年人却没有明显变化。当接收到趋化信号后，滚动的中性粒细胞通过整合素分子与内皮细胞结合，然后通过内皮细胞间歇粘附游走到感染部位。老年人中性粒细胞的粘附性没有被削弱。在经过fMLP，酵母多糖，PMA或钙离子刺激后，老年人和年轻人的中性粒细胞在粘附塑料，凝胶，牛的大动脉和内皮细胞的能力没有差别[12,13]。中性粒细胞与内皮细胞或凝血细胞的粘附功能正常或增强，但是这种作用是否使中性粒细胞在活体细胞内的移动性增强还不清楚。
目前对COPD患者的中性粒细胞研究大多基于肺泡内的中性粒细胞，而对外周血中性粒细胞研究甚少，本研究表明外周血中性粒细胞CD11b表达增强，与之前的大多数研究结果一致，但中性粒细胞粘附功能和年龄、性别等因素存在关系，也为以后进行外周血中性粒细胞功能研究提供一点思路。
参考文献
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论文作者:樊都,吴勇
论文发表刊物:《医药前沿》2013年11月第33期供稿
论文发表时间:2014-1-13
标签：粒细胞论文; 患者论文; 细胞论文; 功能论文; 呼吸论文; 流式论文; 统计学论文; 《医药前沿》2013年11月第33期供稿论文;